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文档简介

主讲老师：邢煜骞噬菌体展示技术流程噬菌体展示技术的流程抗体库的构建抗体的筛选和富集吸附结合洗脱扩增富集筛选效率的检查克隆的鉴定抗体的表达和纯化抗体库的构建人B淋巴细胞mRNA加入PCR扩增引物扩增抗体重、轻链可变区基因逆转录合成cDNA第一链将VH、VL基因与衣壳蛋白基因连接后克隆到噬菌体质粒载体中转化大肠杆菌，辅助噬菌体超感染抗体片段-衣壳蛋白融合蛋白被包装于噬菌体尾部吸附结合经典筛选法：主要为固相筛选法和液相筛选法，用于抗原性质明确的抗体筛选。固相筛选法通过包被在酶标板或其他固相介质上的抗原富集高亲和性的噬菌体；液相筛选法是将生物素化的抗原包被在与亲和素偶联的磁珠或琼脂糖上，进行抗原特异性结合的方法。通过多次筛选，抗原得到高亲和力的噬菌体。封闭：BSA、脱脂奶粉洗脱将对抗原特异性的PhAb从抗原柱上洗下来酸洗脱法：盐酸甘氨酸缓冲液、柠檬酸、盐酸碱洗脱法：三乙胺其他洗脱法：尿素、胍盐、硫氰酸盐扩增富集洗脱下来的PhAb感染宿主细菌进行扩增。克隆的鉴定对经多轮筛选获得的阳性克隆子进行鉴定，获得与目标抗原特异性结合抗体。ELISA、免疫印迹、竞争抑制、交叉反应小结为什么噬菌体展示技术要经过多轮的筛选？文

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