GB 5009.191-2024 食品安全国家标准 食品中氯丙醇及其脂肪酸酯、缩水甘油酯的测定

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华

人

民

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和

国

国

家

标

准学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—20241食品安全国家标准食品中氯丙醇及其脂肪酸酯

缩水甘油酯的测定国

家

市

场

国

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监

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- -

-学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1前 言11本标准代替

GB5009.91—2016《食品安全国家标准 食品中氯丙醇及其脂肪酸酯含量的测定》。11本标准与

GB5009.91—2016相比,主要变化如下:2———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中氯丙醇及其脂肪酸酯、缩水甘油酯的测定”;2———氯丙醇含量的测定方法修订为第一篇 食品中氯丙醇含量的测定 同位素稀释-气相色谱-质谱法,代替原标准第一法 食品中3-氯-1,-丙二醇含量的测定 同位素稀释-气相色谱-质谱法和第二法 食品中氯丙醇多组分含量的测定 同位素稀释-气相色谱-质谱法;———在氯丙醇脂肪酸酯含量测定中增加缩水甘油酯的测定,方法修订为第二篇 第一法 同位素稀释-碱水解-气相色谱-串联质谱法、第二法 同位素稀释-酸水解-气相色谱-串联质谱法和第三法 同位素稀释-碱水解-气相色谱-质谱法,代替原第三法 食品中氯丙醇脂肪酸酯含量的测定 气相色谱-质谱法;———修改了方法的适用范围和技术参数。1学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1食品安全国家标准食品中氯丙醇及其脂肪酸酯、缩水甘油酯的测定1

范围本标准第一篇规定了食品中氯丙醇的测定。本标准第二篇规定了食品中氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油酯的测定。2 32 3 2 13 13 3 23第一篇适用于含酸水解植物蛋白的调味品、肉及肉制品、婴幼儿配方食2 32 3 2 13 13 3 23MCPD)、-氯-1,-丙二醇(-MCPD)、,-二氯-2-丙醇(,-DCP)和2,-二氯-1-丙醇(,-DCP)含量的测定

。2 3 2 3 22第二篇第一法和第二法适用于油脂及其制品、婴幼儿配方食品、乳及乳制品、水产2 3 2 3 22及肉制品、膨化食品、焙烤食品和油炸食品中3-氯-1,-丙二醇酯(-MCPDE)、-氯-1,-丙二醇酯(-MCPDE)和缩水甘油酯(GE)含量的测定,第三法适用于油脂及其制品中3-MCPDE、-MCPDE和

GE含量的测定。第一篇 食品中氯丙醇含量的测定 同位素稀释-气相色谱-质谱法2

原理试样中加入同位素内标,以氯化钠溶液提取,采用硅藻土小柱净化,经正己烷淋洗后,用乙酸乙酯洗脱氯丙醇,经七氟丁酰基咪唑衍生,以气相色谱-质谱仪测定,内标法定量。3

试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为

GB/T6682规定的一级水。13. 试剂1 C1112 6133.. 乙酸乙酯(4H8 C1112 6133.. 正己烷(C

H14):色谱纯。3.. 氯化钠(NaCl)。 2 1143.. 无水硫酸钠(NaSO4):20℃烘烤4h后储存于干燥器 2 114 7 7 C1523.. 七氟丁酰基咪唑(C

H3FN2O,AS号32477-35-3):纯度≥97%。使用后注意 7 7 C1523. 试剂配制2氯化钠溶液(00g/L):称取氯化钠200g,溶于水并稀释至1L。233. 标准品3 2 33313..

3-氯-1,-丙二醇(-MCPD)(C

H7ClO2,CAS号96-24-2):纯度≥98%,或经国家认证 2 33311学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1准物质证书的标准物质。 5 2 5 C32 3 32 C333..

D-3-氯-1,-丙二醇(D-3-MCPD)( 5 2 5 C32 3 32 C333..

2-氯-1,-丙二醇(-MCPD)(C

H7ClO2,AS号497-04-1):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5 3 5 C34 3 3 213 C353..

D-2-氯-1,-丙二 5 3 5 C34 3 3 213 C353..

