动物血液原虫病病原检查技术

动物血液原虫病病原检查技术一、试验目的要求把握动物血液原虫病的血液涂片技术和染色方法；正确推断各种常见血液原虫的形态特点。二、试验器材〔一〕仪器设备生物显微镜〔带油镜镜头、载玻片、注射针头、剪刀、染色缸〔二〕试剂姬姆萨氏染料、甘油、甲醇、香柏油〔三〕试验动物鸡〔四〕示教标本伊氏锥虫双芽巴贝斯虫环形泰勒虫卡氏住白细胞虫沙氏住白细胞虫三、试验方法、步骤和操作要领〔一〕姬姆萨氏染色液的配制姬姆萨氏染色液原液配方。姬姆萨氏染色粉 0.5g中性纯甘油 25ml无水中性甲醇 25ml姬姆萨氏染色液原液配制过程。先将姬姆萨氏染色粉置研钵中，加少量甘油充分研磨，再加甘油再研磨，直至甘油全部加完为止。将其倒入棕色小口中，在研钵中参加少量甲醇以冲洗甘油染液，冲洗液仍倒入上述瓶中，25ml甲醇全部用完为止。塞紧瓶盖，充分摇匀，而后将瓶置于6524h3～5d，并不时摇动，然后过滤到棕色小口中，即为原液。〔二〕血液涂片的制作及染色血液涂片的制作。薄片法〔适合于观看红细胞内虫体，如巴贝斯虫。①用消毒注射针头刺破鸡的翅下静脉。②用干净载玻片的一端，从鸡的翅下静脉穿刺处接触血滴外表，蘸取少量血液。③另取一块边缘光滑的载玻片，作为推片。先将此推片的一端置于血滴的前方，然后稍向后移，触及血滴，使血液均匀分布于两玻片之间，形成一线。30～45°角，平稳地向前推动，使血液接触面散布均匀，即成薄的血片。⑤抹片完成后，马上置流淌空气中枯燥，以防血球皱缩或裂开，并加甲醇固定，待干。厚滴法〔适合于观看血浆内虫体，如伊氏锥虫。1～2滴置干净载玻片上。②用另一块载玻片之角，将血滴涂散至直径1cm即可。③置室温中待其自行枯燥(1h之久，否则血膜附着不牢，染色时易脱)。④染色前先将血片置于蒸馏水中，使红细胞溶解，血红蛋白脱落，血膜呈灰白色为止，再进展染色。血液涂片的染色过程。2min。10130min2∶110min。血片取出后，用干净的水冲洗。待干镜检。〔16-1〕图16-1 血液抹片的制作及染色流程图四、试验留意事项配制染色液时姬姆萨氏染料必需充分研磨。采血前先用酒精棉消毒待干，以免皮屑污染血片和酒精溶血。取血滴时必需在针头刺破后流出的表层血液用玻片快速蘸取，以免血液凝固。留意在病畜消灭高温期，未作药物处理前采血，以提高虫体检出率。涂片时血膜不宜过厚，使红细胞均匀分布于玻片上。血片必需充分枯燥后再用甲醇固定，以免血膜脱落。五、试验报告如何制作染色效果好且无杂质污染的血液涂片？试作分析、阐述。附：参考资料家畜常见血液原虫的形态特征描述。伊氏锥虫。伊氏锥虫寄生于动物血浆内，虫体呈纺锤或柳叶状，体长18～24µm，宽1～2µm。前端比后端更尖。经姬姆萨染色后，虫体呈淡蓝色。在显微镜下可观察以下几局部构造：①原生质：浅蓝色局部。②核：在虫体中部呈紫红色椭圆形。③副基体：在虫体后端呈紫红色的小圆点。④波动膜：在虫体的一侧呈波状。⑤鞭毛：在虫体后端，从付基体四周的毛基体开头围绕波动膜边缘，直到虫体的前端游离，呈瘦长鞭毛状〔16-216-3〕16-216-21.核23.副基体4.生毛体56.空泡7.鞭毛16-3血液涂片中的锥虫双芽巴贝斯虫。双芽巴贝斯虫寄生在红细胞内。虫体较大，有梨形、环形、椭圆形、变形虫形等。典型虫体呈双梨形，细的一端联在一起成锐角排列。虫体大于红细胞半径，经姬姆萨染色后，原生质浅蓝色，边缘较深，有二团紫红色的染色质〔16-4〕图图16-4 血液涂片中的双芽巴贝斯虫环形泰勒虫。环形泰勒虫寄生在牛的淋巴细胞、巨噬细胞及红细胞内。配子体呈小环形，短棒状或逗点状。在每个红细胞中通常有1～5个虫体，大小为0.7～2.9µm，染色后原生质呈浅蓝色，染色质呈紫红色〔16-5〕裂殖体，又称石榴体，有不同外形和大小，存在于淋细胞的胞浆中或淋巴液中。通常可看到浅蓝色的原生质背景上有暗紫色数目不等的染色质核〔16-6〕16-516-5泰勒虫配子体图16-6 泰勒虫裂殖体〔石榴体〕家禽常见血液原虫的形态特征描述。卡氏住白细胞虫。卡氏住白细胞虫配子体寄生在鸡的血细胞内。配子体刚侵入红细胞时呈圆点状或逗点，每个红细胞内可有～3虫体〔图16-。随着虫体的发育长大，红细胞的胞浆及胞核萎缩消逝，配子体变为近圆形，大小为15.5×15.0μｍ；有一紫红色的核仁〔图16-。图16-7 卡氏住白细胞虫第Ⅰ期配子体图16-