分子生物学实验室工作手册

分子生物学实验室工作手册实验室生物安全知识234分子生物学实验室简介1分子生物学实验室工作守则常用仪器设备使用规范

分子生物学实验室简介实验室人员组成标准实验室组成

实验室人员组成博士后研究生主管研究人（简称P.I.）实验室常驻人员

技术员或研究助理

秘书或助管实验室监督、实验室安全员除此之外，实验室还有一些流动人员，如：轮转学生、暑期学生、住院医生、访问人员等PIAprincipalinvestigator(PI)istheleadscientistorengineerforaparticularwell-definedscience(orotherresearch)project,suchasalaboratorystudyorclinicaltrial.标准实验室组成暗室、消毒洗涤室、动物饲养室等实验操作室仪器分析室离心机室细胞培养室放射性核素操作室冷室标准实验室组成工作区域分区功能常用仪器配置基本操作室核酸检验区试剂储存和准备、样品制备、扩增产物分析电子天平、酸度计、台式离心机、电热恒温水槽、微波炉、电泳仪、漩涡仪、水浴摇床、恒温振荡培养箱、PCR仪、凝胶成像分析系统蛋白质检验区蛋白分离纯化和分析检测蛋白电泳系统及转印系统、酶标仪、脱色摇床、水平摇床仪器分析室贵重仪器检测区酶标仪、PCR仪、核酸蛋白分析仪细胞培养室细胞样品制备及培养超净工作台、CO2培养箱、显微镜、液氮装置、冰箱、离心机标准实验室组成工作区域分区功能常用仪器配置洗涤消毒室洗涤、消毒、制纯水或双蒸水、制冰高压灭菌锅、超声波清洗器、电热恒温干燥箱、纯水系统、制冰机离心机室离心制备样品各种离心机暗室照相、放射自显影凝胶成像分析系统、紫外透射仪冷室进行生化蛋白实验，以免蛋白或酶被破坏蛋白纯化系统、层析实验冷柜、普通冰箱、低温冰箱放射性核素操作室应用广泛，DNA测序、核酸体外标记、分子杂交等分子杂交仪、X射线曝光盒、数字式放射自显影分析仪动物饲养室饲养实验动物标准实验室组成实验室生物安全知识234分子生物学实验室简介1分子生物学实验室工作守则常用仪器设备使用规范化学试剂安全防护知识有毒化学试剂腐蚀性化学试剂易燃易爆化学试剂强氧化性化学试剂有毒化学药品可通过呼吸道、消化道和皮肤进入人体使人发生中毒现象浓硝酸、浓硫酸、过氯酸、甲醛等能够对人体或其他物品因腐蚀作用产生破坏的试剂都是腐蚀性试剂，应密封保存一般闪点在25℃下的化学试剂为易燃试剂，多为极易挥发的液体，如乙醚、汽油、苯、乙酸乙酯等。使用时不能有明火或直接加热强氧化性试剂都是过氧化物或有强氧化能力的含氧酸及其盐，使用时环境温度不要高于30℃，且应通风良好实验室化学试剂分类123实验前充分了解所用药品的性能和防护措施使用有毒气体、易挥发试剂应在通风厨中进行操作有机溶剂能透过皮肤进入人体，应避免直接与皮肤接触实验室试剂使用注意事项45剧毒药品应妥善保管，实验操作中务必戴上手套、口罩，做好保护措施，实验废品应妥善处理实验操作规范，离开实验室时要洗手实验室试剂使用注意事项实验室常用有毒药品药品危害DMSO（二亚基桠枫）是一种非质子极性溶剂，对皮肤有极强的渗透作用。EB（溴化乙锭）是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA，具有强诱变致癌性。DEPC(焦碳酸二乙酯)可灭活各种蛋白，是RNA酶的强抑制剂，潜在致癌物质，使用时应戴口罩.PMSF(苯甲基磺酰氟)神经毒素，是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂.严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。丙烯酰胺神经毒素，累积毒性，不易排毒。NN-亚甲双丙烯酰胺神经毒素，吸入粉末可破坏中枢神经系统。