1,-二氯-2-丙醇(,-DCP)(C

H6ClO,AS号96-23-1):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5 3 5 3 23 C36 3 3 223 C373.. 5 3 5 3 23 C36 3 3 223 C373..

2,-二氯-1-丙醇(,-DCP)(C

H6ClO,AS号616-23-9):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质

。 5 3 5 3 23 C3843..

D-2,-二氯-1-丙醇(D-2, 5 3 5 3 23 C3843. 标准溶液配制413.. 氯丙醇标准溶41 (4113... 氯丙醇标准储备液

1000μg/mL):称取氯丙醇标准品各10.mg(精确至0.1mg), (411酸乙酯溶解,转移至10mL容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,混匀。转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下保存,保存期为12个月。 1 (4123... 氯丙醇混合标准中间液(0.μg/mL):准确移取适量氯丙醇标准储备 1 (412己烷稀释至浓度为10.μg/mL,摇匀后转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下保存,保存期为6个月。 10 1 004133... 氯丙醇混合标准工作液(.0μg/mL):准确移取氯丙醇混合标准 10 1 00413加入正己烷稀释至10mL,混匀。临用现配。423.. 氯丙醇内标溶42 (4213... 内标储备液

1000μg/mL):称取氯丙醇同位素内标各10.mg(精确至0.1mg),分 (421乙酯溶解,转移至10mL容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,混匀。转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下保存,保存期为12个月。 1 (4223... 氯丙醇混合内标工作液(0.μg/mL):准确移取适量氯丙醇内标储备 1 (422己烷稀释至浓度为10.μg/mL,混匀后转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃以下保存,保存期为6个月。433.. 标准系列溶43(1. 1 5 1 2 4152 4 8分别准确移取氯丙醇混合(1. 1 5 1 2 4152 4 8800μL、1600μL于密封性良好的具塞(盖)玻璃管中,分别加入氯丙醇混合内标工作液(0.μg/mL)20μL,再分别移取相应体积的正己烷补充至2mL,混匀,配制成含氯丙醇质量分别为10.ng、0.ng、100ng、00ng、00ng、00ng、1600ng的系列标准工作液,其中氯丙醇内标的质量均为200ng。临用现配。53. 材料551 :0 552533.. 硅藻土小柱:填料质量为5g,或性能相当51 :0 552533.. 气密针

1.mL或0.mL,最小刻度不大于0.5mL。3.. 定量滤纸:直径11cm。2学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载14

仪器和设备 E12344. 气相色谱-质谱仪:带电子轰击离子源 E12344. 电子天平:感量分别为0.1g和0.14. 超声波振荡器。4. 氮吹仪。564. 恒温干燥箱。564. 涡旋振荡器。74. 冷冻离心机:最大转速不低于5000r/min。75

分析步骤15. 试样制备1液态样品称取前摇匀;对于半固态样品和固态样品,取可食部分均质。制备后的试样于4℃下冷藏保存。25. 试样提取2215.. 液态试21称取试样4g(精确至0.1g)于15mL离心管中(对于液态婴幼儿配方食品等低盐试样,称样后加1 2入1g氯化钠),准确加入内标工作液(0.μg/mL)0μL,超声混匀5min,待净1 2225.. 婴幼儿配方食品(粉状221 2称取试样4g(精确到0.1g)于50mL离心管中,准确加入内标工作液(0.μg/mL)0μL,加1 28mL200g/L氯化钠溶液,涡旋,超声10min,于4℃下以5000r/min的转速离心10min,取出提取液,再加入8mL200g/L氯化钠溶液重复提取操作1次,合并提取液,取8mL待净化。235.. 其他半固态及固态试样(不包括婴幼儿配方食品231 2称取试样4g(精确到0.1g)于15mL离心管中,准确加入内标工作液(0.μg/mL)0μL,加1 24mL200g/L氯化钠溶液,涡旋,超声10min,以5000r/min的转速离心10min,移取上清液,再加入4mL200g/L氯化钠溶液重复提取1次,合并上清液,待净化。35. 试样净化35 0将待净化液转移至硅藻土小柱中,放置10min。用10mL正己烷淋洗,弃去淋洗液,然后5 0乙酸乙酯洗脱,收集洗脱液。在洗脱液中加入5g无水硫酸钠,不断振摇脱水,放置不少于30min后过滤,转移滤液至密封性良好的具塞(盖)玻璃管中,于40℃下氮吹浓缩至约0.

