血液成分制备及保存

血液成分制备及其保存5/9/20241血液成分制备及保存

国际输血协会曾经指出：“20世纪70年代是输血史上发生重大变革的10年，其中最大成就是成分输血代替全血输血。”成分输血是输血技术发展的总趋势，也是输血现代化的重要标志之一。5/9/20242血液成分制备及保存成分输血概述一、成分输血的概念(bloodcomponenttherapy)

是用物理的或化学的方法把全血分离制备成各种较浓和较纯的制品，根据不同病人的需要，输给相应制品。

5/9/20243血液成分制备及保存二、成分输血的优点1.一血多用，节省血源，一人献血，多人受益2.制品的浓度和纯度高，疗效好3.最大限度地降低输血不良反应及疾病的传播4.便于保存和运输，使用方便5/9/20244血液成分制备及保存三、血液成分制备方法

利用离心、过滤等物理的方法来分离血液成分，最常用的是利用各种血液成分相对密度、体积等因素的不同，通过密度梯度离心法，离心分层而得到浓度、纯度较高的单一成分。

手工制备

血细胞分离机制备

5/9/20245血液成分制备及保存四、血液成分保存的原则

使各种血液成分在体外储存过程中看，保持其最佳生理状态。在保存期内，输入受者体内后，可在循环中存活并维持其正常的生理功能，以达到有效的治疗目的。5/9/20246血液成分制备及保存

血液成分是在全血采集后6-8h内制备的,全血暂时存放的最好条件是2h内被冷却到20-24℃,如果无此条件,可存放在2-6℃,不应在过冷或过热的外环境久放,如需从中分离血小板,则应保证采血后2h内冷却到20-24℃,并在此条件下运输.5/9/20247血液成分制备及保存血液采集注意事项（1）无菌操作，有效消毒，避免污染和感染（2）无凝块、无溶血、无乳糜，采血量符合标准（3）采血速度：200ml采集时间小于3min，400ml采集时间小于6min（4）采集过程中出现血流不畅，则不应用于制备浓缩血小板。5/9/20248血液成分制备及保存血液细胞成分的制备一、制备原理利用各种血液细胞比重、体积等因素的不同，通过离心分层而得到浓度较高的单一成分。血液中各成分比重(g/ml)血浆(1.025－1.030)血小板（1.030－1.060）淋巴细胞（1.050－1.078）粒细胞（1.080－1.095）红细胞（1.090－1.111）5/9/20249血液成分制备及保存5/9/202410血液成分制备及保存二、红细胞制品

红细胞制品的种类：悬浮红细胞浓缩红细胞悬浮少白细胞的红细胞浓缩少白细胞的红细胞洗涤红细胞冷冻解冻去甘油红细胞

辐照红细胞5/9/202411血液成分制备及保存（一）悬浮红细胞

1.概述：悬浮红细胞是目前国内外应用最广泛的一种红细胞制品。悬浮红细胞是用离心的方法分出全血中大部分(90%)血浆后，加入各种晶体盐红细胞保存液。5/9/202412血液成分制备及保存各种晶体盐红细胞保存液：5/9/202413血液成分制备及保存红细胞添加液（additivesolution）(mg/100ml)5/9/202414血液成分制备及保存5/9/202415血液成分制备及保存

保养液、添加液都是为保存红细胞而设计的,保存温度2-6℃也是根据红细胞而定,而血小板、白细胞、凝血因子的最佳保存条件都与红细胞不同5/9/202416血液成分制备及保存2.制备方法：多联袋制备血液成分为国内外推荐使用方法。

①．用三联袋（含有保存液的主袋、添加液的末袋和次空的转移袋）的主袋采集200ml或400ml全血。②．将8小时以内的全血，用（4±2）℃低温离心机离心，离心力为5000×g，离心7分钟，沉淀红细胞。

