具有肌醇六磷酸酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸的制作方法

具有肌醇六磷酸酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸的制作方法专利名称：：具有肌醇六磷酸酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸的制作方法技术领域：：本发明涉及具有^L醇六磷酸酶活性的分离的多肽和编码所述多肽的分离的多核苷酸。本发明还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及用于产生和使用所述多肽的方法。相关领域的描述WO2006/043178公开了一种来自布丘氏菌属Pl-29(ButtiauxellaP1-29)(作为NCIMB41248保藏)的具有WO2006/043178中SEQIDNO:3的氨基酸序列的肌醇六磷酸酶，以及它的某些变体。布丘氏菌属野生型肌醇六磷酸酶的序列及其多种变体已经提交至GENESEQP数据库，具有以下登录号AEH25051、AEH25056、AEH25057、AEH25058、AEH25059、AEH25060、AEH25061、AEH25062、AEH25063、AEH25064、AEH25065、AEH25066、AEH25067、AEH25068、AEH25069、AEH25070、AEH25071、AEH25072、AEH25073、AEH25074、AEH25075和AEH25076。这些肌醇六磷酸酶均与SEQIDN0s:2、4和6中的任何一个具有70。/。以上(above70%)的同一性百分比，然而它们不包含119N、120L和/或121E中的至少一种，如上文所限定。来自变形肥杆菌(Obesumbacteriumproteus)的肌醇六磷酸酶的序列已经提交至UNIPROT数据库，登录号为Q6U677。这种也由Zinin等在FEMSMicrobiologyLetters,236巻，283-290页，2004中进行了描述的肌醇六磷酸酶，与SEQIDNOs:2、4和6具有70%以上的同一性百分比，然而这种肌醇六磷酸酶也不包含119N、120L和/或121E中的至少一种，如上文所限定。本发明的目的是提供具有肌醇六磷酸酶的改进的多肽，和编码所述多肽的多核苷酸。本发明的肌醇六磷酸酶具有改进的比活性(specificactivity),改进的稳定性，如改进的温度和/或pH稳定性，改进的pH活性谱(profile)，改进的温度活性谱，改进的底物谱，改进的在体外在动物饲料中的性能，和/或改进的在体内在动物饲料中的性能。发明内容在第一方面，本发明涉及具有肌醇六磷酸酶活性并且具有如下氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列a)当使用Needle程序，用BLOSUM62取代矩阵，10.0的缺口产生罚分(gapopeningpenalty)和0.5的缺口延伸罚分(gapextensionpenalty)与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和/或SEQIDNO:6的氨基酸1-413比对时，与上述各氨基酸序列具有至少70%同一性；并且b)当如a)中所述与SEQIDNO:2的氨基酸1-413比对并且使用与SEQIDNO:2的氨基酸1-413对应的氨基酸残基编号时，在所示的位置包含以下氨基酸中的至少一种119N、120L和/或121E。在一个具体的实施方案中，所述多肽在所示的位置包含以下氨基酸中的至少一种109Q、111G、119N、120L和/或121E。在另一具体的实施方案中，所述多肽a)与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和/或SEQIDNO:6的氨基酸1-413具有至少78%同一性，例如，至少80%同一性，至少85%同一性，至少90%同一性，至少95%同一性，至少96%同一性，至少97°/。同一性，至少980/o同一性，至少99%同一性；并且b)在所示的位置包含以下氨基酸中的至少一种109Q、111G、119N、120L、121E和/或193Q。在另一方面，本发明涉及具有肌醇六磷酸酶活性并且具有如下氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列a)与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和/或SEQIDNO:6的氨基酸1-413具有至少78%同一性，如，%同一性，至少90%同一性，至少95%同一性，至少96%同一性，至少97%同一性，至少98%同一性，至少99%同一性；并且b)在指定的位置包含以下氨基酸中的至少一种1S、101、38S、66E、71K、81A、109Q、111G、119N、120L、121E、141R、142L、152M、155E、193Q、214V、239K、245D、248E、255A，T、268A,T、277T、283D，E、285K、287D、288A，V、293G、296S、303L、314A、3371、345A、3501、364A、371K、372E、396P、399K、406E和/或413P。在另一方面，本发明涉及具有肌醇六磷酸酶活性的多肽，其选自下组(i)包含SEQIDNO:2的成熟部分(例如SEQIDNO:2的氨基酸1-413的序列)的多肽；(ii)(i)的变体，其包含以下取代中的至少一种K26E、N37Y、A89T、D92E、T134I,V、H160R、S164F、T17U、T176K、A178P、S188N、D190E、A192G、K207E,T、A209S、D211C、A235V、E248L、Q256H，Y、A261E、N270K、D283N、A288E、I303F和/或N318D;和(iii)(i)或(ii)的变体，其包含以下取代中的至少一种N1S、V9I、T38S、E66Q、Q71K、T81A、R141Q、L142V、T152M、E155D、V214I、K239N、D245E、E248S、A255T、R268A,T、A277T、D283E、N285K、T287D、A288V、D293G、P296S、1303L、S314A、1337V、A345S、V350I、A364S、K371N、E372Q、P396S、K399T、E406V和/或Q413P。在另一方面，本发明涉及具有肌醇六磷酸酶活性的多肽，其选自下组(i)包含SEQIDNO:4的成熟部分(例如SEQIDNO:4的氨基酸1-413的序列)的多肽；(ii)(i)的变体，其包含以下取代中的至少一种K26E、N37Y、A89T、D92E、T134I,V、H160R、S164F、T17U、T176K、A178P、S188N、D190E、A192G、K207E,T、A209S、D211C、A235V、S248L、Q256H，Y、A261E、N270K、E283N、V288E、I303F和/或N318D;和(iii)(i)或(ii)的变体，其包含以下耳又代中的至少一种S1N、19V、S38T、Q66E、K71Q、T81A、Q141R、V142L、M152T、E155D、1214V、N239K、E245D、S248E、T255A、A268R,T、T277A、E283D、K285N、D287T、V288A、D293G、S296P、簡L、A314S、V337LS345A、1350V、A364S、N371K、E372Q、S396P、T399K、V楊E和/或P413Q。本发明的另一方面涉及具有肌醇六磷酸酶活性的多肽，其选自下组(i)包含SEQIDNO:6的成熟部分(例如SEQIDNO:6的氨基酸1-413的序列)的多肽；(ii)(i)的变体，其包含以下取代中的至少一种K26E、N37Y、A89T、D92E、T134I,V、H160R、S164F、T17U、T176K、A178P、Sl薩、D190E、A192G、K207E，T、A209S、D211C、A235V、S248L、Q256H,Y、A261E、N270K、E283N、V288E、L303F和/或N318D;和(iii)(i)或(ii)的变体，其包含以下取代中的至少一种N1S、V9I、T38S、E66Q、Q71K、A81T、Q141R、V142L、T152M、D155E、1214V、N239K、E245D、S248E、A255T、T268A，R、T277A、E283D、K285N、D287T、V288A、G293D、P296S、L303I、A314S、V337I、S345A、V350I、S364A、N371K、Q372E、S396P、T399K、V406E和/或Q413P。