【蒲公英总黄酮的提取探究5600字（论文）】

蒲公英总黄酮的提取研究摘要本文所采用的从蒲公英中提取总黄酮的方法主要是超声波辅助乙醇提取法和乙醇冷浸渍法，比较不同的工艺条件并进行优化处理。在单因素实验的基础上，采用正交实验对两种方法的各自影响参数进行优选，并以总黄酮得率作为指标，实验结果表明，超声波辅助乙醇提取法是蒲公英总黄酮的最佳提取工艺条件。此方法是在乙醇浓度为60%，料液比为1:50，超声时间为40min的条件下进行的，由此得出蒲公英中总黄酮的得率为61.19%。故超声波辅助乙醇提取法是提取蒲公英总黄酮的有效方法。其提取工艺，简便准确、稳定合理。关键词:蒲公英；总黄酮；提取工艺目录TOC\o"1-3"\h\u18092引言 1321501材料和方法 2291721.1材料与仪器 2127261.1.1实验材料 290401.1.2主要仪器 2260051.1.3主要试剂 272901.2实验方法 2301741.2.1实验材料预处理 2189191.2.2芦丁标准溶液制备 3240311.2.3乙醇冷浸渍法 381121.2.4超声波辅助乙醇提取法 459571.2.5硝酸铝络合显色法和测定波长的选择 558511.2.6标准曲线的绘制 6196551.2.7蒲公英总黄酮得率计算公式 656112结果与分析 679272.1标准曲线的绘制 699452.2乙醇冷浸渍法实验结果 7299102.2.1单因素实验结果 7117452.2.2正交实验结果 8240382.3超声波辅助乙醇提取法 9122452.3.1单因素结果 9311692.3.2正交实验结果 11275913结论 1114725参考文献 12摘要：本文所采用的从蒲公英中提取总黄酮的方法主要是超声波辅助乙醇提取法和乙醇冷浸渍法，比较不同的工艺条件并进行优化处理。在单因素实验的基础上，采用正交实验对两种方法的各自影响参数进行优选，并以总黄酮得率作为指标，实验结果表明，超声波辅助乙醇提取法是蒲公英总黄酮的最佳提取工艺条件。此方法是在乙醇浓度为60%，料液比为1:50，超声时间为40min的条件下进行的，由此得出蒲公英中总黄酮的得率为61.19%。故超声波辅助乙醇提取法是提取蒲公英总黄酮的有效方法。其提取工艺，简便准确、稳定合理。关键词:蒲公英；总黄酮；提取工艺引言蒲公英(拉丁学名:

Taraxacum

mongolicumhand.Maz)，别名华花郎，是遍布全国各地的中草药，全草皆可用药，远在《唐本草》中即有收载[1]。蒲公英中含有多种活性成分，如蒲公英甾醇[15]、黄酮类等。黄酮有良好的抑菌作用[2]，其中所含的一些有效成分具有很强的抗组织胺作用，促进患处伤口的恢复。因此对蒲公英总黄酮的提取工艺进行研究具有一定的现实意义[15]。目前，总黄酮的主要提取生物途径和应用方法主要有有机溶液萃取法[3]、超声溶液提取法[3,4]、微波辅助有机溶液提取法[4]、酶解提取法[5,10]等。有机溶液萃取法中最常用的就是乙醇浸取法；超声溶液提取法[14]通过利用超声波技术来缩短分离萃取过程的时间且能够节约成本，超声波技术能够减少破壁的时间，故能提高萃取率进而提高产品质量和产量；微波辅助提取是将微波处理与传统有机溶剂提取相结合，消解能力强；酶解提取法通过降解细胞结构，最大限度将有效成分溶解出来。因此，如何更快、更优地提取蒲公英中总黄酮成为重要的研究方向。冷浸渍法和超声波辅助乙醇提取法都是操作方便并且简单可行的实验方法，本实验通过运用以上两种方法分别对蒲公英中的总黄酮进行提取，采用显色法将其作为一种测定蒲公英总黄酮物质含量的检测方法，通过紫外分光光度计进行显色测定，从而对其提取效果进行更深一步的研究，使其更好地投入到生产之中，带来更大的经济效益。1材料和方法：1.1材料与仪器：1.1.1实验材料蒲公英：购买于存誉堂旗舰店，时间为2021年4月1.1.2主要仪器1.1.3主要试剂：1.2实验方法1.2.1实验材料预处理清洗一定量的蒲公英后，于100℃干燥箱中干燥12h后[16]，用研钵磨碎，通过80过目筛，得到了蒲公英粉，备用。1.2.2芦丁标准溶液制备[6]采用芦丁作为总黄酮的标准品。