③．轻轻取出离心后的血袋悬挂于分离支架上或分离夹内，将上层不含血细胞的血浆分入空的转移袋内。

④．把三联袋末袋中的添加液加入主袋浓缩红细胞内，使红细胞与添加液充分混匀。

⑤．用高频热合机切断塑料袋间的连接管，制成悬浮红细胞。

⑥．贴上标签，放入血库专用冰箱保存。5/9/202417血液成分制备及保存空转移袋添加液保存液

全血血浆（含保存液）添加液5/9/202418血液成分制备及保存3、注意事项（1）．制备前应检查全血采血时间及血袋热合部位是否漏血，各种标签是否齐全等。（2）．用分离支架或分浆夹将血浆分入空的转移袋时，不能有红细胞混入。（3）．悬浮红细胞肉眼观察应无黄疸、气泡、重度乳糜。（4）．悬浮红细胞所贴标签的条码、血型、献血者、采血者、采血时间应与原采血袋一致。5/9/202419血液成分制备及保存4、质量标准(1)．含有全血中全部的红细胞、一定量白细胞、血小板和少量血浆。(2)．血细胞比容为0.50～0.65。(3)．容量应为200ml±10%或400ml±10%。(4)．血红蛋白不低于45g/单位。(5)．200ml全血分离出的红细胞为1单位（unit，U）悬浮红细胞。5/9/202420血液成分制备及保存5、保存和运输悬浮红细胞应保存在2℃～6℃。红细胞添加液为MAP、SAGM、CPDA-1的保存期为35天；AS-1、AS-3、AS-5的保存期为42天；红细胞添加液为生理盐水的保存期为24小时。运输的温度为2～10℃，最长运输时间不得超过24小时。5/9/202421血液成分制备及保存（二）浓缩红细胞1.制备：用离心方法将采集到二联袋内的全血分离出部分血浆制备而成的红细胞成分血。2、质量标准（1）．含有全血中全部的红细胞、白细胞、大部分血小板和部分血浆。（2）．红细胞比容为0.65～0.80。（3）．1U红细胞容量为120ml±10%。（4）．血红蛋白不低于45g/单位。（5）．200ml全血分离出的红细胞为1U的浓缩红细胞。3.保存和运输浓缩红细胞保存在2-6℃。含ACD-B、CPD保养液的浓缩红细胞保存期为21天，含CPDA-1保养液的保存期为35天。运输温度2-10℃。

5/9/202422血液成分制备及保存（三）少白细胞的红细胞1.概述：大多数患者因受血或受孕，体内产生白细胞抗体，这些抗体大部分属于人类白细胞抗原系统的同种抗体，当再度输入含有白细胞的全血或其他血液成分时，有可能产生免疫性发热输血反应。减除血液制品中的白细胞是安全输血的一种措施。少白细胞的红细胞有少白细胞浓缩红细胞和少白细胞悬浮红细胞。5/9/202423血液成分制备及保存2.制备方法①离心法（去白膜法）：是一种依据红细胞与白细胞比重不同，简单、经济易于操作的制备少白细胞的方法。能减除原全血中85%的白细胞，降低发热反应率。将采集的全血进行强离心，将血浆分入第2袋，将含有一定量血浆及白膜层分入第3袋；再将第4袋的红细胞添加液加入首袋与红细胞混合即为少白细胞的红细胞。5/9/202424血液成分制备及保存1.血浆2.白膜层3.添加液5/9/202425血液成分制备及保存②滤器过滤法：由于医用高分子工业的发展，促进了输血器材的改革。各种不同功能的滤器相继问世。目前常用的为第三代滤器，具有较高的减除白细胞效果，一般可使白细胞降低至1.0×106/L～1.0×105/L。避免NHFTR及HLA同种免疫的发生，是最为有效的方法。

5/9/202426血液成分制备及保存5/9/202427血液成分制备及保存3、质量标准手工法：（1）白细胞计数＜1.2×109/U。（2）血细胞比容为0.65～0.75。（3）1U容量应为200ml±10%。（4）血红蛋白不低于43g/U。（5）200ml全血分离出的红细胞为1U的少白细胞红细胞。