mL,加入2.

mL正己烷,涡旋,待衍生化。45. 衍生化43于标准系列溶液和试样净化液中用气密针快速加入0.5mL七氟丁酰基咪唑,立即密封,涡旋,放3入烘箱中,于70℃下保温20min。衍生结束后,取出冷却至室温,加入2mL200g/L氯化钠溶液,涡旋,静置,使水相和正己烷分层,且水相澄清。取上层正己烷,加入约0.g无水硫酸钠吸水干燥,将溶3离子相对丰度>50%>20%~50%>10%~20%≤10%最大允许偏差±10%±15%±20%±50%表1表1

监测离子相对丰度的最大允许偏差4学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1液转移至进样瓶中,供上机测定。55. 空白试验52 4称取与试样相同质量的200g/L氯化钠溶液,其余步骤按5.~5.与试样同时处2 46615. 仪器参考条6615.. 气相色谱条件气相色谱条件如下:a)

色谱柱:含5%苯基亚芳基聚合物或5%苯基-甲基聚硅氧烷的弱极性毛细管柱(柱长30m,内2 2径0.5mm,膜厚0.5μm),或性能相当2 22b)

载气:氦气,纯度≥99.99%,流速为1mL/min。2c)

进样口温度:50℃。1d)

进样体积:

μL,不分流进样。15e)

程序升温:0℃保持1min,以2℃/min升温至90℃,再以40℃/min升温至270℃,并保持55min。625.. 质谱条62质谱条件如下:E7a)

电离源:电子轰击离子源(I)。E7b)

电离能量:0eV。225c)

离子源温度:50℃。225d)

传输线温度:80℃。e)

溶剂延迟时间:

min。S1f)

扫描方式:选择离子监测模式(IM)。S1g)

监测离子:见附录

A中表

A.。75. 测定7在给定分析条件下,将衍生后的空白溶液、标准系列溶液和试样溶液注入气相色谱-质谱仪中,进行定性分析和定量测定。715.. 定性分7151 1 2在相同测定条件下,试液与标准工作液中待测物的保留时间偏差在±0.%以内,且在扣除背51 1 2的试样质谱图中,其中至少3个监测离子均出现且信噪比≥3,而且其相对丰度与浓度相当的标准溶液中监测离子的相对丰度的偏差应符合表1的要求,则可判断试样中存在对应的被测物。标准溶液中氯丙醇及同位素内标衍生物的监测离子、色谱图和质谱图分别见附录

A中表

A.、图

A.和图

A.。学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

m ×1000×1000 学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

m ×1000×1000 …………(1)1725.. 定量测727215... 标准曲线的721以标准系列溶液中氯丙醇和其对应内标的质量比为横坐标,以测定的氯丙醇和其对应内标的峰面积比为纵坐标,绘制标准曲线。7225... 试样溶液的722测得试样溶液中氯丙醇和对应内标的峰面积,并由其比值通过标准曲线查得氯丙醇与对应内标的质量比,从而计算得到待测液中氯丙醇的质量。待测液中氯丙醇和对应内标的峰面积比值应在标准曲线的线性范围内;若超过标准曲线的线性范围,应适当减少取样量再重新测定。6

分析结果的表述1试样中氯丙醇的含量按公式()计算:1X=

K

×Nis×1000式中:3 2 13 23X ———试样中氯丙醇(-MCPD、-MCPD、,-DCP、,-DCP)的含量,单位为3 2 13 23(mg/kg);nK ———由标准曲线查得氯丙醇与对应内标的质量比;nNis ———试样中加入的内标的质量,单位为纳克(g);1000

———换算系数;gm ———试样称取的质量,单位为克()。g计算结果应扣除空白值,结果保留3位有效数字。7

精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果绝对差值不得超过算术平均值的20%。8

其他2 13 30. 0.婴幼儿配方食品(粉状)中3-MCPD、-MCPD、,-DCP和2,-DCP的检出限2 13 30. 0.量限均为

0.25

mg/kg;其他基质中

3-MCPD、2-MCPD、1,3-DCP

和

2,3-DCP

的

检

出

限

分

别

为0.02mg/kg、0.02mg/kg、005mg/kg、0.005mg/kg,定量限分别为0.05mg/kg、

005mg/kg、0.1mg/kg、0.1mg/kg。第二篇 食品中氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油酯的测定第一法 同位素稀释-碱水解-气相色谱-串联质谱法9