将14mg芦丁标准品溶解于适量60%乙醇溶液中，待完全溶解后，移入规格为50mL的容量瓶中定容至刻度线，摇匀混合后，制得标准溶液[17]，放入冰箱低温储存备用。1.2.3乙醇冷浸渍法1.2.3.1单因素实验（1）料液比对总黄酮得率的影响：将蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研钵将其磨碎，通过80过目筛，得到蒲公英粉。称取0.5g蒲公英粉，用滤纸将其包成茶包状，放入100mL烧杯中，按1:30、1:40、1:50、1:60、1:70(g/mL)的料液比分别加入60%的乙醇溶液，在室温下冷浸渍24h，然后在离心机上进行离心，得到的上层澄清溶液就是蒲公英的样品溶液。依次进行下列两步操作，操作一：取5个25mL容量瓶，标号为R1、R2、R3、R4、R5，各加入5mL滤液、1mL（5%）的NaNO2溶液以及1mL（10%）AL3(NO3)3溶液，再加入10mL（1moL/L）NaOH溶液，用60%乙醇溶液定容至刻度线，充分混合摇匀。操作二：用紫外可见分光光度计测量其吸光度。以总黄酮的得率为指标，考察料液比对总黄酮得率的影响[17]。（2）乙醇浓度对总黄酮得率的影响：将蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研钵将其磨碎，通过80目筛，得到蒲公英粉。称取0.5g蒲公英粉，用滤纸将其包成茶包状，放入100mL小烧杯中，按1:50（g/mL)的料液比分别加入40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液，在室温下冷浸渍24h，然后在离心机上进行离心，得到的上层澄清溶液就是蒲公英的样品溶液，之后重复上述操作一和操作二，以总黄酮的得率为指标，考察乙醇浓度对总黄酮得率的影响。（3）乙醇冷浸渍时间对黄酮得率的影响：将蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研钵将其磨碎，通过80过目筛，得到蒲公英粉。称取0.5g蒲公英粉，用滤纸将其包成茶包状，放入100mL烧杯中，按照料液比为1:50（g/mL)加入浓度为60%的乙醇溶液，分别在室温下冷浸渍24h、36h、48h、60h、72h，然后在离心机上进行离心，得到的上层澄清溶液就是蒲公英的样品溶液。之后重复上述操作一和操作二，以总黄酮的得率为指标，考察冷浸渍时间对总黄酮得率的影响。1.2.3.2正交实验[7]上述实验结果以得率为评估标准，选取三个对总黄酮得率影响较大的因素，同时确定所选因素对应的水平，设计因素水平表，见下表3。表3乙醇冷浸渍法因素水平表因素水平123提取时间（h）364860乙醇浓度（%）506070料液比（g·mL-1）1:401:501:601.2.4超声波辅助乙醇提取法1.2.4.1单因素实验（1）料液比对总黄酮得率的影响：将蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研钵将其磨碎，通过80过目筛，得到蒲公英粉。称取0.5g蒲公英粉，用滤纸将其包成茶包状，放入100mL烧杯中，按1:30、1:40、1:50、1:60、1:70(g/mL)的料液比分别加入浓度为60%的乙醇溶液，超声清洗30min，超声完成后在离心机上进行离心，得到的上层澄清溶液就是蒲公英的样品溶液。之后重复上述操作一和操作二，以总黄酮的得率为指标，考察料液比对总黄酮得率的影响。（2）乙醇浓度对总黄酮得率的影响：将蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研钵将其磨碎，通过80过目筛，得到蒲公英粉。称取0.5g蒲公英粉，用滤纸将其包成茶包状，放入100mL烧杯中，将60%的乙醇溶液按1:50的料液比（g/mL）分别加入40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液，超声清洗30min，超声完成后在离心机上进行离心，得到的上层澄清溶液就是蒲公英的样品溶液。