过滤法：（1）白细胞去除率高，达到99%以上，即白细胞残留量小于5×106/U。（2）减少有效细胞的损失，其回收率红细胞＞90%，血小板≥85%。（3）去除白细胞过程中，有效细胞不受到损伤和不丧失其生理活性。5/9/202428血液成分制备及保存（四）洗涤红细胞1.概述：洗涤红细胞是采用物理方式在无菌条件下将保存期内全血、浓缩红细胞、悬浮红细胞等制品用大量静脉注射用生理盐水洗涤，去除血浆和大部分白细胞，并将红细胞悬浮在生理盐水中制成的红细胞成分。5/9/202429血液成分制备及保存2.制备方法（1）．从冰箱中取出浓缩红细胞或悬浮红细胞，在室温放置30～60分钟。（2）．将四联盐水袋主袋上的针头插入红细胞袋的进针座内，把主袋内200ml盐水徐徐流入红细胞袋内，边加盐水边混合，混匀后再倒流回主袋内，将中间塑料管用小夹子夹住。（3）．5个袋装于两个离心桶中，平衡好后，离心桶对称放入离心机内，以4500r/min离心3分钟。（4）．离心后将主袋轻轻取出，悬挂于支架上，把上清及白膜层分入曾经盛有红细胞的袋内，然后热合并切断相连的管路，弃掉废液袋。（5）．重复2～4步骤，依次洗涤红细胞3次，用最后一袋盐水定量加入洗涤后的红细胞内，调节体积。（6）．在调节好体积的第三袋中相连的塑料管内充满红细胞，分段热合留样本，以供临床鉴定血型和交叉配型用。5/9/202430血液成分制备及保存3.特点①手工洗涤去除80%一90%的白细胞和98%以上的血浆蛋白；机器洗涤白细胞减至5×108/L以下，几乎不含任何血浆蛋白。②该制品不仅可低白细胞引起的NHFTR反应，也可以减少或避免血浆蛋白所致的过敏反应。③适应于自身免疫性溶血性贫血和阵发性睡眠性血红蛋白尿需输血的患者及对血浆蛋白、白细胞和血小板产生抗体的患者。④洗涤后的红细胞均应在24小时内输用。5/9/202431血液成分制备及保存4、质量标准(1)．红细胞回收率≥70%。(2)．白细胞清除率≥80%。(3)．血浆蛋白清除率≥90%。(4)．1U容量125ml±10%。(5)．最后上清液血红蛋白＜0.5g/U。(6)．血细胞比容为0.65～0.70。5/9/202432血液成分制备及保存5.保存和运输国内规定在2～6℃保存，自制备时起，在24小时内输注为好，运输时温度应在2～10℃。总之，从安全和疗效的角度，洗涤红细胞在洗涤后应尽快输注。5/9/202433血液成分制备及保存（五）冰冻解冻去甘油红细胞1.概述：红细胞代谢速度取决于保存温度，把保存温度降至红细胞代谢率几乎停止，以达到延长红细胞保存期的目的。在冰冻过程中，为防止血液结冰，破坏细胞内结构，可加入防冻剂。细胞内防冻剂：甘油、二甲基亚砜细胞外防冻剂：羟乙基淀粉5/9/202434血液成分制备及保存红细胞低温甘油保护剂甘油（g/v）79.2%、葡萄糖（g/v）8.0%、果糖（g/v）1.0%、EDTA·2Na（g/v）0.3%，用注射用生理盐水配成40%甘油应用液。