原理在提取的脂肪或油脂试样中,加入同位素内标,用氢氧化钠-甲醇水解,使氯丙醇脂肪酸酯、缩水甘5学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载12 3油酯(GE)分别转化为氯丙醇和缩水甘油,加入酸化溴化钠终止水解,水解生成的缩水甘油转化为3-2 31,-丙二醇(-MBPD),溶液经异辛烷萃取后,水相用苯基硼酸衍生,以气相色谱-串联质谱仪检测,内标法定量。2 3 2 3在碱水解过程中,少部分

3-氯-1,-丙二醇脂肪酸酯(-MCPDE)的水解产物3-氯-1,-丙2 3 2 3MCPD)可转化为缩水甘油,溴化后生成与缩水甘油酯处理后的同一产物3-MBPD。因此,在计算试样中

GE含量时,需要扣除由3-MCPDE水解转化的含量。10

试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为

GB/T6682规定的一级水。110. 试剂11110.. 甲醇(CH311 C121314 710.. 异辛烷(8 C121314 710.. 丙酮(CH3COCH3)。10.. 甲苯(C

H8):色谱纯。15 51610.. 甲基叔丁基醚(C15 51610.. 硫酸(H2SO4):含量≥95%。 C17 5181910.. 苯基硼酸(6H7 C17 5181910.. 溴化钠(NaBr):纯度≥99.%。10.. 氢氧化钠(NaOH)。11 210..0

无水硫酸钠(Na11 21111 211 410..1

氨水(NH3·H2O):1111 211 410..2

乙醇(C

H5OH):含量≥95%。10..3

乙醚(C

H10O)。11 C11210..4

石油醚:沸程为3011 C11210..5

乙二醇(2H6O2)。10. 试剂配制2110..

25%硫酸溶液:量取25mL硫酸缓缓倒入75mL水中,并不断搅拌,冷却至室温后转移至21容量瓶中,加水定容至刻度,混匀。 622510.. 酸化溴化钠溶液(00g/L):称取60g溴化钠,加水溶解,转移至100mL

容量瓶中, 62253.mL25%硫酸溶液,用水定容至刻度,混匀。 (35 52310.. 氢氧化钠-甲醇溶液

0.

mol/L):称取3.g氢氧化钠,加入甲醇溶解,转移至 (35 523中,用甲醇定容至刻度,混匀,转移至塑料瓶中,于10℃下保存不少于2h,备用。24 (25 12610.. 乙醚-石油醚溶液

1+1):量取乙醚和石油醚24 (25 12610..

1%乙二醇溶液:移取100μL乙二醇,加水定容至10mL,混匀。10.. 丙酮-水溶液(9+1):量取95mL丙酮,加入5mL水,混匀。 12710.. 苯基硼酸溶液:称取12g苯基硼酸,加入100mL丙酮-水溶液(9+1),充分振摇;若出 127不完全,可取上清液用于衍生。室温下保质期3个月。310. 标准品3 C3110..

3-氯-1,2-丙二醇棕榈酸二酯(C35H67ClO4,AS号51930-97-3):纯度≥98%,或经国家认 C316学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载分别以

C3-3-MCPD、D学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载分别以

C3-3-MCPD、D5-2-MCPD、D5-缩水甘油计。转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下1授予标准物质证书的标准物质。32 3 3 3 C3310..

13C-3-氯-1,2-丙二醇棕榈酸二酯(C3213C

H67ClO432 3 3 3 C3310..

2-氯-1,3-丙二醇硬脂酸二酯(C39H75ClO4,AS号26787-56-4):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。34 5 510..

D-2-氯-1,3-丙二醇硬脂酸二酯(C39H70D5ClO4,CAS号1329796-49-7,缩34 5 5纯度≥98%。 C C3510.. 缩水甘油棕榈酸酯(19H36O3,AS号7501-44-2):纯度≥98%,或经国家认证并授 C C35证书的标准物质。 5 C 53610..

