usp39阿齐霉素及其检验法

usp39阿齐霉素及其检验法

2016年4月1日USP39

阿奇霉素

Azithromycin

C38H72N2O12XH2O(无水物)749.00[83905-01-5]

(2R,3S,4R,5R,8R,10R,HR,12R,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基

30-甲基-a-L-核-己毗喃糖基)氧]2乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,

12,14-七

甲基-11-H3,4,6-三脱氧3(二甲氨基)-8-D-木-己毗喃糖基]氧卜1-氧

杂-6-氮杂环

十五烷-15-酮。

9-氧代-9a-氮杂-9a-甲基-9a-高红霉素A

一水合物767.02[121479-24-4]

二水合物785.02[117772-70-0]

定义

阿奇霉素含一分子或两分子的水。按无水物计算，每mg阿奇霉素中

C38H72N2O12的含量应为945口g-1030Hgo

------USPAzithromycinRS)

氮杂红霉素AUSP参比对照品；(USPAzaerythtomycinARS)

阿奇霉素USP鉴别对照品；(USPAzithromycinIdentityRS)

德糖胺阿奇霉素USP参比对照品(USPDesosaminylazithromycinRS)

N-去甲基阿奇霉素USP参比对照品（USPN-DemethylazithromycinRS）

阿奇霉素杂质FUSP参比对照品（USPAzithromycinRelatedCompound

F）

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2016年4月1日

【鉴别】一一

A：

（如果样品的红外谱图与标准谱图不同时，用相同体积的甲醇溶解等

量的样

品和对照品，在真空条件下，水浴加热至80,持续30分钟，挥干溶

剂。用残

渣再做检测。）

B：在含量测定项下记录的色谱图中，供试样品溶液中阿奇霉素峰的

保留时

间应与对照品溶液中阿奇霉素峰的保留时间一致。

比旋度<781S>；：-450〜-49o,温度20℃。

测试溶液：20mg/ml,无水乙醇溶液。

结晶性<695>：应符合要求。

（当为无定形时，大多数微粒不存在双折射和消光位置。）

9.0〜11.0。

样品储备溶液：4mg/ml的甲醇溶液；

样品溶液：用水将样品储备溶液（体积比：1:1）稀释成2mg/ml的溶

液。

水分，方法l<921>：当标为无结晶水时不得大于2.0%；

二水合物，水分在4.0%~5.0%之间；

一水合物在1.8%~4.0%之间，当干燥失重测定符合要求时，水分可

以在

4.0%~6.5%o

干燥失重（当标签标示为一水合物，且水分含量在4.0%〜6.5%范围

内时，

进行此项测定。）热分析<891>：［注：用于检测的量可依据仪

器的灵敏度进行

适当的调整。］精确称量10mg阿奇霉素，在一适宜的校准仪器中，

用“热解重

量分析法”测定挥发性物质的含量。在35ml/min恒定速率氮气氛中，

将样品以

10℃/min的速率从环境温度加热到150℃。在“差示热分析图”中，

标示出干燥

失重的导数（每分钟失重的百分数）；计算70℃、130℃处的转折拐点：

从环境

温度到70℃,失重不多于4.5%；70℃拐点到130℃拐点，失重量在

1.8%〜2.6%。

含量---

溶液A：10M氢氧化钾溶液

溶液B：将6.7g/l磷酸氢二钾溶液用溶液A调节pH至ll.Oo

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2016年4月1日溶液C：将6.7g/l

磷酸氢二钾溶液用磷酸调节pH至ll.Oo

流动相：乙月青：溶液B(60:40)

稀释液：乙月青：溶液C(60:40)

系统适应性溶液：阿奇霉素USPRS、氮杂红霉素AUSPRS分别按下法

制

备0.5mg/ml的溶液。先将阿奇霉素USPRS和氮杂红霉素AUSPRS溶

解于乙月青

中，取5%的最终溶液，用稀释液定容。

对照品溶液：阿奇霉素USPRS按下法制备0.53mg/ml的溶液。先将阿

奇霉

素USPRS溶解于乙月青中，取2%的最终溶液，用稀释液定容。

样品溶液：阿奇霉素样品按下法制备0.53mg/ml的溶液。先将阿奇霉

素样品

溶解于乙月青中，取2%的最终溶液，用稀释液定容。

色谱系统一一

(见色谱法<621>,系统适应性)；

模式：液相色谱法

检测波长：UV210nm

色谱柱：4.6-mmX25-cm,用粒径为5-um的L67

柱温：40C

流速：1mL/分钟。

进样量：10UIo

系统适应性

进样：对照品溶液和系统适应性溶液。

[备注一一氮杂红霉素A的相对保留时间为0.7,阿奇霉素为1.0]

适应性要求

分离度：氮杂红霉素A与阿奇霉素的分离度不得少于3；系统适应性

溶液。

拖尾因子范围：阿奇霉素峰的拖尾因子应为0.8〜1.5；对照品溶液。

相对标准偏差：不大于1.10%；对照品溶液。

分析

进样：对照品溶液和样品溶液。

按下式计算每mg阿奇霉素中含C38H72N2O12的量，单位是Ug：

(rU/rS)X(Cs/Cu)XP

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2016年4月1日式中：rll——样品

溶液中的峰响应值；

rS——对照品溶液中的峰响应值。

Cs——对照品溶液中USP阿奇霉素RS的浓度；

Cu——样品溶液中阿奇霉素的浓度；

P——USP阿奇霉素参比对照品的效价(ug/mg阿奇霉素)

限度：按无水物计，945-1030Hg/mgo

杂质

无机杂质

炽灼残渣<281>；：W0.3%,炭化残留物用2ml硝酸及5滴浓硫

酸润湿。

重金属，方法二<231>：(25ppm。

有机杂质

方法1——［备注一一如果杂质谱中有红霉素A月亏和红霉素A亚胺酸,

用方

法1。］

使用的水电阻系数不小于18Mohm-cm.

