革兰氏阴性杆菌大肠杆菌介绍

革兰氏阴性杆菌大肠杆菌介绍大肠杆菌的历史肠杆菌科,为革兰氏阴性杆菌。根据生化反应、血清学试验、DNA同源性研究，肠杆菌科至少包括28个菌属，110个以上的菌种。埃希菌属（Escherichia）中最重要的是大肠埃希菌(E.coli)

，常称为大肠杆菌。大肠杆菌广泛分布于自然界，包括腐生菌、寄生菌和人及动物的病原菌。多数是人和动物肠道正常菌群的重要成员。20世纪中叶，认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症。第2页,共28页，2024年2月25日，星期天一、大肠杆菌的一般特性1、G－直短杆菌，两端钝圆，散在或成对。 革兰染色第3页,共28页，2024年2月25日，星期天

2、周身鞭毛，能运动，无芽孢，有的有荚膜。

3、代谢能力强，代谢类型是异养兼性厌氧型。

第4页,共28页，2024年2月25日，星期天二、培养及生化特性1、培养特性①兼性厌氧；②最适生长温度37℃，最适生长pH7.2～7.6；③普通琼脂培养基：生长良好，圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约2~3mm；④普通肉汤培养基：均匀浑浊，管底有粘性沉淀，液面管壁有菌环。第5页,共28页，2024年2月25日，星期天⑤肠道菌鉴别培养基麦康凯琼脂培养基：红色菌落。伊红美兰琼脂培养基：黑色带金属闪光的菌落。SS琼脂培养基：一般不生长或生长较差，生长者呈红色。⑥血平板：一些致病性菌株常β溶血。

麦康凯琼脂培养基伊红美兰琼脂培养基SS琼脂培养基血平板第6页,共28页，2024年2月25日，星期天

2、

生化特性I：吲哚试验M：甲基红试验V：V-P试验C：枸橼酸盐利用实验第7页,共28页，2024年2月25日，星期天（1）三糖铁培养基①配方牛肉膏5g硫酸亚铁

0.2g氯化钠5g蒸馏水1000mL蛋白胨20g硫代硫酸钠0.2g蛋白胨5g琼脂12g乳糖

10g2%酚红溶液

12.5ml蔗糖

10g葡萄糖

1g第8页,共28页，2024年2月25日，星期天②原理测定细菌对葡萄糖、乳糖及蔗糖的发酵反应，以及能否产生硫化氢。可鉴别肠道菌。葡萄糖乳糖蔗糖硫酸亚铁大肠杆菌沙门菌能产硫化氢菌株发酵葡萄糖和乳糖；大量产酸产气底层和斜面均呈黄色，底层有气泡只发酵葡萄糖产酸产气底层黄色，斜面保持红色因形成硫化亚铁而使培养基呈黑色第9页,共28页，2024年2月25日，星期天对照假单胞菌志贺氏菌

沙门氏菌大肠杆菌变形杆菌三糖铁培养基第10页,共28页，2024年2月25日，星期天吲哚试验V-P试验枸橼酸盐试验甲基红试验IMViC试验第11页,共28页，2024年2月25日，星期天三、大肠杆菌的基本结构(一)细胞壁

大肠杆菌的细胞壁分外膜和肽聚糖层。外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分，主要由磷脂、蛋白质和脂多糖组成。脂多糖是革兰氏阴性细菌的内毒素，也是革兰氏阴性细菌细胞壁的特有成分，主要与抗原性、致病性及对噬菌体的敏感性有关。第12页,共28页，2024年2月25日，星期天外膜周质细胞质膜第13页,共28页，2024年2月25日，星期天（二）质粒F因子：又称致育因子，插入、复制和转移的功能。有F因子的大肠杆菌为雄性，用F+表示，不含F因子的大肠杆菌称为雌性，用F-表示。通过F+和F-细菌的接合，F因子可经性菌毛传递给F-菌株，使F-菌株转变为F+菌株。R因子：抗性转移因子和抗性决定因子。Col因子：产大肠杆菌素因子，编码合成大肠杆菌素。