D-缩水甘油棕榈酸酯(C19H31D5O3,AS号1794941-80-2,缩写 5 C 5361以上标准品的其他信息见附录B中表B.。144110. 标准溶液配44110.. 标准溶液 54112110... 氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油酯标准储备液(0.μg/mL):分别称取适量3-氯-1,2- 541121榈酸二酯、-氯-1,3-丙二醇硬脂酸二酯、缩水甘油棕榈酸酯(精确至0.1mg)于3支25mL容量瓶中,加入甲苯溶解,定容至刻度,混匀,配制成浓度为

50.

μg/mL

的标准储备液,分别以

3-MCPD、2-MCPD、缩水甘油计,折算系数见附录B中表B.。转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下保存,保存期12个月。 ( 0412510... 氯丙醇脂肪酸酯混合标准工作液

4.00μg/mL):准确移取2.0mL

氯丙醇脂肪酸酯 ( 04125备液(0.μg/mL)于25mL容量瓶中,用甲苯定容至刻度,混匀。转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下保存,保存期3个月。 40. 0 541310... 缩水甘油酯标准工作液( 40. 0 541325mL容量瓶中,用甲苯定容至刻度,混匀。转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下保存,保存期3个月。4210.. 同位素内标溶42421 13 3 51510... 内标储备液(0.μg/mL):准确称取适量(精确至421 13 3 515D-GE标准品于3支25mL容量瓶中,加入甲苯溶解,定容至刻度,混匀,溶液的浓度为10.μg/mL,13保存,保存期12个月。 (2. 0 142210... 内标工作液00μg/mL):准确移取2.0mL内标储备液(0.μg/mL) (2. 0 1422加入甲苯定容至10.mL,混匀。转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下保存,保存期3个月。4310.. 氯丙醇脂肪酸酯标准系列溶43(1 5 1. 2. 4.( 0 1 5 1准确移取适量氯丙醇脂肪酸酯标准工作液

4.00μg/mL),经甲(1 5 1. 2. 4.( 0 1 5 10.00μg/mL、0.00μg/mL、00μg/mL、00μg/mL、00μg/mL,混匀;准确移取100μL标准系列溶液和100μL内标工作液

2.00μg/mL),混匀,得到质量分别为5.0ng、0.0ng、0.0ng、00ng、3 5200ng、400ng的系列标准液,然后按照12.~12.步骤操作。临用现3 54410.. 缩水甘油酯标准系列溶44(

001 5 1. 2.准确移取适量缩水甘油酯标准工作液

4.

μg/mL),经甲苯稀释至浓(

001 5 1. 2.0.00μg/mL、0.00μg/mL、00μg/mL、00μg/mL、4.00μg/mL;各准确移取100μL标准系列溶7学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1(2. 0 1 5 1 2 43 5液和100μL内标工作液 00μg/mL),(2. 0 1 5 1 2 43 5系列标准液,然后按照12.~12.步骤操作。临用现配。510. 材料5玻璃纤维滤筒或定量滤纸(直径11cm)。11

仪器和设备111. 气相色谱-串联质谱仪。1P注:使用色谱柱反吹功能或程序升温进样口(TV)可减少试液对仪器造成的污染。P211. 电子天平:感量分别为0.1mg和1234511. 低温水浴恒温箱或冷却水循环装置:控温精度为±1℃。34511. 恒温水浴振荡器:控温精度为±5℃。11. 涡旋振荡器。6711. 超声波振荡器。6711. 旋转蒸发仪。89111. 离心机:最大转速不低于5000r/min。89111. 恒温干燥箱。11.0

氮吹仪。12

分析步骤112. 试样制备1液态样品称取前应摇匀;对于常温下为固体或半固体的棕榈油或动物油脂及其制品等,取样前于260℃左右加热熔化,摇匀;取可食部分均质。制备后的试样于4℃冷藏保存。212. 试样提取2112.. 植物油脂、动物油211 ( 1称取试样0.g(精确至1mg)于15mL离心管中,准确加入内标工作液

1 ( 1匀,供水解。1 5注:自加入内标开始的步骤(2.~12.),也可采用经验证符合要求的自动化前处理仪器操1 52212.. 鱼油粉等油脂制226对于鱼油粉等油脂制品,参照

GB5009.