流动相一一乙月青：溶液A(250:750)。用5M氢氧化钾调节pH至10.55

土

0.05o

溶液A——20mM磷酸二氢钾的水溶液。

对照品储备溶液一一称取并用乙月青溶解一定量的USP德糖胺阿奇霉素

参比

对照品(USPDesosaminylazithromycinRS),USPN-去甲基阿奇霉素参

比对照品

(USPN-DemethylazithromycinRS)>USP氮杂红霉素A对照品(USP

AzaerythromycinARS)和USP阿奇霉素参比对照品，获得已知浓度分

别为

45Ug/mL,105Ug/mL,150Ug/mL和160Ug/mL的溶液。

对照品溶液一一将对照品储备溶液用流动相稀释，获得已知德糖胺阿

奇霉素

USP参比对照品（USPDesosaminylazithromycinRS）,N-去甲基阿奇霉

素USP参

比对照品（USPN-DemethylazithromycinRS）和阿奇霉素USP参比对照

品的浓

度分别为0.9Ug/mL,2.1Ug/mL和3.2Ug/mL的溶液。

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2016年4月1日样品溶液——

0.33mg/mlo称取一定量的阿奇霉素，放入合适的容量瓶中，

加入乙月青（乙月青用量为容量瓶体积的5%）,若有必要可超声处理使溶

解。用流动

相稀释至刻度，混匀。

色谱系统（见色谱法<621>）------

类型：液相色谱仪。

液相色谱仪配有一个安培型电化学检测器（该检测器配有一个双玻璃

碳电

极，在氧化性保护模式下操作，电极1设置在+0.70V,电极2设置

在+0.85V）；

色谱柱：

分析柱：4.6-mmX15-cm,粒径3-口m的L49填充。

检测器预热：28°

自动进样器：5°

流速：1mL/分钟。

进样量：50UL

系统适应性

进样：对照品溶液。

适应性要求

分离度：阿奇霉素和氮杂红霉素A之间的分离度应不低于3.0。

拖尾因子：阿奇霉素峰的拖尾因子W2.0,N-去甲基阿奇霉素峰的拖尾

因子

W2.5。

相对标准偏差：各杂质相对标准偏差W10.0%。

分析

进样：对照品溶液和样品溶液。

［备注一一记录样品溶液的色谱图，时间不少于阿奇霉素峰保留时间的

3.3

倍。］

按下列公式计算阿奇霉素中德糖胺阿奇霉素

(Desosaminylazithromycin)>

N-去甲基阿奇霉素(N-Demethylazithromycin)和氮杂红霉素A的百分

比:

(rU/rS)X(Cs/Cu)XFX100

式中：rU——样品溶液中相应待测物质的峰面积;

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2016年4月1日

rS——对照品溶液中相应待测物质的峰面积。

Cs——对照品溶液中USP参比对照品的浓度（Ug/ml）；Cu—

一样品溶液的浓度（ug/ml）；F-----单位转换（O.OOlmg/ug）

按下列公式计算阿奇霉素中其他有关物质的百分比：

（rU/rS）X（Cs/Cu）XFX100

式中：rU——样品溶液中其他单个杂质的峰面积；

rS——对照品溶液中阿奇霉素的峰面积。

Cs——对照品溶液中USP阿奇霉素参比对照品的浓度（Ug/ml）；

Cu-----样品溶液的浓度（口g/ml）；F-------单位转换（O.OOlmg/Ug）

限度要求：见杂质表L

杂质表1

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2016年4月1日方法2——［备注一

—如果杂质谱中有红霉素A月亏和红霉素A亚胺酸，用方

法1。］

溶液A——1.8mg/ml无水磷酸氢二钠的水溶液。用1N氢氧化钠溶液

或10%

磷酸调节pH至8.9o

溶液B——乙月青和甲醇的混合液（3:1）.

