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文档简介
关于食品中菌落总数检验
菌落总数概念菌落(bacterialcolonies)是指细菌在固体培养基上生长,由一个细胞繁殖而形成的能被肉眼识别的细胞群体,它是由数以万计相同的细菌集合而成。第2页,共26页,2024年2月25日,星期天菌落总数概念菌落总数
指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每克(每毫升)检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定,即在需氧情况下,36±1℃培养48h,能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数。第3页,共26页,2024年2月25日,星期天菌落总数概念注意:
菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数,菌落总数并不能区分其中细菌的种类,所以有时被称为杂菌数,需氧菌数等。例如:厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌,由于现有条件不能满足其生理需求,故难以繁殖生长。第4页,共26页,2024年2月25日,星期天菌落总数概念菌落总数测定(Detectionofbacterialcoloniescount)是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量,它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求,以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。第5页,共26页,2024年2月25日,星期天检测方法国家标准:GB/T4789.2-2003进出口行业标准:SN0168-1992SN/T1059.3-2002进出口食品中平板菌落计数--滤膜法其它国家或国际组织认可的方法和标准如:ISO、NMKL、FDA、AOAC等。3M纸片法第6页,共26页,2024年2月25日,星期天检测方法国内外菌落总数测定方法基本一致。基本操作一般包括:检样→样品的稀释→倾注平皿→培养48小时→计数报告。不同之处:—稀释液、培养基略有不同—计数方法略有不同—具体操作上要求不同
第7页,共26页,2024年2月25日,星期天检测步骤
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检样检样处理参照GB/T4789.17~25-2003中各类食品检验要求样品的代表性注意检样部位(如鱼取背肌)。如系固体样品,取样时不应集中一点,宜多采几个部位,必须经过均质或研磨,液体样品须经过振摇。无菌操作所用玻璃器皿、剪刀、镊子等器具必须是完全灭菌的,不得残留有细菌或抑菌物质。样品如果有包装,应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。第8页,共26页,2024年2月25日,星期天检测方法—样品稀释样品稀释误差为减少样品稀释误差,在连续倍比稀释时,每一稀释液应充分振摇使其均匀,同时每一稀释度应更换一支吸管,将吸管内液体沿管壁流入,吸管尖端不能伸入稀释液内,以免吸管外部粘附的检液溶于其内。
为减少稀释误差,SN标准采用取10mL稀释液,注入90mL缓冲液中。第9页,共26页,2024年2月25日,星期天检测步骤—接种接种方式倾注接种法,涂布接种法,螺旋接种法等。培养基量将凉至46℃左右营养琼脂培养基注入平皿约15mL,并转动平皿,混合均匀。接种量选择2~3个适宜的稀释度,一般每个平板接种1mL。涂布或螺旋方式接种量每块平板一般在50~100μL。第10页,共26页,2024年2月25日,星期天检测步骤—培养平板放置待琼脂平板凝固后倒置放入培养箱中。培养温度一般36±1℃,有的为30℃。培养时间48±2h。第11页,共26页,2024年2月25日,星期天检测方法—计数菌落读取培养到时间后,应立即计数。选定适宜菌落数的平板来读取。可用肉眼观察,或借助计数工具(如:放大镜、菌落计数器等)。注意:应在充足柔和的光线下进行菌落计数。避免将平板上来源于未溶解的培养基、样品或沉淀物的颗粒计数成菌落。菌落计数器全自动菌落分析仪第12页,共26页,2024年2月25日,星期天规则一:选择平均菌落数在30~300之间的稀释度,乘以稀释倍数即为样品中菌落数。(例1)
规则二:若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2,应报告其平均数;若大于2则报告其中较小的数字。(例2和例3)
检测方法-计数菌落计数和计算GB/T4789.2-2003方法第13页,共26页,2024年2月25日,星期天规则三:若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数即为样品中菌落数。(例4)
