人信号转导分子(Smad1)ELISA试剂盒应用方法

第第页人信号转导分子（Smad1）ELISA试剂盒应用方法产品全称:Smad1人信号转导分子ELISA检测试剂盒直销英文简称:HumansignaltransductionSmad1ELISAKit规格:48T/96T服务:可供应免费代测服务,以及产品说明书和技术引导等保管环境:28℃低温、避光、防潮重要成分:酶标板,试剂,标准品等。检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包含血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本.需要而未供应。试剂配制:1、酶联板（Assayplate）:一块（96孔或者48孔）。2、标准品（Standard）:2瓶（冻干品）。3、样品稀释液（SampleDiluent）:1×20ml/瓶。4、生物素标记抗体稀释液（BiotinantibodyDiluent）:1×10ml/瓶。5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRPavidinDiluent）:1×10ml/瓶。6、生物素标记抗体（Biotinantibody）:1×120μl/瓶（1:100）7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRPavidin）:1×120μl/瓶（1:100）8、底物溶液（TMBSubstrate）:1×10ml/瓶。9、浓洗涤液（WashBuffer）:1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10、停止液（StopSolution）:1×10ml/瓶（2NH2SO4）。注意事项:1.Smad1人信号转导分子ELISA检测试剂盒直销使用前请保管在28℃。复溶后的标准品若未用完,请废弃。2.微量试剂运输中颠簸和可能的倒置,会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请1000转/分别心1分钟,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。3.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,微加热至40℃使结晶完wan全溶解后再配制洗涤液。（加热温度不要超出50℃）使用时洗涤液应为室温。4.不同批号的试剂盒组份避开混用（洗涤液和反应停止液除外）。5.充分细小混匀对反应结果尤为紧要,最好使用微量振荡器（使用zui低频率）,如无微量振荡器,可在反应孵育前手工轻轻混匀。6.在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测。7.试验中所用的试管和吸头均为一次性使用,严禁在不同的液体之间混用!否则将影响试验结果。8.试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标本时,请按国家生物试验室安全防护条列执行。操作步骤:1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。3、加标准品和待测样本:取充分数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。7、温育:重复4的操作。8、洗板:重复5的操作。9、显色:每孔先加入显色剂A液50μL,再加入显色剂B液50μL,37℃避光显色15min。10、停止:取出酶标板,每孔加停止液50μL,停止反应（颜色由蓝色立转黄色）。11、测定:以空白孔调零,在停止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。12、计算:依据标准品的浓度及对应的