实验室常用有毒药品药品危害DTT（二硫苏糖醇）强还原剂，可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中操作用甲醛毒性较大且易挥发，也是一种致癌剂，易通过皮肤吸收，对眼睛、粘膜和上呼吸道有刺激和损伤作用Trizol对眼睛有刺激性，腐蚀皮肤叠氮钠有毒，阻断细胞色素电子运送系统过硫酸铵对粘膜和上呼吸道、眼睛和皮肤又较大危害性，吸入可致命。操作时戴手套、护目镜。始终在通风橱中操作。TEMED强神经毒性，操作应快速，存放时密封。甲醇有毒，能引起失明实验室常用有毒药品药品危害beta-巯基乙醇可致命，对呼吸道、皮肤和眼睛有伤害链霉素致癌，引起过敏反应SDS（十二烷基硫酸钠）对粘膜和上呼吸道有刺激作用，对眼和皮肤有刺激作用。可引起呼吸系统过敏性反应氯仿对皮肤、眼睛、粘膜和呼吸道有刺激作用，易挥发，致癌TCA（三氯乙酸）强腐蚀性TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)是一种非离子型表面活性剂，可引起严重的眼睛刺激和灼伤，可因吸入、咽下或皮肤接触而受害生物安全实验室的分级四级（BSL—4）三级（BSL—3）二级（BSL—2）一级（BSL—1）危害小中等危害高度危害，有预防治疗措施高度危害，无预防治疗措施处理对象危害程度实验室生物安全知识234分子生物学实验室简介1分子生物学实验室工作守则常用仪器设备使用规范实验室安全守则1.不要在实验室吃东西、喝酒或抽烟2.不要穿露趾鞋或短裤3.在实验室应穿实验服4.不要在实验区域以外的地方穿实验服5.不要饮用实验室用水，即使是无菌纯净水也不行6.清楚你所接触的每一个药品的组分及毒性，并遵照建议处理实验台工作礼节1.没有许可不要使用别人的试剂或缓冲液2.如果公用试剂剩下很少或快用完时，多配制或订购一些备用3.不要忽视设备的破损部分或提出警告4.不要移动周围物品或是改变试管、试剂和仪器在公共实验室区域内的位置5.不要到处乱放东西6.每部分实验做完后（最好是在试验期间）立即将台面收拾干净实验室工作态度1.请问，不是命令。实验室其他成员是合作伙伴2.不要假定任何事。3.请全部记下别人给你的指导。4.与别人预约或请求时间。5.不要移动实验室公用图书。6.不要和实验室以外的人讨论实验室人员的研究结果。实验室生物安全知识234分子生物学实验室简介1分子生物学实验室工作守则常用仪器设备使用规范设备使用基本原则1.让实验室人员演示仪器设备的使用操作，即使简单得像pH计一样。2.正常清洗、归还、整理、关闭你所用过的每一件仪器设备，不要改变设定，不要用力推那些不能动的把手和操作杆，不要忽视警报和闪光灯。3.不要在未经征求实验室领导意见的前提下订购仪器。4.使用其他实验室的仪器要特别注意协调，找到他们最合适的能为你演示仪器操作的时间，且最方便你使用的时间。5.对于实验室里的各种仪器（即使没用过）也应该了解：①它叫什么，是干什么的？②谁负责该项设备，如果有问题找谁解决？6.对于每种你使用的仪器，你也该知道：①怎样操作？②仪器手册、操作指南或实验程序放在哪里？③用完是关掉还是整天开着？④使用前是否必须预热？⑤有没有使用签名薄？7.对所有设备的警报应立即做出反应。实验室常用仪器设备常用仪器设备凝胶电泳系统移液器离心机PCR仪酶标仪生物安全柜超净工作台pH计凝胶电泳系统高压蒸汽灭菌锅液氮罐移液器离心机台式低速离心机台式高速离心机超速冷冻离心机迷你离心机显示系统驱动电机自动保护系统控制系统制冷系统真空系统（超速离心机）离心机部件离心机部件离心管的选用离心管种类使用说明玻璃离心管绝不能在高速离心机或超高速离心机上使用PA管可高温消毒，化学性质最稳定，但高温下易变软PC管硬度大，耐高温，对强酸、强碱、酒精、油及其他有机溶剂等敏感，常用于5万rpm以上离心PCR管与PC管相似，但比其更硬，在0~20℃使用，不可高温消毒PE管对丙酮、盐酸、醋酸稳定，但高温下易变软，离心时需装满PP管耐高温，化学性质稳定，但低温下易脆，不可在4℃以下离心不锈钢管耐热，抗化学腐蚀，可高温消毒，但较重且昂贵离心机使用注意事项