第三法(碱水解法)提取脂肪后,计算脂肪含量,再按照6112..

步骤操作。12312.. 婴幼儿配方食235 0(2. 1称取粉状试样0.g(精确至1mg)或液态试样3.g(精确至0.1g)于50mL离心管中5 0(2. 1内标工作液 00μg/mL)00μL;加入2mL65℃的热水,涡旋混匀,再加入1mL氨水,涡旋,在65℃水浴下振荡30min后,冷却至室温。加入3mL乙醇,涡旋后加入5mL乙醚,振摇5min,然后加入5mL石油醚,继续振摇5min。静置待溶液分层后,转移上层溶液至离心管中;于下层水相中再加入乙醚和石油醚各5mL,重复萃取1次,合并有机相于40℃下氮吹至干,供水解。2412.. 其他食240 0称取试样3.g~5.g(精确至0.1g)于玻璃纤维滤筒中,扎好口,然后置于250mL三角烧瓶0 08学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载101加入25mL石油醚后盖塞,以120r/min速度振荡2h~3h,将提取液转移,再次加入25mL石油醚提01取2h,合并两次提取液,减压浓缩至1.mL。将溶液转移至10mL试管中,用6mL石油醚分两次淋洗鸡心瓶内壁,将淋洗液全部转移至玻璃试管中,于55℃下水浴加热,之后在100℃干燥箱中再加热约1h,冷却至室温称重,计算脂肪含量。准确称取脂肪0.g(精确至1mg)于15mL离心管中,准确加入(2. 1内标工作液 00μg/mL)00μL,混匀,供(2. 136 1注:试样中脂肪含量低于10%时,应适当增加称样量,并增加石油醚的用量,使得到的脂肪不少于0.g。必要36 1应根据产品配方特点,采用

GB5009.中第三法(碱水解法)的步骤进行脂肪的提取,再称取脂肪按照12..的步骤操作。312. 水解336于标准系列溶液、上述试样溶液中加入100μL甲苯和200μL甲基叔丁基醚,混匀后于10℃下冷36却6min,加入10℃下预先冷却2h的0.5mol/L氢氧化钠-甲醇溶液200μL,立即涡旋,然后于10℃下放置7min,进行酯键断裂反应,结束后加入600μL酸化溴化钠溶液(00g/L),涡旋,终止水解反应,溶液待净化。412. 液-液萃取净化4在上述水解后的溶液中加入600μL异辛烷,涡旋,进行液-液萃取,静置分层后弃去异辛烷层,必要时可离心使溶液分层彻底,再次加入600μL异辛烷,重复净化步骤,弃去异辛烷层,下层水相供衍生用。注:若出现凝固现象,可加热溶解,必要时振荡,至试液充分均匀。512. 衍生化5于净化后的水溶液中加入100μL苯基硼酸溶液,涡旋后,加入100μL1%乙二醇溶液和1mL异辛烷,涡旋,静置分层,必要时可离心使分层彻底;取上层溶液经无水硫酸钠脱水后,将溶液转移至进样瓶中,供气相色谱-串联质谱仪检测。612. 空白对照6除不加试样外,采用与试样操作完全相同的步骤进行,测定结果应低于检出限。77112. 仪器参考条77112.. 气相色谱条件气相色谱条件如下:: 2 2a)

色谱柱

5%苯基-甲基聚硅氧烷毛细管色谱柱(柱长30m,内径0.5mm,膜厚: 2 2能相当者。注:若使用柱中反吹功能,可将柱长约15m

的2根毛细管色谱柱连接后使用。配柱后反吹功能时,使用柱长为5 130m

的分离柱和毛细管空柱(

m×0.8m)各15 151 5b)

载气:高纯氦气,纯度≥99.99%,流速为1.51 5c)

进样量:

μL,不分流进样,溶剂延迟时间:

min。8d)

进样口升温程序:0℃保持0min,以300℃/min速率升至165℃,保持10min,再以300℃/min8速率升至320℃,保持8min。7e)