溶液C——1.73mg/ml磷酸二氢钱溶液。用氨水TS调节pH至10.0+

0.05o

溶液D——甲醇、乙月青和溶液C(7:6:7)。

流动相一一见如下梯度表。

系统适应性溶液一一用溶液D溶解，获得已知USP阿奇霉素杂质F参

比对

照品浓度为0.0165mg/ml、USP德糖胺阿奇霉素参比对照品浓度为

0.027mg/ml

的溶液。

对照品溶液一一用溶液D溶解，获得已知USP阿奇霉素参比对照品浓

度为

86Ug/ml的溶液。

样品溶液一一用溶液D溶解，获得已知阿奇霉素浓度为8.6mg/ml的

溶液。

色谱系统(见色谱法<621>)——

模式：液相色谱仪。

检测器：UV210nmo

色谱柱：—*个4.6-mmX25-cm色谱柱；用5-Hm粒径的L1填充。

柱温：60Co

流速：1ml/分钟。

进样量：50HIo

系统适应性

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2016年4月1日

进样：系统适应性溶液和对照品溶液。峰谷比值：21.4,系统适

应性溶液。［备注一一峰谷比值计算公式：R=Hp/Hv

Hp：德糖胺阿奇霉素峰基线以上的高度；

Hv：除德糖胺阿奇霉素峰和阿奇霉素杂质F峰外，基线以上的峰曲线

最低点的高度。］

拖尾因子：0.8〜1.5,对照品溶液。分析

进样：对照品溶液和样品溶液。

［备注一一在阿奇霉素3'-N-氧化物之前和在3-脱氧阿奇霉素（阿奇霉

素B）之后析出的峰忽略不计。面积小于对照品溶液中阿奇霉素峰面积0.1

倍的峰忽略不计。］

按下式计算阿奇霉素中各杂质的百分比：

（rU/rS）X（Cs/Cu）XPXF1X100/F2

式中：ru——样品溶液中各杂质的峰响应值；

rS——对照品溶液中阿奇霉素的峰响应值；

Cs——对照品溶液中USP阿奇霉素参比对照品的浓度（mg/ml）；

Cu——样品溶液中阿奇霉素的浓度（mg/ml）；P——USP阿奇霉

素RS的效价（Ug/mg阿奇霉素）F1——单位转换系数（O.OOlmg/

Ug）；F2——相对响应因子（见表2）限度要求：见杂质表2

杂质表2

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2016年4月1日

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2016年4月1日

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2016年4月1日

【包装和贮藏】一一密封保存

标示一一标签应说明此为一水合物还是为二水合物。用任何方法制得

的阿奇霉

素，其含量均应该以无水物C38H72N2O12来计算标示。

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2016年4月1日USP附录翻译

红外吸收<197>

6种方法用于配制干性的试验样品和分析用的参照标准。在试验条件

下，参

照<197K>,指将样品与浪化钾充分混合。参照<197M>,指

在试验条件下将样品

在矿物油中分散。参照<197F>,指在试验条件下将样品悬浮于适

当的压片板之

间（如：氯化钠或漠化钾）。参照<197S>,指用专论中特定的溶

剂配制已知浓度

溶液，将该溶液在0.1mm目筛下检测。参照<197A>,指在试验

条件下将样品与

用于削减全反射分析内部的反射因素密切联系。参照<197E>,指

在试验条件下

将样品压制成一个薄片进行红外微观分析。削减全反射<197A>

和<197E>技术被

认为是<197K>、<197M>><197F>和<197S>的替代

方法，进行定量试验，且参

照标准图谱也是按类似方法获得的。

除非专论中有特别说明的，应在2.6口m到15Um(3800cm-l-650cm-l)