规则四:若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数即为样品中菌落数。(例5)检测方法-计数菌落计数和计算GB/T4789.2-2003方法第14页,共26页,2024年2月25日,星期天规则五:若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数即为样品中菌落数。(例6)检测方法-计数菌落计数和计算GB/T4789.2-2003方法规则六:若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数即为样品中菌落数(例7)第15页,共26页,2024年2月25日,星期天稀释度选择及菌落数报告方式例次稀释液及菌落数两稀释液之比菌落总数cfu/g或mL报告方式cfu/g或mL10-1
10-2
10-3
1多不可计16420—1640016000或1.6×104
2多不可计295461.63775038000或3.8×104
3多不可计271602.22710027000或2.7×104
4多不可计多不可计313—313000310000或3.1×105
527115—270270或2.7×102
6000—<1×10<107多不可计30512—3050031000或3.1×104
第16页,共26页,2024年2月25日,星期天规则一:选择25~250个菌落的平板计数。如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内,先计算两个平板的平均值,再乘以相应稀释倍数即为样品中菌落数。(例1)
规则二:如有两个稀释度在合适范围内,先计算每个稀释度两个平板的平均值,再计算两个稀释度的平均值,然后乘以相应的稀释倍数即为样品中菌落数(例2)检测方法-计数菌落计数和计算SN0168-1992方法第17页,共26页,2024年2月25日,星期天规则三:当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时,计算两个平板上的平均菌落数,乘以最低稀释倍数即得到估计的菌落数,加*号表示。(例3)
检测方法-计数菌落计数和计算SN0168-1992方法规则四:当所有平板上的菌落都超过250时,则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以最高稀释倍数即为估计的菌落数,加*号表示。(例4)第18页,共26页,2024年2月25日,星期天
规则五:若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数即为样品中菌落数,加*号表示。(例5)
规则六:同一稀释度两个平板中,一个有25~250个菌落,另一个多于250个,两个平板都要计数,再按规则一计算。(例6)检测方法-计数菌落计数和计算SN0168-1992方法第19页,共26页,2024年2月25日,星期天规则七:两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25~250个范围,而另一个的菌落高于250或低于25,则四个平板都要计数,按规则二和规则三计算。(例7)检测方法-计数菌落计数和计算SN0168-1992方法规则八:某稀释度两个平板都有25~250个菌落,而另一个稀释度只有一个平板在25~250范围内,则四个平板都要计数,按规则二和规则三计算。(例8和例9)第20页,共26页,2024年2月25日,星期天蔓延菌落平板:平板出现的蔓延菌落,被蔓延菌落盖住包括抑制生长的区域面积超过50%,或被蔓延菌落抑制生长的区域面积超过25%,不予计数这样的平板。(例10)检测方法-计数菌落计数和计算SN0168-1992方法数值修约:只有在换算到每克(每毫升)样品中菌落数时,再进行数值修约。即取两位有效数字,第三位采用四舍五入法。第21页,共26页,2024年2月25日,星期天平板菌落数计算报告方式例次稀释液及菌落数计算规则菌落总数cfu/g或mL10-2
10-3
10-4
1多不可计1752081617规则一:175和208平均190000或1.9×105
2多不可计2242452530规则二:四个数平均250000或2.5×105
318142000规则三:取最低稀释度18和14平均1600*或1.6×103*4多不可计多不可计523487规则四:取最高稀释度523和487平均5100000*或5.1×106*
5000000规则五:小于1乘以取最低稀释度<100*或<1.0×102*
6多不可计2452732320规则六:245和273平均260000·或2.6×105
第22页,共26页,2024年2月25日,星期天平板菌落数计算报告方式例次稀释液及菌落数计算规则菌落总数cfu/g或mL10-2
10-3
10-4
7多不可计2252552140规则七:四个数平均270000或2.7×105
8多不可计2102401828规则八:四个数平均230000或2.3×105
9多不可计2602303028规则八:四个数平均270000或2.7×106
10多不可计24523035蔓延菌落蔓延菌落不计:三个数平均290000或2.9×105第23页,共26页,2024年2月25日,星期天检测结果报告菌落计数单位表示:通常用菌落形成单位CFU(colonyformingunit)表示,如:
“CFU/g”(一般是固体样品),“CFU/mL”(一般是液体样品),“CFU/cm2”(表面积取样法时)和“CFU/双”(如加工人员的手)等。也有用“个/g”,“个/mL”表示。菌落计数数字的表示方法:一般用两位有效数字,也可以10的指数来表示。例:“85CFU/g”,“1.6×103CFU/mL”等是常见的表示方式。第24
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