链球菌属及其检验「微生物检验」

链球菌属及其检验「微生物检验」1.分类链球菌的分类方法尚未统一。常用以下两种方法。1)根据溶血现象：分为3类。甲型溶血性链球菌(α-hemolyticstreptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。乙型溶血性链球菌(β-hemolyticstreptococcus)：菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。丙型链球菌(γ-streptococcus)：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。2)根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D…等20个群。同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型;B群分4个型。对人致病的链球菌菌株，主要是A群，多数呈现乙型溶血。2.细菌特性1)链球菌1)形态染色球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。无芽胞，无鞭毛。多数菌株在培养早期(2～4h)形成透明质酸的荚膜。革兰染色阳性。2)分离培养营养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。在液体培养基中呈沉淀生长，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm～0.75mm的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。3)生化反应触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。4)抗原构造主要有三种：蛋白质抗原：或称表面抗原。具型特异性有M、T、R、S4种，位于C抗原外层。与致病性有关的是M抗原。多糖抗原：或称C抗原。为群特异性抗原，位于细胞壁。根据C抗原的不同，将链球菌分为20群。对人致病的90%属A群。核蛋白抗原：或称P抗原。无特异性，为各种链球菌所共有，并与葡萄球菌有交叉。5)抵抗力不强，60℃30min即被杀死。对常用消毒剂敏感。乙型链球菌对青霉素、红霉素、四环素及磺胺类敏感。2)肺炎链球菌1)形态染色革兰阳性球菌，菌体呈矛头状、成双排列，宽端相对，尖端向外，在脓液、痰液及肺组织病变中亦可呈短链状，无鞭毛，无芽胞，在机体内或含血清的培养基中可形成荚膜。②分离培养营养要求高，在血平板上形成灰白色、圆形、直径为0.5mm～1.0mm的扁平菌落，周围有草绿色溶血环。培养时间长时可产生自溶酶。③生化反应多数菌株分解菊糖，胆盐溶解试验阳性和optochin敏感试验阳性，籍此可与草绿色链球菌相区别。④抗原结构荚膜多糖抗原可将肺炎链球菌分为85个血清型。肺炎链球菌14型与人类A血型抗原有交叉反应。多糖抗原为各型菌株所共有。可被血清中一种C反应蛋白(Creactiveprotein,CRP)所沉淀。正常人血清中只含微量CRP，急性炎症者含量增高，故常以测定CRP作为诊断的依据。检验地带网M蛋白：为型特异抗原，与A群链球菌M蛋白类似，但抗原性不同，与毒力无关。⑤抵抗力本菌抵抗力弱，对一般消毒剂敏感。有荚膜菌株抗干燥力较强，在干痰中可存活1～2月。对青霉素、红霉素、洁霉素敏感。⑥变异性有荚膜的肺炎链球菌经人工培养后可发生菌落由光滑型向粗糙型，即S-R变异，同时随着荚膜的消失，毒力亦随之减弱。将R型菌落的菌株接种动物或在血清肉汤中培养，则又可恢复S型。⒊临床意义⑴化脓性链球菌A群链球菌也称化脓性链球菌(pyogenicstreptococcus)，致病力强，占人类链球菌感染的90%，能产生多种外毒素和侵袭性酶，如链球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、链激酶、链道酶、透明质酸酶等，可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、脓疱病、软组织感染、心内膜炎、脑膜炎及变态反应性疾病如急性肾小球肾炎、风湿热等，产毒株还可引起猩红热。链球菌型别多，各型间无交叉免疫，故常反复感染。⑵乳链球菌B群链球菌学名无乳链球菌(S.agalactiae)是新生儿败血症和脑膜炎的常见菌，对成人主要引起肾盂肾炎、子宫内膜炎等。⑶肺炎链球菌肺炎链球菌(S.pneumoniae)，俗称肺炎球菌(pneumococcus)，是大叶性肺炎、支气管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎等。其荚膜在细菌的侵袭力上有重要作用，此外溶血素、神经氨酸酶是主要致病物质。感染后机体可产生牢固的型特异性免疫。但因菌型多，可再感染其他型。检验地带网⑷草绿色链球菌草绿色链球菌亦称甲型溶血性链球菌。是人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起亚急性细菌性心内膜炎。⒋微生物学检验⑴链球菌检验程序链球菌检验程序见图9-2。⑵标本采集根据不同疾病采集不同标本。⑶检验方法显微镜检查标本涂片革兰染色，镜检见链状排列革兰阳性球菌可初报。分离培养血液标本先增菌培养，脓液、咽拭可接种血琼脂平板并涂片染色镜检，初代分离需5%C02，35℃24h观察菌落性状。⑵肺炎链球菌①检验程序②标本采集根据病变部位采集不同标本。检验地带网③检验方法显微镜检查：除血液外，痰、脓液等均可直接涂片染色镜检。如发现革兰阳性矛头状双球菌，周围有较宽的透明区，经荚膜染色确认后可初报“找到肺炎链球菌”。分离培养：血液、脑脊液先增菌，可呈均匀混浊，有绿色荧光。痰液、脓液可直接接种血平板，5%～10%CO2培养后，取可疑菌落进一步作optochin敏感实验、胆盐溶菌试验与菊糖发酵试验，以区别于甲型链球菌。动物试验：小鼠对肺炎链球菌敏感，12～36h死亡。荚膜肿胀试验：如遇同型免疫血清，则肺炎链球菌荚膜出现肿胀，为阳性。④鉴定与鉴别①Lancefield群特异性抗原鉴定：B群为无乳链球菌，F群为米勒链球菌，A、C、G群抗原不是种特异性抗原，还需根据菌落大小和生化反应进一步鉴定。②PYR试验：化脓性链球菌为阳性。③杆菌肽(bacitracin)敏感试验：化脓性链球菌为阳性，有别于其他PYR阳性的β溶血性细菌(猪链球菌、海豚链球菌)和A群小菌落β溶血性链球菌(米勒链球菌)。此法可作为筛选试验。④VP试验：可鉴别A、C、G群β溶血的大、小两种不同菌落。⑤CAMP试验：无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