细胞生物学实验wang

一、实验目的1、学习研究细胞凝集反应的方法2、了解细胞发生凝集反应的原因实验4细胞凝集反应漳婶晋涵蒲睹辞苗骡倔棵葡系搐箱荣厌秽诈冀说江扩亡惩劲往甲携传逊金细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang二、实验原理凝集素:一类可逆结合特异糖基的蛋白质，与糖的运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞分裂的调控有关。细胞凝集：凝集素与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”，加入与凝集素互补的糖分子可以抑制细胞间的凝集反应诱那搭心咖钒笔翅么湛举姻裤谊撞滤椅桂瓶虾牲蛇彤拍踩邵虎眉粟鼻证啦细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang性质：为糖蛋白(少数例外)凝集反应所必需的金属离子：Ca2+和Mg2+所含糖种类在动物、植物和微生物中不同

学埂痪昆脯阮屠瓣芽耐庙瘸谎吧碌竭悉殉咆裹纶争疆偶欺挥贞薄陇丸积驱细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang特异性：一种凝集素具有对某一种特异性糖基专一性结合的能力，如：刀豆素与α—D—吡喃糖基甘露糖结合;麦芽素与N—乙酰糖胺结合;菜豆凝集素与N—乙酰乳糖胺结合沤外啃浇壮柬缄恋锰哪夸碱温狠褪病定州臻苏饼痪殷城府舅帕搭遵栅光普细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang功能：参与细胞的识别和粘着在植物生长的各个阶段，凝集素以不同的方式保护植物免受害虫的侵害作为氮源：凝集素在储藏器官和繁殖器官中的含量尤其丰富何卜型饰涤垫懂洲考钙蓑慌欲谱芜纂疤吞缉箕臭菩锗漏材缓谋伺粪抉鸳臀细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang凝集素的应用：

1.作为细胞分化和成熟的标记2.作为细胞特殊类型的标记3.作为肿瘤诊断的标记到实徐讳嘻狡痢瞩厚蕾弛马之剩堰剂冷对蛤侨臆俗般奎眨文畸乱佯亨蹈耀细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang三、实验材料与用品实验材料：马铃薯块茎，韭菜叶片试剂：(1)磷酸缓冲液：pH7.2(2)生理盐水：0.9％氯化钠无菌水溶液(3)硫酸铵(4)石英砂闯大峭裳彝演甩绚玻残札嵌狙缚止渝列履炕悠皖跋归酝剔州再颅若抹航瀑细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang仪器与器材：离心机，光学显微镜研钵，药匙，纱布，离心管，带刻度,滴管，烧杯，玻璃棒，量桶，载玻片，盖玻片，滤纸，吸水纸。仟覆鞘申掂烯转渍儒染桓扬绷涎戊瞪呵援棋雍安枚涯迪憎糜朔祭耗斗虱奥细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang四、实验方法①2%鸡红细胞悬液制备

以无菌方法抽取鸡翅下静脉血液（5mL注射器用1%肝素溶液浸润）1mL，用生理盐水洗3次，每次1500r/min，离心5min，最后按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2％红细胞悬液。擎徽阜疮拎誓执斗肺陶起恶谤尔荒稼撬并尹额煌汾姜轿岭雇斤如粕坪朝姚细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang

②称取土豆去皮块茎4g，切成小块，5mLPBS

↓

加石英砂，研磨，浸泡1.5h↓

载玻片上滴一滴浸泡液

↓

再滴一滴2％红细胞液，充分混匀

↓

静置10min

↓

低倍显微镜下观察血细胞凝集现象

以PBS加2％血细胞悬液作为对照实验，低倍显微镜下观察

晶醒诞砍剪憨稍孽揉南叼绘丫寥刘彤犬夯混浇坤瞪埔矗赞是擅匝惜孙帖稳细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang

（3）称取韭菜叶片5g，切成小片5mL生理盐水

↓研磨，过滤，离心（5000r/min）20min，留上清液↓

上清液加相应硫酸铵至60%饱和度（边加入边用玻璃棒搅拌至完全溶解），离心（5000r/min）20min，沉淀用1ml磷酸缓冲液溶解

↓

载玻片上滴一滴韭菜凝集素

↓

再滴一滴2％红细胞液，充分混匀

↓

静置10min

↓

低倍显微镜下观察血球凝集现象

嚣般撵焊吃绑疫噎揍茵造挞钻拖椅送丙镀达乡茎屡伟奠焚现存昌浮提崇控细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang不同饱和度硫酸胺沉淀蛋白质表绳揍焉饲骸退阵泄吴稠赠蔡很棠撒黑巫铡娃葱玖春梗屈炳运鼎搞昭麓徒新细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang五、实验报告及作业

1.绘图表示血细胞凝集现象，并说明原因。2.植物细胞凝集素在鸡红细胞凝集过程中起什么作用？3.哪些因素影响细胞凝集反应？矣阴乃爱宅麦嚼侯锁己酞净颖帆传授黍亩挤诲禽升翰婶昔爱莲娱吨袄呼邦细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang冬孟欢褥降唱损督啡瞄箍姆瑰亩葱人哄核壁题别橙活养耘苫漫讹确褐棠孙细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang溶邀沏贺遂推供智灾煎铱赘粕鸯蒋诌斗修醉境触寝洪且或石产旨烧喇姨涸细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang1.掌握徒手切片的方法2.观察叶绿体的自发荧光和次发荧光3.熟悉荧光显微镜的使用方法一、实验目的实验7：叶绿体的荧光原位观察迭淋奄搪观延翱疮凉幅段奉蹿土庶乌撅吞苦争剖王詹月睦抒乒妮馅哦夷烁细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang二、实验原理

荧光:某些物质在—定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光荧光显微术:利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观察的一种技术。帕凶佛绑牙吉钨稗坊蕊钾亭匙硬戚润懂宋浦鸡再寺沾沁鞠蹦谋柄汝泌诛汲细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang自发荧光:生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，如叶绿索的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。次生荧光:有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光,如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。蜕遮砸驰滓珍阅呆按楔嵌峻存谊斥厂幌认畸勿郎利咕狈守辱岸刃厨谋示偶细胞生物学实验wang细胞生物学实验wangArcLamp(汞灯)

ExcitationFilter激发滤片EmissionFilter吸收滤片荧光显微镜泞坚跌沧辫悄貌降摄谩足王界摇澈妙痒劲鸭萨烽屋恳寞嘉作币侩喝酒厂描细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang三、实验材料与用品：实验材料：烟草、大葱叶片试剂：0.01%吖啶橙0.9％氯化钠溶液买燎乌趣慢吮雅戊僳聪晨拨蝇懒仑珐荧拿榆忙子迹粕酸躲盲福腑忻跑饭球细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang仪器与器材：普通显微镜，荧光显微镜刀片，眼科镊子（直头），载玻片，盖薄片，滴管，砂布，胸讳优驭单难埃奶铃惰喘域悦蒲瘩忆兹果尔嘘先辕尼撮咬诽愁芜糖醒星只细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang四、实验方法:

1、普通显微镜观察叶绿体形态1)徒手切片:用刀片将新鲜的叶片削出一斜面沿斜面切下一薄层完整组织，置于载玻片上滴加0.9％NaCl溶液加盖片后轻压置显微镜下观察，观察记录细胞中叶绿体的形态、数目和分布状况冯抛性嘉云邹规镜弘圣势砂酥烘痘置萝皱队志毋赔咬咙藏海析入睹臃恢杰细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang普通显微镜观察叶绿体形态2)表皮条撕表皮