的变

化范围内记录试验样品和美国药典参比对照品的图谱。供试样品的配

制应与参照

对照品一致，应先将供试样品按参比对照品的特定条件干燥，有其他

的特殊要求

或采用的该参照对照品在未经干燥的情况下除外。在相同波长下，只

有当供试样

品与美国药典参照对照品的配制一致时，可比性最大。

某些情况下，样品的红外图谱与标准图谱存在差异，可视为存在多晶

型物，

这种结果不经常被接受(见分光光度仪和光散过程)。除非专论中有

特别说明，

应继续进行试验。如果红外分析样品和标准图谱出现差异，在等体积

合适的溶剂

中，溶解等量的待测样品和对照品，在相同条件下，在相似的容器内，

蒸发溶液

至干，对残余物重复进行试验。

旋光度中的<781s>

药品中比旋度〈781S〉表示由样品溶液观察到的光学旋光值计算而得

到的比

旋光度。除非特别说明，光学旋光值的测定是在25℃时用589nm光

线测得的。

测定时使用光电偏光计，每一次测试前都需要将溶剂的旋光值调零。

使用偏光计

时，将同一个装有空白溶剂的旋光管校正后，不少于5次测定的平均

值是有效的。

测试供试液旋光值时的温度应保持在固定值的±0.5℃。使用同一个旋

光管测定样

品以及空白溶剂。每次读数据时保持旋光管的角度一致。将旋光管放

置在每次光

线都能够从同一方向通过的地方。除非有其他规定，比旋光度是以干

燥品或者以

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2016年4月1日无水基准来计算的。

溶液的光学旋光值应在30min内测定，如果已知待测物质会发生消旋

或者旋

光改变，那么应该小心注意将待测物溶解于溶剂与将溶液放于旋光管

之间的时间

标准化。

结晶性<695>

在专论中要求对药品进行结晶性分析时，需作此试验。

操作一一详细介绍按照[776]o

[776]中的结晶性特征一一物质的结晶性可认为是，确定与专论中

所需结

晶性一致的一种特征。除个别专论有特殊要求外，在干净的玻璃载玻

片上，放上

一些矿物质油包裹的样品颗粒。用偏振显微镜检测此混合物：当显微

镜的级数旋

转时，此颗粒显示双折射（干涉色）和消光现象。

pH<791>

理论（略）

pH计校正用的缓冲溶液

pH计校正用的缓冲溶液可以按照附表进行制备。国家科学与技术委员

会

（NationalInstituteofScienceandTechnology）有缓冲盐所必需的纯度。

溶液可以

存放在带密封口或二氧化碳吸收管的硬质玻璃或者聚乙烯瓶中。新制

的溶液使用

不能超过3个月，并且溶液要用无二氧化碳水制备。表中给出了缓冲

溶液的pH

值随温度的变化值。这里所列的是适应于标出摩尔浓度的溶液。然而,

为了方便

制备，在摩尔浓度的基础上，与其标出1000g溶剂不如稀释成1000ml

体积。这

里指示的量是考虑了其他因素计算出来的。

标准缓冲液的pH值：

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2016年4月1日

草酸钾，0.05m——精确称取KH3(C2O4)・2H2O12.61g,加水使溶解并

稀释至1000mlo

苯二甲酸氢钾，0.05m——精确称取在100℃干燥1小时的

KHC8H40410.12g,加水使溶解并稀释至1000ml□

磷酸盐，0.05m——精确称取在120℃干燥2小时的Na2HPO43.53g与

3.39gKH2P04,加水使溶解并稀释至1000mlo

硼砂，0.01m——精确称取Na2B4O7•10H203.80g,加水使溶解并稀

释至1000ml。避免空气中二氧化碳进入。

氢氧化钙，饱和(25℃)——于25℃,用无二氧化碳的水制备氢氧化

钙的饱和溶液，取上清液使用。存放时应防止空气中的二氧化碳进入。一

旦混浊，应弃去重配。

由于环境和所用pH计的不同，给出一个适合于所有电势测定pH计的

用法说明是不实际的。一般的规则见一下几段，这些规则是每个仪表厂家

都实行的说明书。如果在使用前存在盐桥，检查电极。按需要补充盐桥溶

液，并且注意说明书或电极厂家标出的其它事项。

为了校正pH计，应选择二种pH值相差小于4个pH单位的标准缓冲

液，并使供试品的pH值处于二者之间。在测试温度下向电池里加入第一

种标准缓冲溶液。将温度控制在溶液的温度，调节刻度使仪器与表列数值

一致。用第二种标准缓冲溶液多次冲洗电极和电池，然后在测试温度将它

加入到电池里。误差应不大于±0Q7pH单位。若大于此偏差，则应小心调

节斜率或温度使示值与第二种标准缓冲液的表列数值相符。重复上述定位

与斜率的调节操作，至仪器示值与标准

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2016年4月1日缓冲液的规定数值

相差不大于0.02pH单位。否则，需要检查仪器或更换电极后，

再行校正至符合要求。当系统运行满意后，用少量待测液冲洗电极和

电池几次，

将待测液加到电池里，读取pH值。在测定pH时，用无二氧化碳水（见

溶剂、指

示剂与溶液的选择的水）制备溶液或稀释待测液。在所有的pH测试中，

都要使之

有充足的时间稳定。

指示剂和测试纸（见溶剂、指示剂与溶液中的指示剂和指示测试纸）

的pH

值足够接近就符合要求了。

关于缓冲液的讨论及测试与分析所需的标准缓冲液的成分，见溶剂、

指示剂

与溶液中的缓冲溶液。

水分，方法l<921>

方法1（滴定）

用方法la测定水份，除非药品单个说明中有特殊规定。

方法la（直接滴定）

试剂---按如下方法制备卡尔-费休氏（KarlFischer）试剂。将125g

碘加入到

含有670ml甲醇以及170ml吐碇的溶液中，冷却。用250ml量筒量取

100ml毗咤，

并置于冰浴中，通入二氧化硫直到溶液体积达到200ml。将此溶液慢

慢地滴加到

冷却的碘混合物中，振荡，直至碘溶解。将此溶液移到仪器中，在标

定之前放置

过夜。刚配制的此溶液1ml相当于5mg水，但是它会逐渐变质，故而

应在使用前

一小时内对其进行标定（如果经常用的话，则需要每天进行标定）。

使用时，避

光。将此溶液在密封良好、具玻璃瓶塞的容器中避光冷藏保存。

商业上可用的、稳定的卡尔-费休氏试剂也可以使用。除了此碇、乙醇

和甲醇

以外，包括溶剂或者碱在内的商业上销售的试剂也可以使用。在一些

药品的单个

说明书中，稀释试剂应该按制造商提供的方法进行稀释。甲醇或者其

他合适的溶

齐IJ,如乙二醇甲醛也可作为稀释液。

样品溶液一一除特别说明外，精密称量大约含有10〜250mg水的供试

品。

如果供试品为推进式气雾剂，在冷藏室中至少冷冻2h。在10℃或者

更高的温

度下，测试10.0ml的混合均匀的样品到滴定终点。

如果供试品为胶囊，则不能少于4粒。

如果供试品为片剂，则应在不影响结果的大气温度、湿度的环境中将

不少于

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2016年4月1日4片的供试品磨成

粉末后再进行测试。

如果供试品吸湿，用干燥的注射器将一定体积的甲醇或其他适宜的溶

剂注入

到已“去皮”的容器中，称重，振荡至供试品溶解。利用同一注射器

将此溶液转移

到测定方法中的滴定瓶中。用另外的甲醇或其他适宜的溶剂重复此步

骤，并将洗

液一并加入到上述滴定瓶中，并立即滴定。按“剩余滴定中水溶液标

定”中的方法，

测定溶解供试品、洗涤容器及注射器时所用相同体积的溶剂中的水分

含量，单位

为mg；从滴定供试品所得水含量的数值（单位mg）中减去上述数值。

在100℃的密

闭环境中干燥3h,于干燥器中冷却，称重，其与容器初始重量的差值

即为供试品

的重量。

试剂标定一一将足量的甲醇或其他溶剂加入到滴定瓶中，以盖住电极

为限；再

加入试剂，直到滴定终点特征性颜色出现，或者直到约200mv电压下

产生

100±50mA的直流电。要测定痕量的水分含量（W1%）,则需要用酒

石酸钠作为便

利的水分参考物质。用差量法精确称量150〜350mg酒石酸钠

（C4H4Na2O6•2H2O）,

并快速地加入到体系中，滴定到终点。水分平衡因子F,单位为mg

水/ml试剂,

可用以下式子计算:

2（18.02/230.08）（W/V）

其中，18.02、230.08分别为水、酒石酸钠的分子质量；W是二水合

酒石酸钠

的质量，单位mg；V为第二次滴定时所消耗的试剂体积，单位ml。

若要精密地测定水分含量（21%）,则须用纯水作为参考物质。用称

量管，

或者已称重的注射器（或微型称量管），依据差量法，快速地称取25〜

250mg

水，具体的称取量依据试剂浓度以及滴定管的尺寸来选择（参考容量

仪器31）,

滴定到终点，用下式计算水分平衡因子F,单位mg水/ml试剂：

W/V

其中，W是水的重量，单位mg；V为所用试剂的体积，单位ml。

测定方法一一除有特别说明外，量取35〜40ml甲醇或其他溶剂到滴

定瓶中，

用试剂滴定到仪器标示的或者可视的滴定终点，以消耗任何存在的水

分。（此次

滴定所消耗的体积没有用途，因为它不会列入计算中）。迅速地加入样

品溶液，摇

匀，再次用试剂滴定到仪器标示的或者可视的滴定终点。用下式计算

样品中的水

分含量：

SF

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2016年4月1日其中，S为第二次

滴定中所消耗的试剂体积，单位为ml；F为试剂的水分平衡因

子。

方法1b（剩余滴定）

仪器、试剂、样品溶液一一与方法la相同。

剩余滴定中水溶液的标定一一用甲醇或其他溶剂将2ml水稀释到

1000ml制成

水溶液。按“试剂标定”中的方法，用25.0ml试剂标定此水溶液。用

下式计算每1ml

水溶液中水的含量，单位mg:

V,F/25

其中，V'为所消耗的‘试剂’体积；F为试剂的水分平衡因子。每周

测定水溶液中

的水含量，并定期地对试剂进行标定。

测定方法一一当药品的单个说明书中要求需要用方法1b测量含水量

时，量取

35〜40ml甲醇或其他溶剂于滴定瓶中，用试剂滴定到仪器标示的或者

可视的滴定

终点。迅速地加入样品溶液，摇匀；加入精确称量的试剂（过量）。经

过足够的时

间让反应完全，用标定过的水溶液滴定未消耗的试剂到仪器标示的或

者可视的滴

定终点。用下式计算样品中的水含量，单位mg：

F（X'-XR）

其中，F为试剂的水分平衡因子;X'为加入样品后所加入试剂的体积，

单位ml；

X为用于中和未消耗掉的试剂所需已标定的水溶液的体积，单位ml；

R为V'/25的

比值（每ml试剂/每ml水溶液）。

方法1c（库仑滴定）

仪器装置一一任何商业提供的包括一个配有合适电极和磁力搅拌器

的绝对

密闭的仪器都是可用的。该装置的微处理器控制着分析过程并显示最

后的结果。

当消耗的电流能被完全测定时，不需要对仪器进行校正。

试剂----见方法la。

样品溶液一一如果样品为可溶性固体，精确称量一定量样品，用无水

甲醇或

其他溶剂将其溶解。液体样品亦可以按此法制备，或者也可在其他无

水溶剂中制

备。

共28页

2016年4月1日如果样品是不溶性

固体，用无水溶剂将水分萃取出来，精确称量后，注入到

电解质溶液中，或者依照蒸发的方法，在干燥的惰性气体流中，在管

中加热样品，

水蒸气和惰性气体一同通入到电池中。

测定方法一一精确称量大约含0.5〜5mg水（或者按照仪器说明所标示

的量）的

样品溶液，用干燥的注射器注入阳极，摇匀，用库仑滴定法滴定到测

定终点。从

仪器显示上直接读取测试溶液中的水分量，并计算其在物质中的百分

量。做一次

空白测定，以做一些必要的修正。

灼烧残渣<281>

测定方法一一卅期（可为硅、粕、石英、瓷等材质）在600±50℃下灼烧

30min,

然后在装有硅胶或其他合适干燥剂的干燥器中冷却，称重。精确称量

供试品1〜

2g（或按各专论项下所规定的重量），置于该卅堪中。用少许硫酸（通

常为1ml）

湿润样品，在尽可能低的温度下，小心加热至样品完全炭化，冷却，

除有特别说

明外，用少许硫酸（约1ml）湿润剩余物，小心加热直到不再有白色

泡沫产生；

然后在600±50℃下（除有特别说明外）灼烧，直到残留物完全灰化。

在上述操作

的过程中要确保不着火。在盛有硅胶或其他干燥剂的干燥器中冷却，

称重，计算

残渣的百分含量。

除特别说明外，如果残渣重量超过了各药品项下的限定值，则须重复

用硫酸

湿润、加热、灼烧等步骤，直到残留物连续两次的测量数值不大于

0.5mg或者其

百分含量在各专论的限定值内。

灼烧时置于一个通气性良好的罩内，但要防止接触空气流，在尽可能

低的温

度下达到碳的完全燃烧。如果想使用烘炉也可以，但要使温度在600

±50℃下。

烘炉的校正可以使用一个合适的数字温度计，按标准和技术国家委员

会的要

求，用标准热电偶去校准工作热电偶探头。

烘炉的测量和控制电路要通过检测炉子的温度控制装置进行准确验

证，允许

公差为土25℃。

重金属，方法二<231>；

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2016年4月1日方法1和3（略）

［注：此方法用于汞、秘、碑、镇、锡、镉、银、铜、铝等金属的检测］

特殊试剂

硝酸铅贮备溶液——将159.8mg硝酸铅溶解于100ml水中，加入1ml

硝酸，用

水稀释到1000ml即得硝酸铅备溶液。配制与储存用的玻璃容器均不

得含可溶解的

铅盐。

标准铅溶液一一临用前，用水将10.0ml的硝酸铅贮备溶液稀释至

lOO.Omlo每

1ml标准铅溶液中含有相当于lOHg的铅。利用此标准铅溶液，配制

成每100UI标准

铅溶液中含1g供试样品的对照溶液，此溶液中相当于每1000000份

待测样品中有

一份为铅。方法n

此方法用于在方法I中不能产生清澈、无色的测试液的情况下，或者

是由于自

身聚合的性能而干扰形成金属二价硫离子沉淀的物质，或者是挥发及

不挥发性

油。

注意一一此方法不能用于汞金属的检测。

PH=3.5醋酸缓冲液——将25.0g醋酸钱溶解于25ml水中，加入38.0ml

的6N盐

酸溶液。若需要的话，用6N盐酸或6N氢氧化镂溶液调PH值至3.5,

用水稀释至

100ml,混合均匀。

标准溶液----向50ml的比色管中加入2ml标准铅溶液（20Ug的铅），

然后用水

稀释至25ml。在PH计或精密PH试纸检测下，用1N醋酸或6N氨水

调PH值至3.0-

4.0,用水稀释至40ml,混合均匀。

样品溶液一一按下式计算测试所需样品的质量，单位为g：

2.0/（1000L）

其中，L为重金属限度（％）。将称量的样品置于培烟中，加入足量的

硫酸以

湿润样品，在低温下小心地灼烧样品直至完全炭化。（在灼烧过程中

此用烟需盖

上，但不用盖得太紧密）。加入2ml硝酸及5滴硫酸，小心加热至不再

有气泡产生。

在500〜600℃炉子中灼烧，直至碳完全燃烧。冷却后加入4ml的6N盐

酸，盖上盖子，

在蒸气浴中煮15min,然后移去盖子，慢慢在蒸气浴上蒸发至干。用

一滴盐酸溶

液润湿残留物后，再加入10ml热水，煮2分钟。然后滴加6N氨水调

溶液为碱性(用

共28页

2016年4月1日石蕊试纸检测)，用

水稀释至25ml后，在PH计或精密PH试纸检测下，用1N醋酸

调PH值至3.0—4.0。如需要可过滤一遍，并用10ml水冲洗生锅和过

滤器，将滤液

和洗涤水倒入一个50ml的比色管中，最后用水稀释至40ml,混合均

匀。

测定方法一一向标准溶液、样品溶液的试管中分别小心地加入

2mlPH=3.5醋

酸缓冲液，然后加入1.2ml硫代乙酰胺一丙三醇碱性试液

(Thioacetamide-glycerin

baseTS),用水稀释到50ml,摇匀，放置2min,在白色背景下，自上

而下透视：

样品溶液的颜色要不深于标准溶液的颜色。