5/9/202435血液成分制备及保存2.制备【操作步骤】(1)．冻存将红细胞转移至医用聚乙烯血袋内，然后在30分钟内缓慢加入40%甘油保护剂，振荡混匀，室温30分钟后，直接置-80℃冰箱冷冻保存。(2)．解冻冰冻红细胞取出立即放入37℃恒温水浴箱，在10分钟内融化，离心去上清甘油。(3)．洗涤分别用9%氯化钠溶液和6%羟乙基淀粉溶液洗涤第1次，再用0.9%氯化钠溶液和6%羟乙基淀粉溶液分别洗涤第2次，最后用0.9%氯化钠溶液洗涤第3次。洗涤完成后2U红细胞灌注100ml生理盐水。由于冰冻红细胞在融化后，红细胞处于高渗状态，所以必须先加入9%氯化钠溶液，使红细胞膜内外的渗透压达到平衡，再分两次加入0.9%氯化钠溶液，使红细胞膜内的渗透压由高渗呈梯度逐渐过渡到等渗。5/9/202436血液成分制备及保存3、质量标准(1)．红细胞回收率≥80%。(2)．红细胞存活率≥70%。(3)．上清液中血红蛋白量≤1g/L。(4)．白细胞、血小板残留量≤1%。(5)．甘油残余量≤10g/L。(6)．体外溶血试验≤50%。(7)．冰冻红细胞容量200ml±10%或400ml±10%。5/9/202437血液成分制备及保存4.特点：冰冻解冻去甘油红细胞可以长期保存，一般保存期为10年。常用于自身输血和稀有血型红细胞的保存。5.保存和运输：①40%甘油的冰冻红细胞贮存在－65℃以下，20%甘油的冰冻红细胞贮存在－120℃以下。②解冻后红细胞贮存在2－6℃，保存期24h。③在冰冻状态下运输。5/9/202438血液成分制备及保存（六）辐照红细胞1.概述：输血相关性移植物抗宿主病（TA-GVHD）是指免疫缺损或免疫抑制的患者不能清除输入血液中具有免疫活性的淋巴细胞，使其在体内存活、增殖，将患者的组织器官识为非己物质，作为靶目标进行免疫攻击，从而导致的一种致命性输血并发症。5/9/202439血液成分制备及保存2.制备：利用射线（r射线和X射线）辐照浓缩红细胞、悬浮红细胞制品，损伤淋巴细胞细胞核的DNA而使其灭活和停止繁殖，达到对免疫低下患者的保护作用。5/9/202440血液成分制备及保存3.保存和运输：辐照后的红细胞最好尽快输用。保存温度1～6℃。运输温度1～10℃。5/9/202441血液成分制备及保存三、白细胞制品（1）手工制备法白膜法1)制备方法：用四联采血袋采集全血后，经过一次强离心，血浆分入第2袋，白膜层分入第3袋；第3袋再次轻离心，将富含血小板的血浆挤出，留在第3袋内的即为白细胞浓缩液。5/9/202442血液成分制备及保存2)主要缺点①由一个单位全血中分离的白细胞数量较少，为了满足治疗剂量，每次需采集5-10名献血者的粒细胞，造成病毒感染机会增多，白细胞抗原刺激产生的同种免疫反应增多。②本制品含有较多的淋巴细胞，可能导致输血相关性移植物抗宿主病。5/9/202443血液成分制备及保存（2）血细胞分离机单采白细胞（1）制备：①献血者要求Hb男＞120g/L，女＞110g/L，外周血白细胞计数(4~10)×109/L，外周血血小板计数≥150×109/L，PLT体积2-20fl，大小均一，血细胞比容≥0.33②严格执行WBC采集程序，设定相应参数③选择性给予皮质类固醇或C-SF刺激（2）性质：中性粒细胞含量≥1.0×1010/袋，血细胞比容≤0.15（3）保存和运输：应在采集后尽快使用，不适于贮存，20~24℃保存24h，运输条件20~24℃5/9/202444血液成分制备及保存四、血小板制品（1）手工制备1.富含血小板血浆（PRP）法①制备方法：四联袋采集制备成分用的全血，第一次轻离心，将富含血小板血浆（PRP）分入第2袋。将PRP第二次强离心，分出上层贫血小板血浆（PPP），约留20～50ml血浆制成血小板浓缩液。②特点：PRP法制备的血小板收率低，为原始血小板含量的60％～70%。使部分可用于血浆蛋白分离的血浆不能充分利用。5/9/202445血液成分制备及保存2.白膜法①制备方法：制备成分用的全血，经第一次强离心，血浆分入第2袋，将少量血浆和白膜层分入第3袋；将第3袋再次轻离心，挤出上层的富含血小板血浆，即为浓缩血小板。②特点：白膜法制备的血小板可得到更多的血浆。可分离出85%的血小板。血小板的功能要好于PRP法制备的血小板。5/9/202446血液成分制备及保存3.血细胞分离机采集血小板（1）制备：①献血者要求Hb男＞120g/L，女＞110g/L，外周血血小板计数≥150×109/L，PLT体积2-20fl，大小均一，血细胞比容≥0.36②严格执行PLT采集程序，设定相应参数③最终浓缩PLT制剂体积符合标准④采集完成后，轻摇混匀，贴好标签，放入PLT保存箱中保存（2）性质：PLT含量≥2.5×1011/袋，WBC混入量≤5.0×108/袋，红细胞混入量≤8.0×109/袋（3）保存和运输：未经开放处理并采用专用血袋的单采血小板保存期为5天，20~24℃运输和保存5/9/202447血液成分制备及保存五、造血干细胞(1)概述造血干细胞存在于骨髓、胎肝、外周血及脐带血中。造血干细胞移植包括骨髓移植、外周血造血干细胞移植（PBSC）、胎肝及脐血干细胞移植。5/9/202448血液成分制备及保存PBSC的优点：①无需在全麻下采髓，避免麻醉和采髓所致的危险②移植后骨髓造血重建功能恢复迅速③自体外周血干细胞移植可避免HLA抗原的同种免疫④外周血干细胞移植对射线的敏感性低，在体内植入率高。5/9/202449血液成分制备及保存（2）采集方法1.外周血干细胞的动员：正常情况下，干细胞处于骨髓、外周血、脾脏及干细胞池的动态平衡之间。骨髓中干细胞的浓度为外周血的10倍，为保证外周血干细胞移植的有效剂量，必须把造血干细胞从造血部位动员到循环池中。动员剂：化疗药物（环磷酰胺、柔红霉素）造血生长因子（粒系集落生长因子G-CSF、白细胞介素）其他类动员剂（硫酸葡聚糖等）

