浙江省不同产地茶叶主要成分含量比较及分析

摘要：目的：比较浙江省不同产地茶叶的主要成分含量差异。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法测定不同产地茶叶中表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量。色谱柱为AgilentSB-C18（5μm，4.6mm×250mm）；流速为1.0mL/min；进样量为20μL；检测波长为280nm；柱温为30℃；以乙腈-0.2%磷酸溶液（10:90）为流动相A、乙腈-0.2%磷酸溶液（80:20）为流动相B进行梯度洗脱。结果：不同产地茶叶中表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量区间分别为0.57%～0.85%、0.13%～1.78%、0.51%～7.04%、0.15%～0.31%、1.63%～3.37%。结论：本实验结果可以为茶叶人工培育和GAP基地建设提供依据，同时为茶叶提取物制备提供药材筛选依据。关键词：茶叶；主要成分；高效液相色谱；差异0

引言茶为山茶科植物茶（Camelliasinensikuntze）的芽叶，具有抗氧化、抗衰老、抗辐射、防治心血管疾病、防癌抗癌及调节免疫等多种功效，被应用于食品、饲料、化妆品、医药等多个领域。研究表明，从茶叶中提取的茶多酚在增强人体健康方面具有重要的作用。茶多酚因其独特的药理性质备受关注，许多体内和体外研究都表明茶多酚在预防癌症，治疗慢性胃炎、神经退化和心血管疾病中具有重要作用。我国茶园种植面积居世界首位，茶资源丰富，利用碎末茶、中低档茶与夏秋茶提取茶多酚的工艺非常成熟。本文对茶叶主产区浙江省多个产地的茶叶质量进行分析，以表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量为指标进行考察研究，为企业选择生产原料提供依据。随着茶多酚应用的开发，其分析方法也不断得到提高和完善，用于测定茶多酚含量的方法有光谱法、电化学法、滴定法、色谱法等。非色谱法只能测定茶多酚总量，而色谱法具有专属性强、灵敏度高等优点，可以用于茶多酚单一成分的测定，其中常用的有高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等。本研究采用高效液相色谱法进行茶多酚含量的测定。

1

材料与方法1.1材料与试剂茶叶样品（共收集14批不同产地的茶叶原料）：杭州市径山镇（编号1、2、3、4）、绍兴市新昌县（编号5、6、7）、金华市磐安县（编号8、9、10、11）、东阳市东白山（编号12、13、14）。对照品：表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf），购于中国食品药品检定研究院。试剂：乙腈（色谱级）；磷酸（色谱级）、甲酸（分析纯）；水（纯净水）；氢氧化钙（分析纯）。1.2仪器与设备Agilent1260高效液相色谱仪，VWD检测器；METTLERTOEDOME204E（万分之一）、METTLERTOEDOXS105（十万分之一）分析天平；恒温水浴锅；超声清洗机。1.3实验方法1.3.1色谱条件色谱柱为AgilentSB-C18（5μm，4.6mm×250mm）加保护柱；流速：1.0mL/min；进样量：20μL；检测波长：280nm；柱温：30℃；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液（10:90）为流动相A，乙腈-0.2%磷酸溶液（80:20）为流动相B，按照0～10min时A为100%，10～30min时A从100%到90%，30～50min时A从90%到100%，50～60min时A为100%进行梯度洗脱。1.3.2对照品溶液的制备取表儿茶素（EC）对照品、表儿茶素没食子酸酯（ECG）对照品、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对照品、咖啡因（Caf）对照品和没食子酸（GA）对照品适量，精密称定，分别加25%甲醇制成每lmL含表儿茶素68μg、表儿茶素没食子酸酯0.14mg、表没食子儿茶素没食子酸酯0.85mg、咖啡因14μg、没食子酸20μg的溶液，即得。1.3.3供试品溶液的制备将各批次样品粉碎成中粉，称取约2.0g，精密称定，置于1L烧杯中，加入新煮沸的纯净水400mL，在95℃热水水浴锅中保温10min，每隔30s搅拌1次；温浸结束后冷却至室温，过滤到500mL容量瓶中，并用少量纯净水洗涤烧杯和样品残渣2～3次，合并滤液；在量瓶中加入甲酸0.5mL，再加水定容至刻度，摇匀；用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2

结果与分析2.1线性范围考察精密称取一定量对照品，加甲醇溶解，配置成一系列梯度浓度，按“1.3.1”项下色谱条件分析，得到茶叶相关对照品混标图谱，如图1所示。分别以各组分的浓度（μg/mL）为横坐标X，峰面积为纵坐标Y绘制标准曲线，得到5种组分的线性回归方程和相关系数，结果如表1所示。从图1、表1可知，茶叶各组分在相应浓度范围内呈良好的线性关系。2.2精密度实验取对照品混标溶液，连续进样6次，每次20μL，分别得到表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）峰面积的RSD分别为1.14%、0.30%、0.22%、0.87%、0.46%，表明仪器精密度良好。2.3稳定性实验取新制备的杭州市径山镇1号茶叶样品溶液，每隔一段时间进样分析1次，进样量20μL。结果显示，在样品溶液制备好后的14h内，表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）峰面积的RSD分别为1.42%、0.69%、1.52%、0.74%、0.81%，供试品溶液在14h内稳定，符合相关规定。2.4重现性实验取干燥的杭州市径山镇1号茶叶样品，按“1.3.3”项下方法平行制备5份样品，进样量20μL，依据所获得的峰面积求得各组分在茶叶样品中的含量。结果显示，在5份样品溶液中，表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）含量的RSD分别为1.77%、1.65%、1.82%、1.61%、0.97%，表明该方法重复性良好。2.5加样回收率实验取茶叶样品（杭州市径山镇1号，EGCG含量3.84%）适量，精密称取1.0g，称取6份，以样品EGCG含量:对照品EGCG含量=1:1加入对照品，按“1.3.3”项下方法处理样品，按“1.3.1”项下色谱条件检测。结果显示，EGCG的加样回收率分别为101.965%、97.911%、103.288%、102.075%、101.494%、102.982%，平均值为101.619%，RSD为1.90%，表明该方法回收率良好，符合相关规定。2.6不同产地茶叶样品含量测定每个产地随机选取多份样品，所有茶叶样品按“1.3.3”项下方法平行制备3份，用“1.3.1”项下色谱条件分析，进样量20μL（可根据具体含量情况进行调整）。将获得的各组分峰面积值代入“2.1”项下相应的回归方程中，求取各样品溶液的浓度，计算各组分在茶叶样品中的含量，结果如表2所示。图2～图6为不同产地茶叶中不同组分含量比较。

3

结语本研究通过方法学验证，证明了该含量测定方法简便可行，样品制备方法简便，提取充分，可用于茶叶原料中表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量检测。研究结果表明：不同产地之间除没食子酸（GA）含量差别不显著外，其余含量存在显著差异。其中，茶叶中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的含量与产地及加工密切相关，同一产区不同采收批次之间存在显著差异，不同产地茶叶中表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量区间分别为0.57%～0.85%、0.13%～1.78%、0.51%～7.04%、0.15%～0.31%、1.63%～3.37%。我国作为茶树栽培及茶叶加工的