1、离心机在运转时，不得移动离心机。2、安放离心机的地面应坚实平整，二只调平螺杆调节使离心机与地面接触和均匀受力，以免产生振动。3、离心机在预冷状态时，离心机盖必须关闭，转头在预冷时转头盖可摆放在离心机的平台上，或摆放在实验台上，千万不可不拧紧浮放在转头上，因为一旦误启动，转头盖就会飞出，造成事故！4、转头盖在拧紧后一定要用手指触摸转头与转盖之间有无缝隙，如有缝隙要拧开重新拧紧，直至确认无缝隙方可启动离心机。5、离心管加液应称量平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须成偶数对称放入。6、在离心过程中，操作人员不得离开离心机室，一旦发生异常情况操作人员不能关电源POWER），要按STOP。要填写好离心机使用记录。离心机使用注意事项7、不得使用伪劣的离心管，不得使用老化、变形、有裂纹的离心管。若运行时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。8、每次停机后再开机的时间间隔不得少于5分钟，以免压缩机堵转而损坏。9、每次离心完成后，必须将转子取出，倒置于实验台上，擦干腔内余水，离心机盖处于打开状态，否则转子长时间放在轴上，可能锈死，转子会取不出而造成离心机整机报废。10、电源必须有接地线。11、本机转子使用寿命为三年，过期应更换转子。12、所有转子不能超过其最高转速使用。13、在节假日和晚间最后一个使用离心机例行安全检查后方能离去。14、在仪器使用过程中发生机器故障，部件损坏情况时要及时与技术人员联系。PCR仪(1)首先准备好反应管；

(2)打开机盖，将反应管平稳、端正地置入，盖好机盖；

(3)打开电源开关，按照机器屏幕显示的提示设定程序。

(4)用Proceed键起动扩增，结束时出现“Complete”，待风机停止工作，关闭电源，取出样品盖好PCR基因扩增仪护套。PCR仪使用方法(1)使用PCR仪式要严格注意本机的使用环境条件和对电源的要求；

(2)打开PCR仪机盖开关要轻，防止损坏盖锁；

(3)PCR基因扩增仪工作时严禁打开机盖；

(4)要定期用肥皂水清洗仪器的样品槽，不能使用强碱，高浓度酒精和有机溶液擦洗；

(5)产品出现故障时要及时请专业的维修人员或厂家的维修人员维修。盖锁样品槽控制板PCR仪的维护酶标仪1.仪器应放置在无强磁场和干扰电压的位置。

2.仪器应放置在噪音低于40分贝的环境下。

3.为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。

4.操作环境温度应在15°C~40°C之间，环境湿度在15%~85%之间。

5.操作时电压应保持稳定。

6.操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘。

7.保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。

酶标仪是一种精密的光学仪器，良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。酶标仪的维护1.使用移液器加液，移液吸嘴不能混用。2.洗板要干净，避免交叉污染。

3.严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。

4.请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成注意做好清洁工作。

5.不要在测量过程中关闭电源。

6.对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。

7.使用后盖好防尘罩。出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。酶标仪操作注意事项pH计1、仪器输出端（即复合电极插口）必须保持高度清洁，电极插头不要经常拔下，以防止灰尘及水分浸入。2、电极使用前必须用已知pH值的标准缓冲液进行定位校正。3、取下保护帽后要注意，在塑料保护栅内的玻璃不可与手或其他硬物接触，以免损坏。4、测量完毕，应将保护帽套上，帽内应放少量的补充液（3MKCl），以保持电极球的湿润。5、若该仪器所测的pH值与pH试纸所测pH值不一致，建议采用仪器所测结果。6、电极应避免长期浸在蒸馏水中或蛋白质液体和酸性氟化物中，并防止和有机油脂接触。7、电极不可接触稀洗涤剂、酒精、丙酮、乙醚、酸性液体、过氧化氢及1M稀酸等。pH计使用注意事项生物安全柜缓慢移动原则物品平行摆放原则避免震动原则不同样品柜内移动原则明火使用原则生物安全柜操作注意事项