［注----硫代乙酰胺一丙三醇碱性试液(Thioacetamide-glycerinbase

TS)：将

0.2ml硫代乙酰胺试液和1ml丙三醇碱性试液混合，沸水浴加热20秒

钟。混合液即

用即配。

硫代乙酰胺试液：将4g硫代乙酰胺溶解于100ml水中。

丙三醇碱性试液：向200g丙三醇中加水，使总重量达235g。再向其

中加入

140ml的1N氢氧化钠溶液和50ml水。］

色谱中的系统适用性〈621〉

高压液相色谱法

高压液相色谱法(HPLC),有时也称为高效液相色谱法，是基于固体

为固

定相，液体为流动相的分离技术。分离是通过分配、吸附或者离子交

换过程来完

成，取决于所用的固定相类型。分析有机物方面HPLC比气相有明显

优势。将待

分析的混合物溶解在适宜的溶剂中，且大多数分离在室温条件下即可

进行。因此，

大部分样品包括难挥发或者热不稳定性化合物可以被分离，而不需要

分解或衍生

成易挥发性物质。大部分药物分析是基于分配色谱，并且在30分钟

内完成色谱

分析。

同气相色谱一样，化合物洗脱时间可以用容量因子k描述(参见符号

术语

表)，它取决于被分析物的化学性质、流动相的组成和流速以及固定

相的组成和

表面积。柱长也是分离度的重要的决定性因素。只有具有不同容量因

子的混合物

才可以被HPLC分开。

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2016年4月1日仪器装置一一液相

色谱是由流动相贮液瓶、在高压下能够使流动相通过系统

的泵、将样品引入流动相的进样器、色谱柱、检测器和数据采集装置

（例如计算

机、积分仪或记录仪）组成的。短的、口径小且含有密度较高的固定

相填料的色

谱柱可以为化合物在流动相和固定相间快速交换提供条件。除接收和

报告检测器

输出结果之外，计算机被用来控制色谱仪设置和操作，如此可为长期

无人操作提

供必要条件。

泵系统一一HPLC泵系统定量地将流动相通过高压管路和装置从储液

瓶运

送到色谱柱。现代的系统包括一个或更多计算机控制的计量泵，可根

据编订好的

程序按梯度色谱的要求来变化流动相的组成，或混合无梯度的流动相

（即流动相

有固定的溶剂比值）。然而，在预混和的无梯度流动相中各种成分的

比例，与那

些用多个泵系统混合的相比，更能准确地控制。常见的情况为运行压

力高达

5000psi或更高，此时泵的转送速度可达10ml/min。用于定量分析的

泵应由惰性

的耐流动相腐蚀的材料组成，且在输送流动相过程中以不变的速率运

送流动相，

同时可以很小的波动运行很长一段时间。

进样器一一待测化合物在流动相或其他适当的溶液中溶解后，通过人

工操作

注射器或定量环，或者用自动进样系统注入流动相。后者是由一个转

盘或转送架

和一个进样装置组成，转盘或转送架上面可以盛放带有可刺破的膜或

塞子的样品

瓶，进样装置可以将样品从样品瓶中转移定量环中从而进入色谱系统。

有些自动

进样器可以通过程序设计来控制样品体积、进样次数和定量环清洗循

环、进样时

间间隔和其它操作变量。

当柱头压力小于70个大气压（约1000psi）时可以用注射器通过隔膜

手动

进样。在较高压力的情况下，必须有一个进样阀。一些阀系统将定量

环合并在一

起，将定量环内所装的供试品溶液在流动相中转移至色谱柱。在另一

些系统中，

供试品溶液通过注射器注入空腔中，再转动阀开关，使其进入流动相。

色谱柱一一对于大多数药物的分析，是通过将供试品溶液中的化合物

分配于

流动相和固定相之间来实现分离的。由非极性流动相和极性固定相组

成的系统称

为正相色谱，反之，由极性流动相和非极性固定相组成的系统称为反

相色谱。分

配色谱常被用于分子量小于1000的碳氢化合物的分析。化合物对固

定相的亲合

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2016年4月1日力，以及因此而得

到的在柱中的保留时间，可以通过调节流动相的极性高低来控

制。流动相的极性可以通过加入第二种和第三种有时甚至是第四种成

分而改变。

现在典型的反相液相色谱的固定相是由有机相化学键合到硅胶或其

他材料

上而成。粒径通常为3〜10um,但制备柱的大小可以达到5011m甚

至更高。带有

薄层有机相包裹的小颗粒可以提供低质量传递阻力，因此可以提供化

合物在固定

相和流动之间的快速传递。色谱柱的极性取决于键合官能团的极性,

它包括从相

对无极性的十八烷基硅烷到强极性的硝基。液体，未键合的固定相基

本上不得溶

于流动相。即使如此，常常需要用固定相来预饱和流动相以防止固定

相从色谱柱

中被剥离。包裹在支持物上的聚合物固定相具有更好的耐用性。

用于分析分离的色谱柱内径通常为2〜5mm；制备色谱采用大内径的

色谱

柱。对色谱柱升温可能会获得更有效的分离，但由于存在固定相降解

或流动相挥

发的可能性，故很少将其加热到60℃以上。除非在个论中另有规定,

色谱柱应

在室温下使用。

离子交换色谱用于分析分离分子量不超过1500的水溶性的、离子化

的化合

物。固定相通常是合成的有机树脂，阳离子交换树脂含有负电荷活性

位点，用于

分离碱性物质，例如胺；而阴离子交换树脂含有正电荷活性位点，用

于分离还有

负电荷基团的化合物，例如磷酸、磺酸或竣酸。水溶性离子或离子化

的化合物吸

附到树脂上，亲合能力的不同产生了色谱分离。流动相的pH、温度、

离子类型、

离子浓度和有机物修饰剂可以影响平衡，可以调节这些变量来获得所

需的分离

度。

在分子排阻色谱中，色谱柱中填充的是多孔固定相。按照化合物分子

量的大

小进行色谱分离。分子量大的分子不能进入孔内而不保留地排出色谱

柱。分子量

小的分子进入孔内随分子量降低而保留时间增加。这些色谱柱典型地

应用于测量

聚合物和大分子的降解（见分子排阻色谱一节）。

检测器一一许多药典中的HPLC方法需要使用分光光度度检测器。这

种检测

器由在色谱柱的末端安装的一个流通池构成。紫外光穿过流通池进入

检测器。当

化合物从色谱柱上洗脱时，通过流通池产生吸收，导致测量的能量水

