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第第页土壤淀粉酶(SoilAmylase,S-AL)试剂盒说明书土壤淀粉酶(SoilAmylase,SAL)试剂盒说明书微量法100T/48S注意:正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。测定意义:淀粉酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物,是一种重要的酶制剂,广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。测定原理:淀粉酶水解淀粉产生还原糖,可与3,5二硝基水杨酸反应生成红棕色物质,在508nm处有特征吸收峰,颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。需自备的仪器和用品:天平、水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、甲苯。试剂的组成和配制:试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存。试剂二:液体4mL×1瓶,4℃保存。若出现沉淀析出,需70℃加热溶解后再用。试剂三:液体12mL×1瓶,4℃保存。测定操作表:对照管测定管土样(g)0.020.02甲苯(μL)101025℃静置15min试剂一(μL)11050试剂二(μL)60充分混匀,37℃震荡1h,8000rpm,25℃,离心10min上清液(μL)100100试剂三(μL)100100充分混匀,90℃水浴5min,待冷却后,于微量石英比色皿/96孔板中测定508nm吸光值,分别记为A对照管和A测定管,△A=A测定管A对照管。计算公式:a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线:y=0.2525x0.034,R²=0.9917酶活单位定义:每g土样每天催化生成1mg还原糖为一个酶活力单位。SAL(mg/d/g鲜重)=(△A+0.034)÷0.2525×V反总÷W÷T=10.464×(△A+0.034)÷WV反总:反应体系总体积,0.11mL;T:反应时间,1/24d;W:样本质量,g。b.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线:y=0.1263x0.034,R²=0.9917酶活单位定义:每g土样每天催化生成1mg还原糖为一个酶活力单位。SAL(mg/d/g)=(△A+0.034)÷0.1263×V反总÷W÷T=20.928×(△A+0.
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