本发明的另一方面涉及具有如下氨基酸序列的肌醇六磷酸酶，所述氨基酸序列与SEQIDN0:2的氨基酸1-413、SEQIDN0:4的氨基酸1-413或SEQIDNO:6的氨基酸1-413具有至少80%同一性，例如，至少85%同一性，至少卯％同一性，至少95%同一性，至少96%同一性，至少97%同一性，至少98%同一性，至少99%同一性。在另一方面，本发明涉及具有如下氨基酸序列的肌醇六磷酸酶变体，所述氨基酸序列与包含以下GENESEQP序列中任意一个的成熟部分(例如氨基酸34-446的序列)的多肽具有至少70%同一性，至少75%同一性，至少80%同一性，如，至少85%同一性，至少90%同一性，至少95%同一性，至少96%同一性，至少97%同一性，至少98%同一性，至少99%同一性AEH25057、AEH25059、AEH25058、AEH25067、AEH25071、AEH25072、AEH25074、AEH25076、AEH25073、AEH25070、AEH25069、AEH25066、AEH25060、AEH25068、AEH25063、AEH25065、AEH25062、AEH25061、AEH25056、AEH25051或AEH25064;所述变体具有肌醇六磷酸酶活性，并且包含以下取代中的至少一个N1S、VIOI、T38S、Q66E、Q71K、T81A、E109Q、H111G、D119N、1120L、K121E、Q141R、V142L、T152M、D155E、L193Q、1214V、N239K、E245D、S248E、V255A,T、R268A,T、A277T、N283D,E、N285K、T287D、E288A,V、D293G、P296S、簡L、A314S、V337I、S345A、V350I、S364A、N371K、Q372E、S396P、T399K、V406E和/或Q413P。在一个具体的实施方案中，本发明涉及多肽的变体，其包含GENESEQP:AEH25075的成熟部分(例如氨基酸34-446的序列)，所述变体具有肌醇六磷酸酶活性，并且包含以下取代中的至少一种N1S、VIOI、T38S、Q66E、Q71K、T81A、E109Q、H111G、D119N、1120L、K121E、Q141R、V142L、T152M、D155E、L193Q、1214V、N239K、E245D、S248E、V255A，T、R268A，T、A277T、N283D,E、N285K、T287D、E288A，V、D293G、P296S、F303L、A314S、V337I、S345A、V350I、S364A、N371K、Q372E、S396P、T399K、V406E和/或Q413P。在这些方面的每一个中，对于计算同一性和确定氨基酸残基位置，都如上文第一方面中所述生成比对。本发明还涉及编码这些多肽的多核苷酸，以及包含所述多核苷酸的核酸构建体、重组表达载体和重组宿主细胞，还涉及用于产生和使用这些多肽的方法。本发明的另一方面涉及包含本发明的肌醇六磷酸酶的动物伺料组合物。本发明还提供使用本发明的肌醇六磷酸酶改进动物饲料的营养价值的方法。本发明的另一方面涉及使用本发明的肌醇六磷酸酶处理蛋白质的方法，所述蛋白质包括植物蛋白。本发明的另一方面涉及产生发酵产物的方法，所述发酵产物诸如，例如，乙醇、啤酒、葡萄酒(wine)，其中所述发酵在本发明的MJ享六磷酸酶存在下进行。附图筒述图1显示对本发明的SEQIDNO:2、SEQIDNO:4和SEQIDNO:6预期的成熟部分连同具有以下GENESEQP登录号的序列的多重比对AEH25051、AEH25056、AEH25057、AEH25058、AEH25059、AEH25060、AEH25061、AEH25062、AEH25063、AEH25064、AEH25065、AEH25066、AEH25067、AEH25068、AEH25069、AEH25070、AEH25071、AEH25072、AEH25073、AEH25074、AEH25075和AEH25076。比只十是4吏用Clustal方法(Higgins,1989,CABIOS5:151-153),使用LASERGENEMEGALIGNtm軟件(DNASTAR,Inc.,Madison,WI),用同一性表和以下多重比对参数进行的缺口罚分为10,并且缺口长度罚分(gaplengthpenalty)为10。配对比对参数是K元组(Ktuple)=1,缺口罚分=3,窗口(windows)=5,和对角线(diagonals)二5。图2显示UNIPROT登录号Q6U677与SEQIDNO:2的氨基酸1-413的比对。比对是使用Needle程序，使用矩阵BLOSUM62、IO.O的缺口产生罚13分和0.5的缺口延伸罚分进行的。发明详述结构因素(StructuralConsiderations)使用大肠杆菌(E.coli)AppA肌醇六磷酸酶的结构作为模板，通过同源性建才莫建立了本发明的三个肌醇六磷酸酶(SEQIDNOs:2、4和6的成熟部分)的结构(ProteinDataBankid:1DKN;Lim等，Nat.Struct.Biol.(2000)，2巻，108-113页)。位置119-121面对活性部位裂缝(activesitecleft),因此预期在这些位置的特定氨基酸对比活性有影响。对于增加比活性，据估计119N是较好的选择，其次是121E，最后是120L。位置109和111靠近受到少量应力(abitstressed)的区域中的二硫键(disulfide),因此预期在这些位置的特定氨基S吏对稳定性(特别是对热稳定性)有影响。lllG可能优于109Q。位置193是另一个可能影响酶稳定性的区域。193Q可以提供良好的稳定性。相应的肌醇六磷酸酶变体，和其它肌醇六磷酸酶变体(例如，包含一个或多个氨基酸的保守取代、缺失和/或插入的变体)，可以通过本领域已知的方法制备，并且如实验部分中所述进^"测试。肌醇六磷酸酶多肽，同一性的百分比在本文中，肌醇六磷酸酶是具有肌醇六磷酸酶活性的多肽，即催化肌醇六磷酸盐(phytate)水解成(l)肌醇和/或(2)它的单、二、三、四和/或五磷酸盐和(3)无机磷酸盐的酶。在本文中，术语肌醇六磷酸酶底物包括，但不限于，肌醇六;奔酸和任何肌醇六磷酸盐(肌醇六磷酸的盐)，以及上文(2)中所列的磷酸盐。因特网上的ENZYME站点(www.expasy.ch/enzyme/)是与酶的命名法相关的信息的储藏库。其主要基于国际生物化学与分子生物学联合会命名委员会(NomenclatureCommitteeoftheInternationalUnionofBiochemistryandMolecularBiology)(IUB-MB)的建议，并描述了各种类型的表征的酶，并为这些酶提供了EC(EnzymeCommission(酶学委员会))号(BairochA.TheENZYMEdatabase,2000,NucleicAcidsRes28:304-305)。同样参见NC-IUBMB,1992的酶命名手册(handbookEnzymeNomenclature)。根据ENZYME网站，已知三种不同类型的肌醇六磷酸酶所谓的3-肌醇六磷酸酶(或称l-肌醇六磷酸酶；力几醇六磷酸酯3-磷酸水解酶(myo-inositolhexaphosphate3-phosphohydrolase))，所谓的4_肌醇六磷酸酶(或称6-月几醇六磷酸酶，基于1L编号系统而非1D编号命名，EC3丄3.26)，和所谓的5-肌醇六磷酸酶(EC3丄3.72)。就本发明而言，全部三种类型均包括在肌醇六磷酸酶的定义中。在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶属于酸性组氨酸磷酸酶家族，该家族包括大肠杆菌(Escherichiacoli)pH2.5酸性磷酸酶(基因appA)以及真菌肌醇六磷酸酶例如泡盛曲霉(Aspergillusawamorii)肌醇六磷酸酶A和B(EC:)(基因phyA和phyB)。