高考生物复习第十二单元生物技术实践第43讲微生物的培养与应用全国公开课一等奖百校联赛示范课赛课特等奖

第43讲微生物培养与应用第十二单元生物技术实践第1页[考纲点击]1.微生物分离和培养2.培养基对微生物选择作用3.利用微生物进行发酵来生产特定产物第十二单元生物技术实践第2页一、微生物试验室培养1．培养基(1)概念：人们按照微生物对____________不一样需求，配制出供其_______________营养基质。(2)营养组成：普通都含有水、__________、氮源和无机盐。另外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及________要求。(3)种类：按照物理性质可分为________培养基、半固体培养基和__________培养基。营养物质生长繁殖碳源氧气液体固体第3页煮沸消毒法紫外线消毒法灼烧灭菌高压蒸汽灭菌第4页3．大肠杆菌纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基配制步骤：计算→________→溶化→_________→倒平板。(2)纯化大肠杆菌①纯化大肠杆菌，其关键步骤是_________。②纯化培养方法：___________法和_______________法。③纯化培养原理：在培养基上得到由一个细胞繁殖而来肉眼可见_________，即可取得较纯菌种。称量灭菌接种平板划线稀释涂布平板菌落第5页二、土壤中分解尿素细菌分离和计数1．分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成_________，这种物质在把尿素分解成无机物过程中起_________作用。以尿素为唯一氮源培养基能促进分解尿素细菌生长和繁殖，并抑制或阻止其它微生物生长，从而将目标菌分离。2．统计菌落数目：统计样品中活菌普通用_____________________法。3．试验流程：土壤取样→制备____________→微生物培养与观察→细菌计数。脲酶催化稀释涂布平板培养基第6页三、分解纤维素微生物分离1．纤维素酶(1)组成：纤维素酶是一个复合酶，它包含C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。(2)作用第7页2．菌种筛选(1)方法：_______________。刚果红染色法第8页纤维素纤维素酶第9页1.(·北京海淀区期末)培养基中普通都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成份。(