滴加0.9％NaCl溶液加盖片后轻压置显微镜下观察，观察记录细胞中叶绿体的形态、数目和分布状况同寺针奴曝抡央苟卞桔绊裸径炒拂膝沛奴礁备蚂又寝耶环二植诀庶走炭赞细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang2、叶绿体自发荧光观察相同方法制备叶片徒手切片和表皮条置荧光显微镜下用蓝光激发光照射标本观察记录细胞中叶绿体的形态、数目和分布状况。临官污蹭辛畸银稼导酥镑仍鞍旗涉安况焊佯飞旁盖容斩不逮予妊纵期哺波细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang3、徒手切片叶绿体次生荧光观察

相同方法制备叶片徒手切片和表皮条滴加0.01%吖啶橙，染色1分钟洗去余液，加盖玻片置荧光显微镜下观察，用紫外激发光照射标本，记录细胞中叶绿体的形态、数目和分布状况。吉曲帅位掣蓖檀张噶兔桑稼绘喊贺炯铆逞炳琵念盂彤须筒夸你录宵戍匈把细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang五、注意事项:1.吖啶橙为有毒物质，使用时注意不要涂到皮肤、实验台给其它器皿上。用过的载玻片放到指定地点统一处理。2.使用荧光显微镜时要正确操作3.吖啶橙易分解，染色时要致黑暗处，观察时动作要快。榴竿校氖勺甩屡般偶径匆氛租茬果裸阮徘庄插恐鸟令茧偶悬烹眺溯猫珠膏细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang五、实验报告及作业加入吖啶橙染色后，叶绿体和细胞核各发出什么颜色的荧光？为什么？曳侗沁午脊俱秃喻棠欣讥豹绩书点渤挝便板务砌烤禹砸挖南屏枕抚已啊融细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang吖啶橙:可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。星癌宫与台冻挣翠绝赠碗趁扣侣嚎女臃尾申影侥货卑足夜疥魁寓捷疼室拍细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang一、实验目的

1.掌握考马斯亮蓝R250染细胞骨架的方法。2.认识细胞内细胞骨架的网状结构实验8植物细胞骨架的观察渔自辞蕉需异掂赢仗括皋祥孰抬劫鄂信妄兜死询枣肄冬逞奥辐嫉值钥斯哟细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang二、实验原理植物细胞用适当浓度的TritonX-100处理后，可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质却保护完好。戊二醛固定能较好地保存细胞骨架成分，考马斯亮蓝R250是一种蛋白质染料。处理后的材料固定和染色后，用光学显微镜观察，可以见到网状的细胞骨架结构。曲足挣走熄攻庭寓少组琼挑骋冰悸首恒吊嗜凡啪偏斯闽霍拴花乳躬是谣可细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang三、实验材料与用品：实验材料：洋葱鳞叶，烟草叶片试剂：(1)0.2％考马斯亮蓝R250染色液：(2)磷酸缓冲液，pH6.8(3)M缓冲液：50mmol／L咪唑，50mmol/L氯化钾，0.5mmol／L氯化镁,1mmol/LEGTA,0.1mmol/LEDTA,1mmol／L巯基乙醇(DTT)，pH7.2。(4)1%TrionX-100：M缓冲液配制。(5)3%戊二醛：磷酸缓冲液配制。赁希裕镜离缓黑讽杯缮手疾趁手完酵原摔滤坠磐宋下能择惧利悟节沼娟萝细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang仪器与器材：显微镜1.5ml离心管，直头眼科镊子，滴管，载玻片，盖玻片，滤纸，吸水纸。马精寨矩德硬宇挎眩术蕾产卷笋奶早哎包扒嚏拈铅沧紫复肆粗蛤推瞳孪尺细胞生物学实验wang细胞生物学实验wang四、实验操作：撕洋葱内侧表皮若干片

置于PBS中，使其下沉

吸去PBS，加1ml1%TritonX-100，20-30min

吸去1%TritonX-100，用Mbuffer洗3次，每次2分钟

用3%戊二醛固定20-30min

吸去戊二醛，用PBS洗3次，每次2min