多种组氨酸酸性磷酸酶共享两个具有序列相似性的区域，每个均以保守的组氨酸残基为中心围绕在其周围。这两个组氨酸似乎涉及酶的催化机制。第一组氨酸位于N-末端部分，并且形成磷-组氨酸中间物，而第二个位于C末端部分，并且可能充当质子供体。在另一个具体实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶具有保守的活性部位基序，即R-H-G-V-R-A-P(参见SEQIDNOs:2、4和6的氨基酸18-24)。就本发明而言，肌醇六磷酸酶活性是以FYT单位测定的，一个FYT是在以下条件下每分钟释放1微摩尔无机正磷酸根的酶量pH5.5;温度37。C;底物浓度为10.8mmol/l的肌醇六磷酸钠(C6H6024P6Na,2)。肌醇六磷酸酶活性优选使用本文实施例3中的测定法来测定。其它合适的肌醇六磷酸酶测定法是WO00/20569的实施例1中描述的FYT和FTU测定法。FTU用于测定饲料和预混物(pi'emix)中的肌醇六磷酸酶活性。在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶是分离的。术语"分离的"如用于本文是指这样的多肽，如通过SDS测定，所述多肽是至少20%纯的，优选至少40%纯的，更优选至少60%纯的，甚至更优选至少80%纯的，最优选至少90%纯的，并且甚至最优选至少95%纯的，例如，至少96%、97%、98%、99%和更高的纯度。具体而言，优选多肽是"基本上纯的形式(essentiallypureform)",即，所述多肽制备物基本上不含(essentiallyfreeof)其它与该多肽制备物天然结合的(nativelyassociated)多肽物质。例如，这可以通过以公知的重组方法和/或通过经典纯化方法制备多肽来实现。当在本文使用时，术语"成熟部分"是指由细胞分泌的多肽的部分，所述细胞含有编码该多肽的多核苷酸作为其遗传部件(geneticequipment)的部分。通常，成熟多肽部分是指一旦N末端信号肽部分完成了其指导编码多肽进入细胞分泌途径的功能而被切除之后剩余的多肽部分。然而，经验显示在分泌过程中有时也发生少量的C末端截短。术语成熟部分如用于本文也将这样的C末端截短考虑在内(如果它存在的话)。SEQIDNOs:2、4和6的预期信号肽部分是SEQIDNO:2的氨基酸-33至-1、SEQIDNO:4的氨基酸-9至-1(这是部分信号肽)和SEQIDNO:6的氨基酸-33至-1(参见本申请包括的序列表)。由SEQIDNO:7编码的SEQIDNO:8也是信号肽。由于我们目前不清楚任何在分泌过程中发生的C末端截短，所以预期的SEQIDNO，:2、4和6的成熟部分是它们的氨基酸1-413。在本发明的不同方面中，两个氨基酸序列之间的相关性用参数"同一性"来描述。就本发明而言，两个氨基酸序列的比对是通过使用来自EMBOSS软件包(http:〃)的Needle程序确定的，优选版本2.8.0。Needle程序执行在Needl謹n,S.B.和Wunsch，C.D.(1970)J.Mol.Biol.48，443-453中描述的全局比对算法(globalalignmentalgorithm)。所用的取代矩阵是BLOSUM62,缺口产生罚分(gapopeningpenalty)是10.0,并且缺口延伸罚分(gapextensionpenalty)是0.5。本发明的氨基酸序列("发明序列")和权利要求中涉及的氨基S臾序列(例如SEQIDNO:2的氨基酸l-413)之间的同一性程度，是通过两个序列比对中精确匹配的数目，除以"发明序列"的长度或SEQIDNO:2的氨基酸1-413的长度中最短的一个来计算。结果以百分比同一性表示。当"发明序列"和SEQIDNO:2在重叠的相同位置具有相同的氨基酸残基时发生精确匹配(在下文的比对实例中用T代表这种情况)。序列的长度是序列中的氨基酸残基数(例如SEQIDNO:2的氨基酸1-413的长度是413)。在以下的纯假设性比对实例中，重叠是序列1的氨基酸序列"HTWGER-NL"或序列2的氨基酸序歹寸"HGWGEDANL"。在该实例中，缺口用"-"表示。假设性比对实例序列1:ACMSHTWGER-NLImil序列2:HGWGEDANLAMNPS16在一个具体的实施方案中，多肽的氨基酸序列与或相对于例如SEQIDNO:2的氨基酸1-413的同一性百分比是通过如下来确定的i)使用Needle程序，用BLOSUM62取代矩阵、10.0的缺口产生罚分和0.5的缺口延伸罚分来比对所述两个氨基酸序列；ii)计数比对中精确匹配数；iii)用精确匹配数除以两个氨基酸序列中最短的序列的长度，iv)将iii)除得的结果转换成百分比。在上文的假设性实例中，精确匹配数是6，两个氨基S拼列中最短的序列的长度是12;因此同一性百分比是50%。另一比对实例示于图2，其中将来自变性月巴杆菌(Obesumbacteriumproteus)的肌醇六磷酸酶(UNIPROT:Q6U677)与SEQIDNO:2的氨基酸1.413比对。由这个比对显示，UNIPROT:Q6U677与SEQIDNO:2的氨基酸1-413的同一性百分比是76.3%(315个精确匹配，最短序列的长度是413)。在本发明的肌醇六磷酸酶的具体实施方案中(即根据本发明的不同方面中的任何一个)，与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个的同一性程度是至少71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或至少99%。在更进一步的具体实施方案中，同一性程度是至少90.0%、90.2%、90.4%、90.6%、90.8%、91.0%、91.2%、91.4%、91.6%、91.8%、92.0%、92.2%、92.4%、92.6%、92.8%、93.0%、93.2%、93.4%、93.6%、93.8%、94.0%、94.2%、94.4%、94.6%、94.8%、95.0%、95.2%、95.4%、95.6%、95.8%、96.0%、96.2%、96.4%、96.6%、96.8%、97.0%、97.2%、97.4%、97.6%、97.80/o、98.0o/o、98.20/0、98.40/0、98.60/0、98.80/0、99.00/0、99.20/o、99.40/0、99.60/0或至少99.8%。在更进一步的具体实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶具有(或具有氨基酸序列，其差异为)如与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQlDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9处或不多于10处的变化；如与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于ll、12、13、14、15、16、17、18、19处或不多于20处的变化；如与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于21、22、23、24、25、26、27、28、29处或不多于30处的变化；如与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于31、32、33、34、35、36、37、38、39处或不多于40处的变化；如与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于41、42、43、44、45、46、47、48、49处或不多于50处的变化；如与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于51、52、53、54、55、56、57、58、59处或不多于60处的变化；如与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸卜413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于61、62、63、64、65、66、67、68、69处或不多于70处的变化；如与SEQIDNO:2的氨基S吏1