)2.将土壤浸出液涂布在无菌选择培养基上分离分解尿素细菌，是否无菌操作影响较小。(

)3.培养基分装到培养皿后进行灭菌。(

)4.从有机废水中分离微生物用于废水处理时，接种后培养皿须放在光照培养箱中培养。(

)5.外植体消毒标准是既杀死材料表面微生物，又降低消毒剂对细胞伤害。(

)√√××√第10页6.(·高考四川卷T3D)用稀释涂布平板法培养计数，应选择有30～300菌落数平板。(

)7.(·山东青岛市期末)筛选能分解尿素细菌所利用培养基中，尿素是唯一氮源。(

)8.分解尿素细菌在分解尿素时，能够将尿素转化为氨，使得培养基酸碱度降低。(

)9.土壤中纤维素分解菌筛选流程中“选择培养”是必不可少。(

)10.在富含纤维素培养基中加入刚果红染色剂，若出现周围存在透明圈菌落，则说明筛选到了分解纤维素微生物。(

)√√××√第11页考点一培养基及微生物纯化培养技术培养基种类特点用途液体培养基固体培养基半固体培养基不加凝固剂工业生产加凝固剂(如琼脂)微生物分离、判定,活菌计数,菌种保藏观察微生物运动、分类、判定第12页种类制备方法原理用途举例选择培养基判别培养基培养基中加入一些化学物质依据一些微生物对一些物质特殊需求或抗性而设计从众多微生物中分离所需微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌培养基中加入某种指示剂或化学药品产生特定颜色或其它改变判别不一样种类微生物用伊红—美蓝培养基判别大肠杆菌第13页第14页条件结果惯用方法应用范围消毒灭菌较为温和物理或化学方法仅杀死物体表面或内部部分对人体有害微生物煮沸消毒法日惯用具巴氏消毒法不耐高温液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源强烈理化原因杀死物体内外全部微生物,包含芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法培养基及容器第15页比较项目平板划线法稀释涂布平板法关键操作接种环在固体平板培养基表面连续划线①一系列梯度稀释;②涂布平板法操作第16页比较项目平板划线法稀释涂布平板法注意事项菌体获取优点缺点每次划线前后均需灼烧接种环稀释度要足够高，为确保试验成功能够增加稀释度在含有显著菌落特征菌落中挑取菌体从适宜稀释度平板上菌落中挑取菌体能够依据菌落特点取得某种微生物单细胞菌落既能够取得单细胞菌落,又能对微生物计数不能对微生物计数操作复杂，需要涂布多个平板第17页第18页第一次操作每次划线之间划线结束目标杀死接种环上原有微生物杀死上次划线后接种环上残留菌种，使下次划线菌种直接起源于上次划线末端，使每次划线菌种数目降低杀死接种环上残余菌种，防止细菌污染环境和感染操作者第19页第20页检测培养基平板灭菌是否合格第21页灼烧将聚集菌体逐步稀释方便取得单个菌落B第22页溶解氧营养物质第23页成份ⅠⅡⅢ粉状硫10g＋＋＋KH2PO44g＋＋＋FeSO40.5g＋＋＋蔗糖10g＋－＋(NH4)2SO40.4g－＋＋第24页成份ⅠⅡⅢH2O100mL＋＋＋MgSO49.25g＋＋＋CaCl20.5g＋＋＋固氮自养异养第25页解析:(1)为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种前，随机取灭菌后空白平板先行培养一段时间。(2)接种环、接种针等金属用具可直接在酒精灯火焰充分燃烧层灼烧，以到达快速彻底灭菌目标。在第二次及以后划线时，总是从上一次划线末端开始划线，其目标是将聚集菌体逐步稀释方便取得单个菌落。(3)比较A和B能够看出：A培养基中细菌分布呈线性，是用平板划线法接种培养后得到结果；B培养基中细菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到结果。第26页(4)振荡培养能够提升培养液中溶解氧含量，还能够使菌体与培养液充分接触，提升了营养物质利用率，所以振荡培养细菌比静置培养细菌生长速度快。(5)从表格中可看出，Ⅰ培养基中无氮源，Ⅱ中无碳源，Ⅲ中为完全培养基。由此可知能在Ⅰ中生存甲只能是固氮微生物，能在Ⅱ中生存乙是自养微生物，丙只在Ⅲ中存活，为异养微生物。第27页考点二微生物计数方法比较项目间接计数法

(稀释涂布平板法)直接计数法

(显微计数法)原理当样品稀释度足够高时,培养基表面生长一个菌落,起源于样品稀释液中一个活菌,经过统计平板上菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积样品中微生物数量第28页比较项目间接计数法

(稀释涂布平板法)直接计数法

(显微计数法)公式缺点结果每克样品中菌落数＝(C÷V)×MC:某稀释度下平板上生长平均菌落数;V:涂布平板时所用稀释液体积(mL);M:稀释倍数每毫升原液所含细菌数:每小格平均细菌数×400×104×稀释倍数当两个或多个菌体连在一起时,平板上观察到只是一个菌落不能区分细胞死活比实际值偏小比实际值偏大第29页比较项目对照重复目标实例排除非测试原因对试验结果影响排除偶然原因对试验结果影响空白对照：确定培养基制作是否合格同一稀释度涂布最少3个平板第30页第31页第32页第33页70～75℃煮30分钟(或80℃煮15分钟)牛奶营养成份不被破坏B第34页3.4×106偏小个别菌落可能是由2个或多个细菌形成伊红—美蓝(金属光泽紫)黑色第35页考点三微生物筛选与判别第36页第37页比较项目土壤中分解尿素细菌分离分解纤维素微生物分离方法原理利用以尿素为唯一氮源选择培养基进行选择培养利用富含纤维素选择培养基进行选择培养只有分解尿素细菌能够合成脲酶，才能在以尿素为唯一氮源培养基上生长因为培养基中含有丰富纤维素，所以能够分解纤维素微生物含有更多生存机会而大量繁殖第38页比较项目土壤中分解尿素细菌分离分解纤维素微生物分离判别在培养基中加入酚红指示剂,指示剂变红说明菌落中菌体为分解尿素细菌刚果红染色法，周围出现透明圈菌落为分解纤维素微生物菌落第39页涂布平板选择第40页B培养基灭菌、接种过程中进行无菌操作第41页培养液ABCD纤维素25g/L－25g/L25g/L纤维素酶－－1μg/L－NaNO3－3g/L－3g/L牛肉膏－－3g/