5/9/202450血液成分制备及保存2.外周血干细胞的采集：诱导动员2～3周后，外周血白细胞总数﹥1×109/L，单个核细胞﹥30%，血小板﹥50×109/L，可以用血细胞分离机通过白细胞单采收集到。一般认为用重力离心法分离时，造血干细胞位于淋巴细胞、单核细胞层内，因此把PBSC的采集又称为单个核细胞的采集。5/9/202451血液成分制备及保存5/9/202452血液成分制备及保存5/9/202453血液成分制备及保存血液非细胞成分的制备血液非细胞成分的制备是指新鲜冰冻血浆及其所含有效成分的制备。5/9/202454血液成分制备及保存一、新鲜冰冻血浆（一）制备方法1.制备新鲜液态血浆：根据成分制备目的不同，可用二联袋、三联袋和四联袋采集全血，经过一次或二次强离心，分出清除红细胞成分的血浆即为新鲜液体血浆。2.制备新鲜冰冻血浆：新鲜液体血浆立即放入－50℃具有风冷装置的速冻箱，或是立即放于－80℃酒精干冰浴槽内速冻，再放入－20℃以下贮存。5/9/202455血液成分制备及保存（二）性质：新鲜冰冻血浆含有全部凝血因子，包括不稳定的第Ⅴ因子和第Ⅷ因子。含有正常人血浆蛋白成分如白蛋白、免疫球蛋白等。5/9/202456血液成分制备及保存（三）保存和运输：新鲜冰冻血浆应保存在－20℃以下低温冰箱，保存期一年。运输时要保持冰冻状态。5/9/202457血液成分制备及保存二、冷沉淀（一）概述冷沉淀是新鲜冰冻血浆在1～5℃条件下不溶解的白色胶状沉淀物，它是由Pool博士在1964～1965年期间发现的，其被加热至37℃时呈溶解的液态，主要含有第Ⅷ因子、纤维蛋白原、血管性血友病因子（VWF)、第ⅩⅢ因子等成分。冷沉淀的发现开创了血友病治疗的新纪元，也是成分输血临床应用的典范。5/9/202458血液成分制备及保存（二）制备方法1）原料血浆的制备：同新鲜冰冻血浆（FFP）。2）原料血浆的融化1.Pool方法（4℃冷藏箱法）：将原料浆从－20℃冰箱内取出，置于4℃±2℃冷藏箱内缓慢融化，袋子底部不融化白色胶状物，即为冷沉淀。5/9/202459血液成分制备及保存2.快速融化离心法：①取出FFP，置室温5min②用金属棒把原浆袋上端的小孔串在一起，10袋或20袋为一组，悬吊在水浴槽上的摇摆架上③水浴槽的水温至16℃时，启动摇摆装置，摇动30分钟后温度维持在4℃，待FFP全部融化时，使水浴温度降至0-2℃，强离心，沉淀内大约15-30ml血浆，此为冷沉淀。5/9/202460血液成分制备及保存3.虹吸法：①取出FFP，置室温5min②将原浆袋浸没于2～6℃恒温水浴槽。另一空袋悬于水浴槽外，位置低于FFP。③FFP融化时，上清血浆被虹吸入空袋，冷