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于71、72、73、74、75、76、77、78、79处或不多于80处的变化；如与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于81、82、83、84、85、86、87、88、89处或不多于90处的变化；如与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于91、92、93、94、95、96、97、98、99处或不多于100处的变化；如与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于IOI、102、103、104、105、106、107、108、109处或不多于110处的变化；如与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于111、112、113、114、115、116、117、118、119处或不多于120处的变化;或与SEQIDNO:2的氨基酸1_413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个相比不多于121、122、123或124处的变化。在本发明肌醇六磷酸酶的可供选择的实施方案中，相对于SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413中任意一个的同一性程度是至少55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%或至少69%。位置编号本文使用的(即根据本发明不同方面中任何一个方面的)用于限定氨基酸位置的命名法基于源自伽瓦尼布丘氏菌(Buttiauxdlagaviniae)DSM18930的肌醇六磷酸酶的氨基酸序列，即其预期的成熟序列，其为SEQIDNO:2的氨基酸1-413。因此，在本上下文中，用于位置编号的基础是SEQIDNO:2，始于N1并且止于Q413。这种位置编号在图1的比对中显示为第一行，并且在图2的比对中也显示了这种编号方式(比对的上排)。变化，如取代、缺失、插入本发明(即，根据本发明的不同方面中的任何一个方面)的肌醇六磷酸酶，其是野生型或变体，可以相对于模板(即参照或比较性氨基酸序列例如SEQIDNO:2的氨基酸l-413)包含多种类型的变化可以将一个氨基酸用另一个氨基酸取代；可以缺失氨基酸；可以插入氨基酸；以及任何数目的这些变化的任意组合。在本上下文中，术语"插入"意欲还包括N末端和/或C末端延伸，并且术语"缺失"意欲还包括N末端和/或C末端截短。本文用于单变化的通用命名法如下XDcY，其中"X"和"Y"独立地表示单字母氨基酸代码，或"*","D"表示一个数字，且"c"表示按字母顺序计数(a、b、c等等)，其仅在插入中出现。参考下文表l,其中描述了将这种命名法应用于多种类型的变化的纯假设性实例。tableseeoriginaldocumentpage19tableseeoriginaldocumentpage20如上文所解释的，位置号("D")从SEQIDNO:2的氨基酸1-413的第一氨基酸残基起计算。在相同序列中的几个变化用7"(斜线)分隔，例如标识"l*/2*/3*，，表示在位置号l、2f^3的氨基酸全部缺失，标识"104A/105F"表示位置号104的氨基S交被A取代，并且位置号105的氨基酸被F取代。可选择的变化用(逗号)分隔，例如，标识"255A,T"表示位置255上的氨基酸被AiT取代。本文在各种其他不胜枚举的可能性中所用的逗号表示它们通常在语法上的作用，即通常是和/或。例如，列举"255A,T，楊E，和/或413P，，中第一个逗号表示二中选一(AiT),而后面的两个逗号应理解为和/或的选择:255A或255T，和/或406E,和/或413P。在本文中，"至少一个"(例如在指定位置的氨基酸，或取代)表示一个或多个，例如1,2，3,4,5,6,7，8,9或10个氨基酸(或取代)；或12,14，15，16,18，20,22，24,25，28或30个氨基酸(或取代)；等等，直至最多的变化数目为125，130,140，150，160,170，180，190或200个。对用什么取代或延伸没有进行任何指定的取代或延伸是指除了在模板中占据该位置的氨基酸以外，插入任何天然的，或非天然的氨基酸。鉴定相应的位置号如上文所解释，本文使用伽瓦尼布丘氏菌DSM18930的成熟肌醇六磷酸酶(SEQIDNO:2)作为位置编号的标准，因此也是命名法的标准。对于另外的肌醇六磷酸酶，其是野生型或变体，对应于SEQIDNO:2中位置D的位置通过如标题为"肌醇六磷酸酶多肽，同一性百分比，，一节中所详细说明的比对两个序列来查找到。从比对中，本发明序列中与SEQIDN0:2的位置D相对应的位置可以清晰地和明白地鉴定出来(在比对中互在对方顶部的那两个4立置(thetwopositionsontopofeachotherinthealignment))。现有一些从上文表1得到的纯假设性实例，其在第三栏中包括多个对两个序列的比对参照表l第一行第三格上排序列是模板，下排是变体。位置号80是指模板中的氨基酸残基G。氨基酸A占据变体中相应的位置。因此，将这种取代命名为G80A。再参照表1第二行第三格上排序列还是模板且下排是变体。位置号80还是指模板中的氨基酸残基G。变体具有两个插入，即TY，在模板的G80之后V81之前。尽管T和Y在变体氨基酸序列中当然也将具有它们自己"真正的"位置号，但是就此处而言，我们总是指模板位置号，而因此T和Y分别称作位置号80a和80b。最后，参照表l最后一行的第三格位置号275是指模板中最后的氨基酸。将C末端延伸ST分别称作位置号275a和275b,尽管它们在变体氨基酸序列中当然也拥有它们自己"真实的"位置号。这样的比对的真实例子在图2中显示，其中将来自变形肥杆菌的肌醇六磷酸酶(UNIPROT:Q6U677)与SEQIDNO:2的氨基酸1-413比对。A人这个比对可以推出，SEQIDNO:2的氨基酸119N、120L和121E分别对应于UNIPROT:Q6U677的119D、120I和120K,等等。不同的实施方案根据本发明的第二方面的多肽具有如下氨基酸序列，所述氨基酸序列a)与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和/或SEQIDNO:6的氨基酸1-413具有至少78%同一性；并且b)在指定位置包含以下氨基酸中的至少一种1S、101、38S、66E、71K、81A、109Q、lllG、119N、120L、121E、141R、142L、152M、155E、193Q、214V、239K、245D、248E、255A，T、268A，T、277T、283D，E、285K、287D、288A，V、293G、296S、303L、314A、3371、345A、3501、364A、371K、372E、396P、399K、406E和/或413P。在上述b)中指定位置的每种氨基酸不同于布丘氏菌属NCIMB41248野21生型肌醇六磷酸酶及其具有以下GENESEQP登录号的变体AEH25051、AEH25056、AEH25057、AEH25058、AEH25059、AEH25060、AEH25061、AEH25062、AEH25063、AEH25064、AEH25065、AEH25066、AEH25067、AEH25068、AEH25069、AEH25070、AEH25071、AEH25072、AEH25073、AEH25074、AEH25075和AEH25076。在其具体的实施方案中，所述氨基酸序列包含a)1S、101、38S、71K、109Q、111G、119N、120L、121E、152M、155E、193Q、255T、268A、277T、283E、285K、287D、288V、296S、364A、3501、372E和/或413P(i。通过SEQIDN0:4表示)中的至少一种;b)66E、81A、109Q、111G、119N、120L、121E、193Q、255A、268T、277T、283E、285K、287D、288V、293G和/或303L(如通过SEQIDNO:6表示)中的至少一种；和c)66E、109Q、111G、119N、120L、121E、141R、142L、155E、193Q、214V、239K、245D、248E、255A、283D、288A、314S、3371、345A、364A、371K、372E、396P、399K和/或406E(如通过SEQIDNO:2表示)中的至少一种。