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小麦春化相关基因的克隆及其功能研究春化阶段是小麦生长发育进程中一个及其关键的时期。本研究从不同春化发育特性小麦辽春10和京841春化响应转录组Illumina高通量测序结果中,筛选出2个强烈上调的ESTsCL13519、Unigene1312和2个下调ESTsUnigene4460、Unigene20。以春性小麦辽春10和冬性小麦京841为材料,系统分析了4个候选ESTs在转录水平的序列差异及春化处理过程中的表达特性,利用病毒诱导的基因沉默技术进行基因功能验证;构建CL13519过表达载体,利用农杆菌介导法将重组载体导入拟南芥中,分析转基因材料的生长发育特性。主要研究结果如下:1、以春性品种辽春10号和冬性品种京841为材料,克隆并分析4个ESTs的序列差异。结果显示:CL13519长1010bp,ORF长681bp,编码226个氨基酸,与TaHOX1（GenBank:JQ915062.1）相似度87.49%;Unigene1312长度为479bp,ORF全长282bp,5′UTR169bp,3′UTR26bp,编码93个氨基酸,与硬质四倍体小麦脱水素（GenBank:X78432.1）一致性高达85%;Unigene4460长361bp,经TAIR在线分析,可能与H3蛋白甲基化相关;Unigene20长632bp,与中国春3B染色体上一段序列（GenBank:HG670306.1）相似度高达83.91%,与山羊草hypotheticalproteinF775<sub>3</sub>2582序列（GenBank:KD510223.1）相似度达77.15%。2、利用实时荧光定量PCR分析了4个ESTs在不同春化特性小麦中的表达特性,结果表明:CL13519、Unigene1312在辽春10号中表达量呈抛物线型表达,第5周时表达量达到最大值;Unigene1312在京841中的表达量呈抛物线型表达,第5周时表达量达到最大值;CL13519在京841中表达模式中有两个峰值,最大值出现在春化处理第五周;Unigene4460在辽春10号中表达量呈波动式下调表达;Unigene4460在京841中第1周急剧升高后急剧下降之后一直下调表达;Unigene20在辽春10号和京841中均呈波浪型表达,在第5周时表达量最低。3、以辽春10号为试验材料,利用病毒诱导的基因沉默技术（VIGS）,成功构建了小麦VIGS基因功能验证的技术体系,并对所挑选的4个ESTs进行验证分析。结果显示:BSMV的侵染对小麦植株幼穗的分化进程产生了一定的影响。本试验中空白对照组、阴性对照组、阳性对照组之间小麦幼穗分化几乎无差异,BSMV:CL13519、BSMV:Unigene1312、BSMV:Unigene20幼穗分化发育晚于对照,而BSMV:Unigene4460侵染却加速了幼穗分化。4、以pCAMBIA3301为表达载体成功构建CL13519过表达载体,并通过农杆菌介导法对拟南芥进行转化,

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