平发生变化。

固定波长、可变波长和多波长的检测器被广泛应用。固定波长检测器

只能在

一个单波长下操作，典型的为254nm,由低压力汞灯发射光源。可变

波长检测器

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2016年4月1日含有一个连续的光

源，例如笊灯或高压管灯，用一个单色器或干涉滤光片在操作

者所选择的波长处产生单色光。装有单色器的可变波长检测器的波长

准确性需要

按照生产厂商的程序方法进行检查，如果检测的波长偏离校正值超过

3nm,就要

对仪器进行重新校正。现在的可变波长检测器在分析过程中可以程序

地变化波

长。多波长检测器可以同时在两个或更多波长下测量吸收情况。在二

极管阵列多

波长检测器中，连续发射的光透过样品池，然后分解成其组成的波长，

用二极管

阵列分别检测。这些检测器可以获得在整个紫外-可见范围的吸收数据,

因而可

以提供给分析人员在多个、选择性波长处的图谱以及各洗脱峰的图谱。

二极管阵

列检测器与固定波长检测器或可变波长检测器相比，有较低的信噪比,

因此不适

于分析低浓度的化合物。

示差折光检测器测量单独的流动相折光率与从色谱柱中流出的含有

待测物

质的流动相折光率之间的差异。示差折光检测器用于检测非紫外吸收

的化合物，

但其灵敏度比紫外检测器低。它们对溶剂组成、流速和温度的微小变

化非常敏感，

因此需要一个参比柱来获得满意的基线。

荧光检测器对那些本身具有荧光以及可以通过化合物的转化或与荧

光试剂

在特定的官能团下配对转变成荧光衍生物的化合物敏感。如果需要衍

生化，可以

色谱分离前衍生，试剂也可以在进入检测器前将其引入流动相中。

电位、伏特或极谱电化学检测器用于定量测定能在工作电极处被氧化

或被还

原的样品。这些检测器有选择性、灵敏可信，但要求流动中不能溶解

有氧气和还

原性金属离子。必须使用无脉冲型泵，并且要确保流动相的pH、离子

强度和温

度保持恒定。工作电极容易被伴随产生的具有可变响应值的还原产物

污染。

还有碳糊电极的电化学检测器可以方便地用于定量测定纳克级的易

氧化化

合物，特别是酚类和儿茶酚类。

新的检测器陆续被开发，以克服正在使用的检测器的缺点。

数据采集装置一一现在的数据工作站可以收集和贮存检测器输出的

结果，并

且可以输出峰高、峰面积、样品鉴定和方法变量的色谱图。它们（数据

采集装置）

也可以用于液相色谱编程，控制大多数变量，提供长时间的无人值守

操作。

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2016年4月1日数据也可以用简单

的手动测量记录仪或单独的积分仪来采集，它们可以完成

从输出峰面积到输出带有峰面积和峰高结果计算的色谱图，以及贮存

后来操作过

程中得到的数据。

操作步骤一一流动相组成可以很大地影响色谱性能和被分离的混合

化合物

的分离度。对于准确定量的测定，必须使用高纯度的试剂和“HPLC级”

有机溶

齐人所使用水的质量要求具有低电导和低紫外吸收。

特定类型检测器（例如电化学、质谱）所用的试剂，可能要求制定附

加的条

件，以避免潜在的干扰。对于容量因子k来说，组成比温度的影响更

大。

在分配色谱中，决定分离的分配系数可以通过在流动相中加入其它化

合物而

发生变化。在离子交换色谱中，流动相的pH值和离子强度以及组成

都会影响容

量因子。使用在色谱运行的过程中连续变化流动相溶剂的组成的技术

叫做梯度洗

脱或程序变溶剂洗脱。它有时用于容量因子差别很大的混合化合物的

色谱分离。

对于溶剂组成变化敏感的检测器，例如示差折光检测器，使用梯度洗

脱技术比较

困难。

检测器必须具有一个很宽的线性动态范围，被检测化合物必须与其它

干扰物

分离。化合物的线性动态范围是指检测器信号响应值与化合物的量成

正比的范

围。对于定量检测的最大适应性，此范围应该有大约三个数量级。HPLC

系统可

以通过使用已知浓度的对照品与峰响应值作图，按外标法或内标法进

行校正。

如果使用自动进样器，可以用外标法获得可信的定量结果。这种方法

可以通

过直接比较供试品和对照品溶液峰响应值而直接获得。如果必须使用

注射器进

样，由于在高压下的不重现性，需用已知量的不具干扰性的化合物做

内部校正来

获得比较好的定量结果，将内标物加入到供试品溶液和对照品溶液中,

将药物峰

面积响应值与内标物峰面积响应值的比值进行比较。

由于仪器设备、进样和技术的正常变化，需要进行系统适用性试验以

确保给

定的操作系统是可用的。系统适用性试验的主要特征在下文中阐述。

对结果解释，见色谱图解释一节。

系统适用性

系统适用性是构成气相和液相色谱方法所必须的部分。它们常用作证

明色谱

体系的分辨率和重现性适合所进行的分析。试验依据于仪器、电子设

备、分析操

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2016年4月1日作和待分析的样品，

组成一个完整的体系。

分辨率，R,（注一一参见符号术语表）具有代表柱子效率N的功能，

用于说

明待洗脱化合物能否彼此分别开来，建立系统的完全分辩能力，保证

内标物能从

药物中分离出来。柱效率也可以说明系统适用性，尤其色谱图中仅有

一个峰时；

然而，与直接测量相比，可靠性低。柱子效率是峰清晰度的一个量度，

对于检验

痕量化合物比较重要。

在操作中，标准溶液的重复进样要满足精密度的要求。除非个别专论

的特殊

要求外，如果相对标准偏差要求2.0%或更少，则用五次重复进样的

数据计算相

对标准偏差；如果相对标准偏差要求大于2.0%,则用六次重复进样

的数据计算

相对标准偏差。

拖尾因子T是一个峰对称性的量度，随着尾部拖的越长，T值越大。

在一些情

况下，其值要小于所观察的。随着峰不对称性的增加，积分和精密度

变得越来越

不准确。

Fig.2.Asymmetricalchromatographicpeak.

图2不对称的色谱峰

在专论中，通过标准溶液或其他溶液的重复进样所得的数据用于计算

这些数