在另一具体的实施方案中，本发明的多肽在WO2006/043178中7>开的布丘氏菌属野生型和突变体肌醇六磷酸酶的启示下进行了变化，即所述多肽具有如下氨基酸序列，所述氨基酸序列在指定位置包含以下氨基酸中的至少一种26E、37Y、89T、92E、1341,V、160R、164F、1711、176K、178P、188N、190E、192G、207E，T、209S、211C、235V、248L、256H，Y、261E、270K、303F和/或318D。K26E、N37Y、A89T、D92E、T134I,V、H160R、S164F、T17U、T176K、A178P、S188N、D190E、A192G、K207E，T、A209S、D211C、A235V、E248L、Q256H,Y、A261E、N270K、D283N、A288E、I303F和/或N318D。对SEQIDN0:2的成熟部分中的其它优选取代是由SEQIDN0:4和6启示的N1S、V9I、T38S、E66Q、Q71K、T81A、R141Q、L142V、T152M、E155D、V2MI、K239N、D245E、E248S、A255T、R268A，T、A277T、D283E、N285K、T287D、A288V、D293G、P296S、1303L、S314A、B37V、A345S、V350I、A364S、K371N、E372Q、P396S、K399T、E406V和/或Q413P。作为另一个实例，将SEQIDN0:4的成熟部分突变以包含以下耳又^4中的至少一种K26E、N37Y、A89T、D92E、T134I,V、H160R、S164F、T17U、T176K、A178P、S188N、D190E、A192G、K207E，T、A209S、D211C、A235V、S248L、Q256H,Y、A261E、N270K、E283N、V288E、I303F和/或N318D。SEQIDN0:2的成熟部分中的其它优选取代是由SEQIDNO:2和6启发的S1N、19V、S38T、Q66E、K71Q、T81A、Q141R、V142L、M152T、E155D、1214V、N239K、E245D、S248E、T255A、A268R,T、T277A、E283D、K285N、D287T、V288A、D293G、S296P、1303L、A314S、V337I、S345A、1350V、A364S、N371K、E372Q、S396P、T399K、V406E和/或P413Q。在更进一步的实例中，将SEQIDNO:6的成熟部分突变以包含以下取代中的至少一种K26E、N37Y、A89T、D92E、T134I,V、H160R、S164F、T17U、T176K、A178P、S188N、D190E、A192G、K207E，T、A209S、D211C、A235V、S248L、Q256H,Y、A261E、N270K、E283N、V288E、L303F和/或N318D。SEQIDNO:2的成熟部分中的其它优选取代是由SEQIDNO:2和4启发的N1S、V9I、T38S、E66Q、Q71K、A81T、Q141R、V142L、T152M、D155E、1214V、N239K、E245D、S248E、A255T、T268A,R、T277A、E283D、K285N、D287T、V288A、G293D、P296S、L303I、A314S、V337I、S345A、V350I、S364A、N371K、Q372E、S396P、T399K、V406E和/或Q413P。如上文所解释的，本发明不同的方面涉及"具有"如下氨基S银列的多肽，所述氨基酸序列与SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和/或SEQIDNO:6的氨基酸1-413具有详明的同一性程度，所述多肽具有肌醇六磷酸酶活性(下文的"同源多肽")；或者涉及"具有"如下氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列以最大数目的氨基酸区别于SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413和SEQIDNO:6的氨基酸1-413。本发明的多肽优选包含SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413或SEQIDNO:6的氨基酸1-413中的任何一个；或它们的等位变体(allelicvariant);或其具有肌醇六磷酸酶活性的片段。在另一个优选的实施方案中，本发明的多肽由SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413或SEQIDNO:6的氨基酸1-413中的氨基酸序列；或它们的等位变体(allelicvariant);或其具有肌醇六磷酸酶活性的片段组成。SEQIDNO:l、3和5的核苦酸序列中的任何一个，或其亚序列，以及SEQIDNO:2、4和6的氨基酸序列，或其片段，可以用于设计核酸探针以23根据本领域公知的方法从不同属或种的菌4朱鉴定和克隆编码具有肌醇六磷酸酶活性的多肽的DNA。具体而言，这样的探针可以用于根据标准Southern印迹流程与感兴趣的属或种的基因组或cDNA杂交，从而从中鉴定并分离相应的基因。DNA和RNA探针均可使用。通常对探针进行标记用于4全测相应的基因(例如，用"P、3H、35S、生物素或抗生物素蛋白进行标记)。因此，可以从制备自这类其它生物的基因组DNA文库筛选与上述探针杂交并且编码具有肌醇六磷酸酶活性的多肽的DNA。来自这类其它的生物的基因组DNA或其它DNA可以通过琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳，或其它分离技术分开。可以将来自文库的DNA或分离的DNA转移至并固定在硝酸纤维素或其它合适的载体材料上。为了鉴定与SEQIDNO:l、3或5或其亚序列同源的克隆或DNA，在Southern印迹中4吏用载体材料。在优选的实施方案中，核酸探针包含SEQIDNO:l的核苦酸454-462、SEQIDNO:3的核苦酸384-392或SEQIDNO:5的核苷酸454-462(全部对应于基序119N、120L和121E)。在另一优选的方面，核酸探针是编码SEQIDNO:2、4或6中任何一个的多肽或其亚序列的多核苷酸序列。在另一优选的方面，核酸探针是SEQIDNO:l、3或5。本发明还涉及变体，所述变体在SEQIDNO:2的氨基酸1-413、SEQIDNO:4的氨基酸1-413或SEQIDNO:6的氨基酸1-413,或其成熟多肽中包含一个或多个氨基酸的保守取代、缺失和/或插入。优选地，氨基酸改变对性质是不重要的(ofaminornature),即不显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；小缺失，通常为1至大约30个氨基酸；小的氨基或，复基末端延伸，例如氨基末端曱硫氨酸残基；多至约20-25个残基的小接头肽；或通过改变净电荷或其它功能来促进纯化的小延伸，如多组氨酸区(tract)、抗原表位或结合域。如上所述，片段是包含缺失的变体的优选实例，并且片段优选保持肌醇六磷酸酶活性。保守取代的实例是在以下组内碱性氨基酸组(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸组(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸组(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸组(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸组(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)和小氨基酸组(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)。