之后重复上述操作一和操作二，以总黄酮的得率为指标，考察乙醇浓度对总黄酮得率的影响。（3）超声时间对总黄酮得率的影响：蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研钵将其磨碎，通过80过目筛，得到蒲公英粉。称取0.5g蒲公英粉，用滤纸将其包成茶包状，放入100mL烧杯中，按1:50（g/mL)的料液比加入浓度为60%的乙醇溶液，分别超声清洗10min、20min、30min、40min、50min，超声完成后用离心机进行离心，得到的上层澄清溶液就是蒲公英的样品溶液。之后重复上述操作一和操作二，以总黄酮的得率为指标，考察超声时间对总黄酮得率的影响。1.2.4.2正交实验在上述实验结果中，以得率为评估标准，选取三个对总黄酮得率影响比较大的因素，同时确定所选因素对应的水平，设计因素水平表，见下表3。表4超声波辅助乙醇提取法因素水平表因素水平123超声时间（min）304050乙醇浓度（%）506070料液比（g·mL-1）1:401:501:601.2.5硝酸铝络合显色法和测定波长的选择1.2.5.1显色剂所需溶液的制备在电子天平上称取5gNaNO2固体颗粒、10gAL3(NO3)3固体颗粒以及4gNaOH固体颗粒，分别用蒸馏水溶解于三个烧杯中，待溶解后移入100mL的容量瓶中进行定容至刻度线，即可得到浓度为5%的NaNO2溶液、浓度为10%的AL3(NO3)3溶液以及浓度1moL/L的NaOH溶液。1.2.5.2测定波长的选择[8]在100ml容量瓶中分别加入4ml芦丁标准溶液、4ml浓度为0.5%NaNO2溶液、4ml浓度为10%AL3(NO3)3溶液、40mL浓度为1mol/LNaOH溶液，并用60%乙醇溶液定容至刻度线，混合摇匀后放置25分钟。在300nm-600nm的范围内进行紫外可见分光光度计扫描。在510nm处硝酸铝溶液的峰值较明显（如下图1所示）。图SEQ图\*ARABIC1硝酸铝显色法显色下的芦丁标准品紫外光谱图1.2.6标准曲线的绘制[9]精密依次吸取浓度为280ug/mL芦丁标准溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5和3.0mL，分别移入规格为25mL的A1、A2、A3、A4、A5五个容量瓶中，向每个容量瓶中加入1mL5%的NaNO2溶液，1mL10%的AL3(NO3)3溶液（pH=5.2）以及10mL的NaOH溶液，用60%乙醇定容A1、A2、A3、A4、A5，摇匀混合，最后在510nm处测定吸光度，以芦丁浓度为横坐标(X)，吸光度(Y)为纵坐标，绘制标准曲线[5]。1.2.7蒲公英总黄酮得率计算公式X=[3]式中：X——总黄酮的得率V——加入乙醇的体积（mL）N——待测溶液的稀释倍数M——蒲公英粉的质量（g）2结果与分析2.1标准曲线的绘制根据浓度和吸光度做出线性回归方程为Y=0.005x+0.0109（R2=0.9598），此结论推出，在5.6~33.6（μg/mL）中有较好的线性关系。图2标准曲线图2.2乙醇冷浸渍法实验结果2.2.1单因素实验结果2.2.1.1乙醇冷浸渍法中料液比对得率的影响对图3分析可知，在乙醇冷浸渍法实验中，选取料液比系数为1:40、1:50、1:60时，对总黄酮得率影响最大。图SEQ图\*ARABIC3乙醇冷浸渍法中料液比对得率的影响图2图2乙醇冷浸渍法中料液比对得率的影响对图4分析可知，可得出在乙醇冷浸渍法实验中，选取冷浸时间为36h、48h、60h时，对总黄酮得率影响最大。图4乙醇冷浸渍法中时间对得率的影响2.1.2.3乙醇冷浸渍法中乙醇浓度对得率的影响对图5分析可知，可得出在乙醇冷浸渍法实验中，选取乙醇浓度为50%、60%、70%时，对总黄酮得率影响最大。图5乙醇冷浸渍法中乙醇浓度对得率的影响2.2.2正交实验结果[10,14]由下表5可知，极差R最大为4.86，对应因素为乙醇冷浸渍法时间，所以在乙醇冷浸渍法中，蒲公英总黄酮得率受乙醇冷浸渍时间影响最大；对得率影响的顺序从高到低为：A＞B＞C，即浸渍时间＞乙醇浓度＞料液比。