紫外分光光度法测定核苷酸含量

实验二：

核酸的紫外扫描及含量测定独郊酱帖耻挫俐韵绚划贾早钱誓通唯扬溃帘戍贬埠状绸锯棕渤淖蕾坛评浮紫外分光光度法测定核苷酸含量紫外分光光度法测定核苷酸含量实验目的1.了解紫外分光光度计的基本原理并掌握其使用方法。2.掌握使用紫外分光光度法测定核酸含量的原理和方法。遥重乞边坷耻霓兔彪哎钞败拣瑞滤裤楼傈剐幌煽规大茶依惰急凿袄哄捍辐紫外分光光度法测定核苷酸含量紫外分光光度法测定核苷酸含量实验原理

核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键，具有紫外吸收。RNA和DNA的紫外吸收峰为260nm。一般在260nm波长下，每毫升含1mgDNA溶液的光吸收值约为0.020，每毫升含1mgRNA溶液的光吸收值为0.022。故测定待测浓度RNA或DNA溶液260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便，迅速。若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质，则测定误差较大，故应设法事先除去。纯净的RNA溶液，其A260/A280≥2；纯净的DNA溶液，其A260/A280≥1.8。

张锻洪从难胯雍派像篆卉考脆嘱拐故稻箱套末港红习焰叙张甫删最咀写践紫外分光光度法测定核苷酸含量紫外分光光度法测定核苷酸含量实验原理如果已知待测的核酸样品不含酸溶性核苷酸或可透析的低聚多核苷酸，即可将样品配制成一定浓度的溶液(20～50mg/mL)，在紫外分光光度计上直接测定。

蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在280nm处，在260nm处的吸收值仅为核酸的十分之一或更低，故核酸样品中蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。

RNA在260nm与280nm处的吸收比值在2.0以上，DNA的比值则在1.9左右。当样品中蛋白质含量较高时，比值即下降。畸茸渺檀觉脏控您叶撑瑞辅宋甜锅弧冀彭鸥骸垫笨蝶涨酒妥戴缴驮浴丑灼紫外分光光度法测定核苷酸含量紫外分光光度法测定核苷酸含量实验器材1.UV-1000型紫外可见分光光度计洒晶测蕾砖后恤珍凭妙搞优砖猖椒愿乌檀邱具撰龋仕闰炔麻刊个秉雏扇哄紫外分光光度法测定核苷酸含量紫外分光光度法测定核苷酸含量操作指南：1.打开仪器电源，系统自检，并预热20min。2.选择“光度测量”，按“enter”进入吸光度测量。3.关上暗盒盖，将装参比液的比色皿，推入光路中，按“enter”进入后，系统自动调整投射比为100%和0%。4.关上暗盒盖，将装参比液的比色皿，推入光路中，按“zero”键调使吸光度A为0.000。5.测量样品。将被测溶液推入光路中，待读数稳定后，读取吸光度。6.仪器使用完毕，取出比色皿，洗净、晾干。7.关闭电源开关，拔下电源插头，复原仪器。8.登记《仪器使用记录表》丁闯跺碘诸穴打陀么堪袭亿侩粉闻敝因肄角梭茶姓辑邪拐萌豹眨迪心菩罩紫外分光光度法测定核苷酸含量紫外分光光度法测定核苷酸含量关于比色皿：比色皿的前后有2个光滑面，是用来对准光路的，左右有2个粗糙面，手只能拿比色皿的粗糙面，不能接触光滑面。比色皿的内部的清洗只能用蒸馏水润洗（用洗瓶），不可用卫生纸或其他物品捅进去擦洗，比色皿的2个光滑面一定要保持清洁，如发现有指纹或残液，须用卫生纸轻轻擦拭干净。比色皿是成套发放的，严禁混用，本实验使用的是石英比色皿。使用完毕后先用自来水内外冲洗干净比色皿，再用洗瓶冲洗比色皿的内外表面1次，将其粗糙面朝下斜靠在培养皿中。娠拧叹阂裤轩笛溉齿往蔗灰厉架蠢翱验害晌峙毖蘑攘黑莹壹洞柱脾庆拜捆紫外分光光度法测定核苷酸含量紫外分光光度法测定核苷酸含量2.取样器：参见实验一，10uL、200uL各1支/组。

使用指南：接好套头（不漏气）→通过旋钮调节容量（如500表示5mL）→用活塞第一挡吸液→用活塞第一挡和第二挡放液→换套头→继续使用。注意，平时取样器应挂在架子上，绝不可倒置，以免溶液倒流入枪体中而损坏仪器。瞎狗皑阀难矗浇几注看在盆燥娘染荚迅违宰动救孕昨孙氛坑靛什掏急坡麓紫外分光光度法测定核苷酸含量紫外分光光度法测定核苷酸含量3.其他器材：试管，试管架、烧杯、卫生纸。实验试剂1.

蒸馏水2.

待测的DNA溶液氛法殴角业严踏牺掂嗓噪廓亲绞狐恰这际腾圾庚述颖冕叹滨躺黄旦名挣鄂紫外分光光度法测定核苷酸含量紫外分光光度法测定核苷酸含量样品测定：1.取两个比色皿，一个加蒸馏水做空白对照。一个用来加DNA样品。2.取10uL的DNA样品,加入1990uL的蒸馏水稀释200倍。进行测定含量。4．