通常不改变比活性(specificacitivity)的氨基酸取代是本领域已知的，并且由例如H.Neurath和R丄.Hill,1979,于TheProteins,AcademicPress,NewYork中描述。最常发生的交换是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。除了20种标准氨基酸，也可以使用非标准氨基酸(如4-羟脯氨酸、6-N-曱基赖氨酸、2-氨基异丁酸、异缬氨酸和a-曱基丝氨酸)取代野生型多肽的氨基酸残基。可以用有限数目的非保守氨基酸、不由遗传密码编码的氨基酸和非天然氨基酸取代氨基酸残基。"非天然氨基酸"在蛋白质合成之后经过修饰，和/或在它们的侧链中具有不同于标准氨基酸的化学结构。非天然氨基酸可以通过化学方法合成，并且优选地，是商业上可以获得的，并且包括六氢吡啶羧酸、噻唑烷羧酸(thiazolidinecarboxylicacid)、脱氢脯氨酸、3-和4-曱基脯氨酸、和3，3-二曱基脯氨酸。亲本多肽中的必需氨基酸可以依照本领域已知的方法鉴定，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变法(Cunningham和Wells，1989，Science244:1081-1085)。在后一技术中，向分子中的每个残基引入单一丙氨酸突变，并且测试所得突变分子的生物活性(即，肌醇六磷酸酶活性)以鉴定对于所述分子的活性而言关键的氨基酸残基。同样参见Hilton等，1996,J.Biol.Chem.271:4699-4708。定，如通过以下这些技术如核》兹共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记，结合对推定^l妻触位点氨基酸的突变来加以测定。参见例如deVos等，1992，Science255:306-312;Smith等，1992,J.Mol.Biol.224:899-904;Wlodaver等，1992,FEBSLett.309:59-64。也可以从分析与本发明多肽的相关多肽的同一性来推断必需氨基酸的身份。可以使用已知的诱变、重组和/或改组(shuffling)方法，然后进行有关的筛选方法，例如那些由Reidhaar-Olson和Sauer,1988，Science241:53-57;Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:2152-2156;WO95/17413;或WO95/22625公开的那些方法来实现和测试单个或多个氨基酸取代。能够使用的其它方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如，Lowman等，1991,Biochem.30:10832-10837;美国专利第5,223,409号；WO92/06204)和区域定向诱变(Derbyshire等,1986,Gene46:145;Ner等,1988,DNA7:127)。诱变/改组方法可以与高通量、自动化筛选方法组合以4企测宿主细胞表达的克隆的、经诱变多肽的活性。使用本领域的标准方法能够从宿主细胞回收25编码活性多肽的经诱变DNA分子并且快速测序。这些方法允许迅速测定感兴趣的多肽中单个氨基酸残基的重要性，并且能够应用于结构未知的多肽。本发明的多肽可以获得自任何属的微生物。就本发明而言，术语"获得自"如用于本文与给定来源有关时应该是指由核苦酸序列编码的多肽是由所述来源产生的，或是由已经插入了来自所述来源的核苷酸序列的菌抹产生的。在优选的方面，获得自给定来源的多肽是胞外分泌的。本发明的多肽可以是细菌多肽。在一个具体的实施方案中，所述多肽能够获得自变形细菌(Proteobacteria);y变形细菌(Gammaproteobacteria);肠杆菌目(Enterobacteriales);肠杆菌牙牛(Enterobacteriaceae);优选来自布丘氏菌属，例如选自以下种乡间布丘氏菌(Buttiauxellaagrestis)、布里纳氏布丘氏菌(Buttiauxellabrennerae)、费拉格布丘氏菌(Buttiauxellaferragutiae)、伽瓦尼布丘氏菌、1尹查德氏布丘氏菌(Buttiauxellaizardii)、诺基亚布丘氏菌(Buttiauxellanoackiae)、瓦姆波德布丘氏菌(Buttiauxellawarmboldiae)、布丘氏菌属菌种B22、布丘氏菌属菌种BTNOl、布丘氏菌属菌种LBV449、布丘氏菌属菌种P5、布丘氏菌属菌种PNBS、布丘氏菌属菌种S212、布丘氏菌属菌种S215、布丘氏菌属菌种S218。http:〃/Taxonomy/Browser。在更优选的方面，多肽是伽瓦尼布丘氏菌或乡间布丘氏菌多肽，最优选是伽瓦尼布丘氏菌DSM18930、乡间布丘氏菌DSM18931或乡间布丘氏菌DSM18932多肽。将会理解的是对于前述的种，本发明包含完全和不完全阶段(perfectandimperfectstates),和其它分类学的等同物(equivalent)，例如无性型(anamo卬h),无论它们已知的种名。本领域熟练技术人员将容易地识别适合的等同物的同一性。这些种的菌抹在许多培养物保藏中心对于公众能够容易地取得，所述保藏中心诸如美国典型培养物保藏中心(theAmericanTypeCultureCollection)(ATCC)、德意志微生物和细胞培养物保藏中心(DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH)(DSMZ)、真菌菌种保藏中心(CentraalbureauVoorSchimmdcultures)(CBS)和农业研究才几构专利培养物保藏中心北区研究中'"(AgriculturalResearchServicePatentCultureCollection,NorthernRegionalResearchCenter)(NRRL)。此外，可以使用上述的探针从其它来源，包括自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物鉴定和获得这些多肽。用于从天然生境(habitat)分离微生物的技术是本领域内公知的。随后可通过相似地筛选其它微生物的基因组或cDNA文库来获得所述多核芬酸。一旦用所述探针;险测到编码多肽的多核苦酉拼列，就能够使用本领域普通技术人员熟知的技术将所述多核苷酸分离或克隆(参见，例如，Sambrook等，1989,见上文)。本发明的多肽还包括融合的多肽或可切割的融合多肽，其中将另一多肽融合在所述多肽或其片段的N末端或C末端。通过将编码另一多肽的核苷酸序列(或其部分)与本发明的核苷酸序列(或其部分)融合来产生融合的多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，并且包括将编码所述多肽的编码序列连接，从而使它们符合读框并且使融合的多肽的表达在相同的启动子和终止子的调控下。l务改的性质在本发明的任何方面的具体实施方案中，肌醇六磷酸酶具有修改的，优选是改进的性质。修改的，优选改进的性质的实例是pl、温度和/或pH稳定性、pH活性谱、温度活性谱、底物谱和在体外或体内的在动物饲料中的性能。术语'M务改"和"改进'，意指与另一肌醇六磷酸酶相比较。这些另外的参照或比较的肌醇六磷酸酶的实例是布丘氏菌属NCIMB41248野生型肌醇六磷酸酶及其具有以下GENESEQP登录号的变体AEH25051、AEH25056、AEH25057、AEH25058、AEH25059、AEH25060、AEH25061、AEH25062、AEH25063、AEH25064、AEH25065、AEH25066、AEH25067、AEH25068、AEH25069、AEH25070、AEH25071、AEH25072、AEH25073、AEH25074、AEH25075和AEH25076。本发明的肌醇六磷酸酶在指定位置包含以下氨基酸中的至少一种119N、120L和/或121E，如实验部分所示，所述本发明的肌醇六磷酸酶具有改进的比活性。在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶包含i)119N;ii)121E;iii)120L;iv)119N和121E;v)119N和120L;vi)121E和120L;或vii)119N、120L和121E。