柱温程序升温:0℃保持2min,以20℃/min速率升温至200℃,再以40℃/min速率升温7至300℃,保持4min。注:若未配置程序升温进样口,进样口温度为250℃。若使用柱中反吹,在最后一个目标物出峰1min之后开始反吹。7212.. 质谱条72质谱条件如下:9离子相对丰度>50%>20%~50%>10%~20%≤10%最大允许偏差±20%±25%±30%±50%ｘｗ．ｃｏｍ标准学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆ下载1GB5009.91—2024ｘｗ．ｃｏｍ标准学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆ下载1E7a)

电离源:电子轰击离子源(I)。E7b)

电离能量:0eV。23c)

离子源温度:50℃。23d)

传输线温度:00℃。2e)

扫描模式:多反应监测(MRM)。2f)

质谱采集分辨率:单位分辨率。其他质谱参数见附录B中表B.。812. 测定8在给定分析条件下,将制备后的空白溶液、标准系列溶液和试样溶液注入气相色谱-串联质谱仪中,进行定性分析和定量测定。8112.. 定性分8121在相同测定条件下,试液与相应标准溶液中被测物的保留时间偏差不超过±0.5%,并且在扣除背21景后的试样质谱图中,所有监测离子均出现且信噪比≥3,而且定性离子的相对丰度与浓度相当标准溶液中定性离子的相对丰度的偏差应符合表2的规定,则可判断试样中存在对应的被测物。在上述气相色谱-串联质谱条件下,氯丙醇和3-MBPD及其内标衍生物的监测离子、色谱图分别见附录B中表B.和图B.。表2

监测离子相对丰度的最大允许偏差8212.. 表2

监测离子相对丰度的最大允许偏差8282112... 标准曲线的8213 2测得氯丙醇、-MBPD

及同位素内标的峰面积,以氯丙醇脂肪酸酯的质量(以3 2计)为横坐标,以氯丙醇与相应内标的峰面积比为纵坐标,绘制氯丙醇脂肪酸酯的标准曲线。同理,以GE的质量(以缩水甘油计)为横坐标,以

GE水解溴化后的产物3-MBPD与相应内标的峰面积比为纵822坐标,绘制

GE的标准曲82212... 试样溶液的测定33测得氯丙醇、-MBPD和同位素内标的峰面积并计算其比值。根据氯丙醇脂肪酸酯的标准曲33线,分别计算得到氯丙醇脂肪酸酯的质量。试液中氯丙醇、-MBPD与内标的峰面积比值应在标准曲线的线性范围内;若质量超过标准曲线的线性范围,应将试样(提取的脂肪、油脂)用甲苯稀释或调整内标的添加量后重新测定,并使得衍生后试样溶液中内标与标准曲线中内标的质量浓度相同。13

分析结果的表述113. 试样中氯丙醇脂肪酸酯含量的计算111213.. 植物油脂、动物油脂、婴幼儿配方食品和脂112试样或脂肪中氯丙醇脂肪酸酯的含量按公式()计算:10．ｂｚｆｘｗ．ｃ学兔兔ｗｗｗｏｍ标准下载

m ×1000

1000 …．ｂｚｆｘｗ．ｃ学兔兔ｗｗｗｏｍ标准下载

m ×1000

1000 …………(2)

m …………(3)

m ×1000

1000 …………(4)

A IS2×a

+b

×AIS1 …………(5)1C=

M1式中:2 2C ———试样或脂肪中3-MCPDE、-MCPDE的含量(以3-MCPD、-MCPD计),单位为微克2 2μ千克(g/kg);μ2 ngM1 ———由氯丙醇脂肪酸酯标准曲线计算的3-MCPDE、-MCPDE的质量,单位为纳克2 ngm ———试样或脂肪的称取量,单位为克();1000

———换算系数。计算结果应扣除空白值,保留3位有效数字。1213.. 鱼油粉等油脂制品和其他食123鱼油粉等油脂制品和其他食品中氯丙醇脂肪酸酯的含量按公式()计算:3X

=C×

F式中:2 2 μ2 2 μggX

———试样中3-MCPDE、-MCPDE的含量(以3-MCPD、-MCPD计),单位2 2 μ2 2 μggC

———按公式()计算得到的脂肪中3-MCPDE、-MCPDE的含量,单位为微克每千克(g/kg);F

———试样中提取得到的脂肪质量,单位为克();m

———试样的称取质量,单位为克();2计算结果应保留3位有效数字。213. 试样中GE含量的计算21211413.. 植物油脂、动物油脂、婴幼儿配方食品21211413...