在料液设定比为1:50，乙醇浓度设定为60%，提取时间设定为48h时，总黄酮得率最高。乙醇冷浸渍法优点在于操作方便，简单易行，便于传授；缺点是相对于其他大多数方法消耗时间较长，不利于大规模投入使用，耗费人力造成成本损失，故不可取。表5乙醇冷浸渍法正交实验结果实验号浸渍时间（h）乙醇浓度（%）料液比（mg/mL）得率%111120.15212221.95313311.15421223.54522319.33623124.96731322.23832114.05933217.01K153.2565.9259.16K267.8355.3362.50K353.2953.1252.71k117.7521.9719.72k222.6118.4420.83k317.7617.7117.57R4.864.273.262.3超声波辅助乙醇提取法2.3.1单因素结果2.3.1.1超声波辅助乙醇提取法中料液比对得率的影响对图6分析可知，可得出在超声波辅助乙醇提取法中，选取料液比系数为1:50、1:60、1:70时，对总黄酮得率影响最大。图6超声波辅助乙醇提取法中料液比对得率的影响2.3.1.2超声波辅助乙醇提取法中时间对得率的影响对图7分析可知，可得出在超声波辅助乙醇提取法中，选取超声时间为30min、40min、50min时，对总黄酮得率影响最大。图7超声波辅助乙醇提取法中时间对得率的影响2.3.1.3超声波辅助乙醇提取法中乙醇浓度对得率的影响对图8分析可知，可得出在超声波辅助乙醇提取法中，选取乙醇浓度为50%、60%、70%时，对总黄酮得率影响最大。图SEQ图\*ARABIC5超声波辅助乙醇法中浓度对得率的影响2.3.2正交实验结果由下表6可知，极差R最大为17.27，对应因素为超声时间，所以在超声提取法中，蒲公英总黄酮得率受超声时间的影响最大，并且在各因素中，对得率影响的顺序从高到低为：A＞C＞B，即超声时间＞料液比＞乙醇浓度[5]。由表易得，在料液比设定为1:50，乙醇浓度设定为60%，提取时间设定为40min时，获得的总黄酮得率最高。超声提取法优点在于耗时短，操作较为简单。该方法提取蒲公英总黄酮相比乙醇冷浸渍法整体得率较高。表6超声波辅助乙醇提取法正交实验结果实验号超声时间（h）乙醇浓度（%）料液比（mg/mL）得率%111121.23212226.62313361.19421219.84522326.19623111.20731326.42832111.74933219.73K1109.0467.4944.17K257.2364.5566.19K357.8992.12113.8k136.3522.5014.72k219.0821.5222.06k36.3630.7137.93R17.279.1915.873结论本实验对蒲公英总黄酮的提取技术和工艺进行研究，主要采用超声波辅助乙醇提取法和乙醇冷浸渍法来提取蒲公英总黄酮。通过比较两种方法的提取总黄酮的效果，并且以总黄酮的得率作为指标。分析结果发现在超声波辅助乙醇提取法下，黄酮的最大得率为61.19%。故超声波辅助乙醇提取法被广泛认为是蒲公英总黄酮提取的最佳方法，在料液比为1:50、乙醇浓度为60%、提取时间为40min的条件下其提取工艺条件最佳。参考文献[1]王焕华,中国药话,中国中医学出版社,(1996).[2]国家药典委员会,中华人民共和国药典(一部).北京：中国医药科技出版社，2015:352.[3]郭希娟,张桂芳,刘远洋,蒲公英黄酮提取方法的研究现状及进展[J],安徽农学通报,2016,22（20）：15-16[4]徐树来,王丽,任红波,栾雪艳,陈井权,蒲公英黄酮的提取工艺优化及主要成分浅析[J].食品工业科技,2018,39(8):160-166[5]侯丽,蒲公英中总黄酮提取工艺研究[J],农业科技与装备,2017(3):52-53[6]苏鹏涛,杨劝生,蒲公英中总黄酮正交提取工艺的建立[J].中兽医医药杂志，2018,37(3)：49-51[7]冯倩,郑伟,李蔚群,张微,郑永霞,张贵民,多指标正交实验法考察蒲公英提取与纯化工艺[J],现代中药研究与