第14页,共28页，2024年2月25日，星期天四、大肠杆菌的特殊结构1、荚膜

荚膜具有抗原性，构成了大肠杆菌的表面抗原，即K抗原。2、鞭毛由鞭毛蛋白组成，构成了细菌的鞭毛抗原，与运动有关。3、菌毛

在细胞表面还含有一种比鞭毛更细更短更硬的丝状体叫菌毛，可分为普通菌毛和性菌毛。

第15页,共28页，2024年2月25日，星期天大肠杆菌可以透过接合作用传递遗传物质。第16页,共28页，2024年2月25日，星期天五、抗原及血清型（一）抗原O抗原，即菌体抗原，为细胞壁脂多糖。该抗原刺激机体主要产生IgM类抗体。H抗原，即鞭毛抗原，H抗原主要刺激机体产生IgG类抗体，与其他肠道菌基本无交叉反应。K抗原，即荚膜抗原，位于O抗原外层，为多糖。具有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。据耐热性不同，K抗原又分为：L、A和B三型。第17页,共28页，2024年2月25日，星期天L型K抗原：对热敏感，100℃1h破坏其抗原性，并失去与相应抗体的结合力和凝集性，位于被膜中，偶见于荚膜中。A型K抗原：耐100℃1h，但121℃2.5h破坏其抗原性和O不凝集性，但保留与相应抗体结合能力。位于荚膜中，抗A血清可使具有相应A抗原的菌体出现荚膜肿胀现象。B型K抗原：100℃1h破坏其抗原性与相应抗体的凝集性，但保留其与相应抗体结合力。第18页,共28页，2024年2月25日，星期天第19页,共28页，2024年2月25日，星期天（二）血清型可用O:K:H排列表示其血清型。如：O8:K23:H19，表示该菌具有O抗原8，K抗原23，H抗原为19。致人畜腹泻的产肠毒素大肠杆菌，除含K抗原外，还可含有蛋白质性粘附素抗原。对粘附素抗原应并列写于多糖K抗原之后。如：O8:K87，K88:H19中K88即为粘附素抗原。第20页,共28页，2024年2月25日，星期天六、致病性（一）致病物质1、定居因子（Colonizationfactor，CF）；也称粘附素，即大肠杆菌的菌毛。2、肠毒素是肠产毒性大肠杆菌在生长繁殖过程中释放的外毒素，分为耐热和不耐热两种。①耐热（ST）：100℃20min不破坏，免疫原性弱。②不耐热（LT）：65℃30min破坏，免疫原性强。3．其他：细胞壁脂多糖的类脂A具有毒性；K抗原有抗吞噬作用，有抵抗抗体和补体的作用。第21页,共28页，2024年2月25日，星期天（二）所致疾病1．肠道外感染：多为内源性感染，以泌尿系感染为主；大肠杆菌可侵入血液，引起败血症；大肠杆菌性脑膜炎。2．急性腹泻（1）肠产毒性大肠杆菌（ETEC）（2）产志贺毒素大肠杆菌(STEC）（3）肠致病性大肠杆菌（EPEC）（4）肠出血性大肠杆菌（EHEC）（5）肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）（6）肠粘附性大肠杆菌（EAEC）第22页,共28页，2024年2月25日，星期天肠产毒性大肠杆菌（ETEC）ETEC是致人和幼畜腹泻最常见的病原菌；毒力因子有粘附素性菌毛和肠毒素。致病过程第23页,共28页，2024年2月25日，星期天七、抵抗力大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强。55℃加热60min或60℃加热15min仍有部分细菌存活。胆盐、煌绿等对非致病性大肠杆菌有选择性抑制作用，而对致病性大肠杆菌无抑制作用，所以用肠道选择鉴别培养基来分离致病性大肠杆菌。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。第24页,共28页，2024年2月25日，星期天八、非致病性大肠杆菌的作用保护肠道的微生态平衡。消耗肠道内的氧气，创造厌氧环境，利于厌氧菌的生长；分解代谢产物供厌氧菌生长。能合成维生素K和B。对外袭菌有拮抗作用。某些大肠杆菌能产生大肠菌素，对一些病原微生物具有拮抗作用。第25页,共28页，2024年2月25日，星期天九、微生物学的诊断1、病料的采集：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。2、分离培养：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。37℃培养18～24h后，观察菌落并涂片染色镜检。3、生化鉴定：大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和木胶糖等产酸产气。IMViC试验为“++--”。即为典型大肠杆菌。第26页,共28页，2024年2月25日，星期天病料腹泻或水肿病例败血症病例常采集粪便或肠粘膜刮取物常采集血液及其病变组织麦康凯或伊红美兰琼脂平板划线血琼脂或麦康凯琼脂平板划线挑取疑似大肠杆菌菌落5～10个分别在琼脂平板进行纯培养革兰染色镜检接种TSI琼脂培养基革兰氏染色阴性生化试验血清学鉴定猪水肿病菌株猪腹泻菌株Stx2e检测肠毒素检测临床上只检测O抗原第27页,共28页，2024年2月25日，星期天4、血清型鉴定假定试验：取经生化试验证实的大肠杆菌培养物，用致病性大肠杆菌，侵袭性大肠杆菌和产毒素大肠杆菌多价O血清和出血性大肠杆菌的O157血清做玻片凝集试验。当与某一种多价O血清凝集时，在