在更进一步的具体实施方案中，i)-vii)的肌醇六磷酸酶具有改进的比活性。比活性如下所述测定。本发明的肌醇六磷酸酶在指定位置包含以下氨基酸中的至少一种109Q和/或111G，预期所述本发明的肌醇六磷酸酶具有改进的稳定性，特别是改进的热稳定性。在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶包含i)111G;ii)109Q;或iii)111G和109Q。在更进一步的实施方案中，i)-iii)的肌醇六磷酸酶具有改进的稳定性，优选是改进的热稳定性。热稳定性如下所述测定。还预期包含193Q的本发明的肌醇六磷酸酶具有改进的稳定性，优选具有改进的热稳定性。热稳定性如下所述测定。在指定位置的其它特定氨基酸，以及其它特定氨基酸取代也在本文中公性质例如pl、温度稳定性、pH稳定性、pH活性谱、温度活性谱、底物语和/或改进的在体外或体内在动物飼料中的性能。比活性在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶相对于参照肌醇六磷酸酶具有改进的比活性。更具体地，本发明的肌醇六磷酸酶的比活性相对于用同样方法测定的参照肌醇六磷酸酶的比活性是至少105%。在更进一步的具体实施方案中，相对比活性是至少110、115、120、125、130、140、145、150、160、170、180、l卯、200、220、240、260、280、300、350或甚至400%,仍是相对于用同样方法测定的参照肌醇六磷酸酶的比活性而言。参照肌醇六磷酸酶的实例在上文列出。对于这种实施方案优选的参照肌醇六磷酸酶是GENESEQP:AEH25072(WO2006/043178的表3中公开的变体)和GENESEQP:AEH25051(WO2006/043178的实施例10中公开的来自布丘氏菌属P1-29的野生型肌醇六磷酸酶)。在替换方案中，术语高比活性是指至少240FYT/mg酶蛋白(EP)的比活性。在一个具体的实施方案中，比活性是至少300、350、400、450、500、550、600或至少650FYT/mgEP。比活性是对高度纯化的样品(SDS聚丙烯酰胺凝胶应该显示只有一个组分存在)测量的。优选地，如通过SDS测定，酶样品是至少95%纯的。酶蛋白浓度可以通过氨基酸分析来测定，并且肌醇六磷酸酶活性以FYT为单位，如实施例3中所述测定，即在pH5.5和37。C对肌醇六磷酸钠底物测定。比活性是所述的特定肌醇六磷酸酶的特征，并且计算为以每mg肌醇六磷酸酶变体酶蛋白的FYT单位测量的肌醇六磷酸酶活性。进一步的细节参见实施例4。等电点(pl)28在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶的pi范围是i)7.0-8.0;ii)7.2-7.8;或iii)7.4-7.6。pi如实施例5中所述测定。pH谱在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶与对照肌醇六磷酸酶相比具有修改的pH谱。对照肌醇六磷酸酶的实例在上文列出。在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶在pH2.0具有的相对活性是在pH4.5(最适pH)的活性的至少30%，优选至少31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%或至少41%。在其它具体实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶在pH6.0具有的相对活性是在pH4.5(最适pH)的活性的至少10%，优选至少15%、20%、25%、30%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%或至少43%。pH谱(肌醇六磷酸酶活性作为pH的函数)是对高度纯化的样品(SDS聚丙烯酰胺凝胶应该显示只有一个组分存在)测定的。优选地，如通过SDS测定，酶样品是至少95%纯的。使用混合緩冲液(buffercocktail)(50mM甘氨酸、50mM乙酸和50mMBis-Tris(二-(2-羟乙基)亚氨基-三(羟曱基)曱烷(Bis陽(2-hydroxyethyl)imino-tris(hydroxymethyl)methan))在2.0-7.5的pH范围测定肌醇六磷酸酶活性，并且在pH5.5和37。C对肌醇六磷酸钠底物进行。优选的测定法是实施例3的测定法，只是将緩冲液替换为上文指定的緩冲液。更多细节参见实施例6。pH稳定性在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶与参照肌醇六磷酸酶相比具有修改的pH稳定性。参照肌醇六磷酸酶的实例在上文列出。在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶在40。C和选自2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0和8.0的pH温育1W小时之后，相对于0小时(温育开始之前)的肌醇六磷酸酶活性，具有至少50%的残余肌醇六磷酸酶活性，优选至少55%、60%、65%、70%、75%、80%、82%、84%、86%、90%、92%或至少94%的残余肌醇六磷酸酶活性。在优选的实施方案中，温育pH是i)2.0,ii)3.0，iii)4.0,iv)5.0，v)6.0，vi)7.0,和vii)8.0。在甚至更优选的实施方案中，温育pH是2.0,并且残余活性是至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%,或至少82%。将肌醇六磷酸酶在调节至期望的pH的0.1M甘氨酸、0.1M乙酸、0.1MBis-Tris中温育。在pH5.5和37。C测定对肌醇六磷酸钠底物的肌醇六磷酸酶活性。实施例3的活性测定法，其中将緩冲液替换成上文指定的缓沖液，是优选的测定法。更多细节参见实施例7。在更进一步的具体实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶在40。C和选自2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0和8.0的pH温育24小时之后，相对于0小时(温育开始之前)的肌醇六磷酸酶活性，具有至少50%的残余肌醇六磷酸酶活性，优选至少51%、52%、54%、56%、58%、60%、62%、64%、66%、68%、70%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、82%、84%、86%，或至少88%的残余肌醇六磷酸酶活性。在优选的实施方案中，温育pH是i)2.0，ii)3.0,iii)4.0，iv)5.0,v)6.0,vi)7.0，和vii)8.0。在甚至更优选的实施方案中，温育pH是2.0，并且残余活性是至少50%、51%、52%、54%,或至少56%。将肌醇六磷酸酶在调节成期望pH的O.IM甘氨酸、0.1M乙酸、O.lMBis-Tris中温育。在pH5.5和37。C测定对肌醇六磷酸钠底物的肌醇六磷酸酶活性。实施例3的活性测定法，其中将缓沖液替换成上文指定的緩冲液，是优选的测定法。更多细节参见实施例7。温度语在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶与参照肌醇六磷酸酶相比具有修改的pH稳定性。参照肌醇六磷酸酶的实例在上文列出。在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶在30。C具有的相对活性是在60°C(最适温度)的活性的至少20%，优选至少22%、24%、26%、28%、30%、32%、34%、36%、38°/。，或至少40%。在另外的具体实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶在70。C具有的相对活性是在60。C(最适温度)的活性的至少10%,优选至少12%、14%、16%、18%、20%、22%,或至少23%。温度谱(肌醇六磷酸酶活性作为温度的函数)是对高度纯化的样品(SDS聚丙烯酰胺凝胶应该显示只有一个组分存在)测定的。优选地，如通过SDS测定，酶样品是至少95%纯的。