生物安全柜柜内操作主要注意事项1、缓慢移动原则：为了避免影响正常的风路状态，柜内操作时手应该尽量平缓移动。

2、物品平行摆放原则：为了避免物品和物品之间的交叉污染现象产生，在柜内摆放的物品应该尽量呈横向一字摆开，避免回风过程中造成交叉污染。同时避免堵塞背部回风隔栅影响正常风路。

3、避免震动原则：柜内尽量避免震动仪器（例如离心机、旋涡振荡器等）的使用，因为震动会使得积留在滤膜上的颗粒物质抖落，导致操作室内部洁净度降低，同时如果在前操作面平衡失败还会引起安全柜对操作者的污染。

4、不同样品柜内移动原则：柜内两种及以上物品需要移动时，一定遵循低污染性物品向高污染性物品移动原则，避免污染性高的物品在移动过程中产生对柜体内部的大面积污染。

5、明火使用原则：柜内尽量不要使用明火！因为在明火使用过程中产生的细小颗粒杂质将被带入滤膜区域，这些高温杂质会损伤滤膜。无法避免一定需要使用的时候，宜使用低火苗的本生灯。级别实验员的保护实验物质的保护适用于Ⅰ部分保护循环空气屏障，带HEPA过滤器的排气没有没有无菌的工作表面，房间内未过滤空气可进入工作区低致癌的病毒超声处理等日常实验，以及操作化学致癌物、低剂量放射性物质、易挥发物质等，和通风厨类似，过滤效果较差Ⅱ部分保护空气循环屏障，带HEPA过滤器的排气有所以流入的空气都经过过滤低、中致癌的病毒CDC1~3级的试剂，所有需要BL2级保护的物质，细胞和细菌培养物Ⅲ全部保护空间屏障（手套），带HEPA过滤器的排气有所以流入的空气都经过过滤，空气循环不如Ⅱ类，对原料的保护也不如Ⅱ类CDC4级的试剂，所有需要BL4级保护的物质，高毒性的化学物质和致癌物生物安全柜安全等级超净工作台1、打开紫外灯，处理净化区空气及表面积累的微生物30min。2、关闭紫外灯，并启动送风机，清除尘粒，10-20min后即可于工作区进行操作。3、工作完毕停止运行送风机，并放下防尘窗。使用方法6、照明灯和紫外灯到使用寿命后要及时更换。注意事项1、新安装或长期不使用时，使用前必须对工作台及其周围环境先用吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁处理，再用药物或紫外线灭菌法进行灭菌处理。2、定期（2-3个月）将粗滤布拆下清洗或予以更换，定期（1周）对环境进行灭菌工作，同时经常用酒精擦净紫外灯，保持表面洁净，以免影响灭菌效果。3、操作区内不允许放不必要的物品，以免干扰操作区洁净气流流形。4、操作区内应尽量避免做明显扰乱气流流形动作。5、操作区的使用温度不得高于60℃.凝胶电泳系统蛋白质凝胶垂直电泳系统电泳玻片盖玻片玻板夹制胶架电泳槽梳子加样器核酸凝胶水平电泳系统电泳槽制胶板梳子凝胶电泳系统1、用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接，极性不要接反。2、接通电源，开启电源开关，根据需要设定电压或电流数值和电泳终止时间，即开始电泳。此时不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。3、仪器通电后，不要临时增加或拔出输出导线插头，以免短路。4、在总电流不超过仪器额定电流时，可多槽关联使用，但要注意不能超载。5、在某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时，允许在稳压状态下空载开机，但在稳流状态下必须先接好负载在开机，否则会造成仪器损坏。6、使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，应立即断电进行检修，以免发生意外事故。电泳仪使用方法及注意事项

高压蒸汽灭菌锅注意事项1、不可用于腐蚀性、易燃、易爆和热压不稳定等物品的灭菌。2、待灭菌的包裹不宜过大（小于50cm×30cm×40cm）、过紧，应有空隙，以使蒸汽对流。3、灭菌液体时，应将液体灌装在硬制的耐热玻璃瓶中，以不超过玻璃瓶体积的3/4为宜，瓶口用棉花纱塞，切勿使用未打孔的橡胶或软木塞。灭菌结束后不要立即释放蒸汽，必须待压力表指针回零后方可排气。4、布类物品应放在金属物品上，否则蒸汽遇冷凝聚