肌醇六磷酸酶活性是在pH4.0,或在pH5.5,在20-90。C的温度范围测定的。在两种情况下均^f吏用0.25M乙酸钠緩冲液。活性是对肌醇六磷酸钠底物测定的。优选的测定法是实施例3的测定法，当然除了温度不同，并且如果期望，pH也不同，参照上文。更多细节参见实施例8。热稳定性在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶与参照肌醇六磷酸酶相比具有修改的，优选改进的热稳定性。参照肌醇六磷酸酶的实例在上文列出。在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶在pH4.5在高温(如65、70、75、80、85、90或95。C)温育期望的时间(如15分钟、30分钟、1小时、P/2小时或2小时)之后，相对于O小时(温育开始之前)的肌醇六磷酸酶活性，具有至少50%的残余肌醇六^#酸酶活性，优选至少55%、60%、65%、70%、75%、800/。、82。/()、84%、86。/o、90。/o、92o/o，或至少94%。在优选的实施方案中，温育时间是l小时，pH是4.5且温度是80。C。将肌醇六磷酸酶在0.25M乙酸钠中温育。在pH5.5和37。C测定对肌醇六磷酸钠底物的肌醇六磷酸酶活性。实施例3的活性测定法是优选的测定法。或者，可以使用差示扫描量热法(DSC)测量法来测定纯化肌醇六磷酸酶蛋白的变性温度Td。Td可指示蛋白质热稳定性Td越高，热稳定性越高。DSC测量法可以在不同的pH值下进行，例如使用来自MicroCal的VP-DSC。扫描可以1.5。C/min的恒定扫描率在20-9(TC进行。优选的pH值是4.0和5.5，优选4.0。在运行DSC之前，将肌醇六磷酸酶脱盐，例如使用在适当緩沖液(例如25mM乙酸钠pH4.0;0.1M乙酸钠，pH5.5)中平衡的NAP-5柱(Pharmacia)。数据处理使用MicroCalOrigin软件(版本4.10)进行，并且将变性温度Td(也称为解链温度，Tm)定义为温语图(thermogram)中峰顶的温度。在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶具有至少60。C的Td,可以如上所述测定。在更进一步的具体实施方案中，Td是至少61、62、64、66、68、70、72、74、76、78,或至少80°C。在动物饲料中的性能在具体实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶如与参照肌醇六磷酸酶相比具有改进的在动物飼料中的性能。参照肌醇六磷酸酶的实例在上文列出。在动物饲料中的性能可以使用模拟单胃动物中胃肠环境的体外模型测定，例:^i。下饲料样品的组成为30%大豆粉和70%玉米粉，并添加CaCl2至每kg饲料5g钙的浓度，制备所述饲料样品并且在40。C和pH3.0预温育30分钟，其后添加胃蛋白酶(3000U/g飼料)和合适剂量的肌醇六磷酸酶(对全部待测试的肌醇六磷酸酶使用相同的剂量以允许比较)，例如，0.25-0.75肌醇六磷31酸酶单位FYT/g饲料。还包括一个无肌醇六磷酸酶活性的空白作为参照。其后将样品在40。C和pH3.0温育60分钟，接着在pH4.0温育30分钟。终止反应，然后通过添加HC1至终浓度0.5M并在40。C温育2小时来提取肌醇六磷酸和肌醇-磷酸(inositol-phosphates),其后进行一个冻融循环，再在40。C温育1小时。月几醇六石粦酸和月几醇画石粦酸通过如Chen等在JournalofChromatographyA(2003)1018巻，41-52页中所述的高效离子层析来分离，并且如Skoglund等于J.Agric.FoodChem.(1997)，45巻，431-436页中所述定量。然后计算用肌醇六磷酸酶处理的样品和未处理的样品之间的肌醇-磷酸结合的磷(IP-P)的差异作为释放的磷。计算指定的肌醇六磷酸酶相对于期望的参照肌醇六磷酸酶的释放的磷的百分比作为指定的肌醇六磷酸酶的相对性能。在一个具体的实施方案中，本发明的肌醇六磷酸酶的体外相对性能是至少105%,优选至少110、120、130、140、150、160、170、180、190或至少200%。多核苷酸、核酸构建体和表达载体本发明还涉及包含编码本发明的多肽的核苷酸序列的多核苷酸。所述多核苷酸优选是基本上纯的(substantiallypure)或是分离的，这是指不含其它外源或不想要的核苷酸的多核苷酸制备物，并且是以适合在基因工程化的蛋白质产生系统中使用的形式。因此，基本上纯的多核苷酸按重量计含有最多10%,优选最多8%,更优选最多6%,更优选最多5%,更优选最多4%,更优选最多3%,甚至更优选最多2%,最优选最多1%,并且甚至最优选最多0.5%的与其天然结合的其它多核苷酸物质。然而，基本上纯的多核苦酸可以包括天然存在的5'和3，非翻译区，例如启动子和终止子。优选所述基本上纯的多核苷酸按重量计是至少90%纯的，优选至少92%纯的，更优选至少94%纯的，更优选至少95%纯的，更优选至少96%纯的，更优选至少97%纯的，甚至更优选至少98%纯的，最优选至少99%,并且甚至最优选至少99.5%纯的。本发明的多核苷酸优选是基本上纯的形式。具体而言，优选本文公开的多核苷酸是"基本上纯的形式(essentiallypureform)",即，所述多核苷酸制备物基本上不含与其天然结合的其它多核苷酸物质。在本文中，术语"基本上纯的多核苷酸"与术语"分离的多核苷酸"和"分离形式的多核香酸"同32义。多核苷酸可以是基因组的、cDNA、RNA、半合成、合成来源，或它们的任意组合。本发明还涉及核酸构建体，所述构建体包含本发明的分离的多核苦酸，其与一个或多个调控序列可操作地连接，所述调控序列在合适的宿主细胞内在与该调控序列相容的条件下指导编码序列的表达。术语"核酸构建体"如用于本文是指单链或双链的核酸分子，所述核酸分子分离自天然存在的基因，或者修饰所述核酸分子以使其以本来不存在于自然界中(wouldnototherwiseexistinnature)的方式含有核酸的区4更。当核酸构建体包含表达本发明的编码序列所需的调控序列时，术语核酸构建体与术语"表达盒，，(expressioncassette)同义。术语"调控序列'，在本文定义为包括对于编码本发明的多肽的多核苷酸表达是必需的或有利的所有成分。对于编码多肽的核苷酸序列而言每个调控序列可以是天然的或外源的。这样的调控序列包括，但不限于，前导序列，多腺苷酸化序列，前肽序列，启动子，信号肽序列和转录终止子。最少的情况，调控序列包括启动子，和转录的和翻译的终止信号。调控序列可以和用于引入特异性限制位点的接头一起提供，所述特异性限制位点促进调控序列与编码多肽的核香酸序列编码区的连接。调控序列可以是适当的启动子序列，其是由宿主细胞识别用于表达编码本发明的多肽的多核苷酸的核苷S殳序列。用于指导本发明的核酸构建体转录，特别是在细菌宿主细胞中转录的合适启动子的实例是从以下获得的启动子大肠杆菌lac操纵子、天蓝色链霉菌(Streptomycescoelicolor)琼脂糖酶基因(dagA)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)a-淀粉酶基因(amyL)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus)产麦芽淀粉酶基因(amyM)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)a-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因，和原核|3-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等,1978,ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA75:3727-3731》以及tac启动子(DeBoer1983,ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA80:21-25)。另American,1980,242:74-94;和Sambrook等'1989，见上文中描述。调控序列也可以是合适的转录终止子序列，是由宿主细胞识别以终止转录的序列。所述终止子序列与