GE总量的计算GE的总量按公式()计算:G

=

M1式中:μngG ———试样或脂肪中

GE的总量(以缩水甘油计),单位为微克每千克(g/kg);μngM1 ———由

GE标准曲线计算得到

GE(以缩水甘油计)的质量,单位为纳克(g);m ———试样或脂肪的称取量,单位为克();换算系数。计算结果应扣除空白值,保留3位有效数字。212

3 313... -MCPDE转化而成

-MBPD212

3 33 33 5在氯丙醇脂肪酸酯标准系列中,以3-MCPDE

与13C-3-MCPDE

的峰面积比为横坐3 33 5与13C-3-MBPD的峰面积比为纵坐标,进行一元线性回归,得到线性方程。按公式()计算3-MCPDE转化得到3-MBPD的峰面积A1。A1=

A2式中:A1

———试样中由3-MCPDE转化而成3-MBPD的峰面积;11ｚｆｘｗ．ｃ学兔兔ｗｗｗ．ｂｏｍ标准下载

m ×1000

1000 ……ｚｆｘｗ．ｃ学兔兔ｗｗｗ．ｂｏｍ标准下载

m ×1000

1000 …………(6)

m …………(7)1A2

———试样中3-MCPDE的峰面积;3AIS2

———试样中内标13C-3-MCPDE的峰面积;3a ———回归方程的斜率;b ———回归方程的截距;3 3AIS1

———试样中由内标13C-3-MCPDE转化而成13C-3-MBPD的峰面3 321313... 试样或脂肪中GE含量的2135 56根据

GE的标准曲线,由试样峰面积比值计算得到

GE的总量;并由公式()中A1

和

5 56的峰面积比值计算3-MCPDE转化得到3-MBPD

(以缩水甘油计)的质量,即

M

。按公式()扣除3-MCPDE转化得到3-MBPD

(以缩水甘油计)的量,得到试样中

GE的含量。G1=G

-

M

转化式中:μμG1 ———试样或脂肪中

GE的含量(以缩水甘油计),单位为微克每千克(g/kg);μμG ———GE的总量(以缩水甘油计),单位为微克每千克(g/kg);M

———通过

GE的标准曲线计算3-MCPDE转化得到3-MBPD(以缩水甘油计)的质量,单位为n纳克(g);ngm ———试样或脂肪的称取量,单位为克();g换算系数。计算结果应扣除空白值,保留3位有效数字。2213.. 鱼油粉等油脂制品和其他食227鱼油粉等油脂制品和其他食品中

GE的含量按公式()计算:7G2=G1×

F式中:μ6 μggG2———试样中

GE的含量(以缩水甘油计),单位为微克每千克μ6 μggG1———按公式()计算得到的脂肪中

GE的含量,单位为微克每千克(g/kg);F

———试样中提取得到的脂肪质量,单位为克();m

———试样的称取量,单位为克();计算结果应保留3位有效数字。14

精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算数平均值的15%。15

其他1 3 25 3 20 0 3 20 0当植物油脂、动物油脂的称取量为0.g,-MCPDE、-MCPDE和

1 3 25 3 20 0 3 20 0限为100μg/kg。当婴幼儿配方食品(固体)的称取量为0.g,-MCPDE、-MCPDE和

GE的检出限为6.μg/kg,定量限为10μg/kg;对于液体试样,称取量为3.g,-MCPDE、-MCPDE和GE的检出限为1.μg/kg,定量限为2.μg/kg。22对于鱼油粉等油脂制品和其他食品中3-MCPDE、-MCPDE和GE的检出限和定量限,根据植物油22脂、动物油脂中3-MCPDE、-MCPDE和GE的检出限和定量限,结合试样中测定的脂肪含量折算得到。12学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1第二法 同位素稀释-酸水解-气相色谱-串联质谱法16

原理2 3 3在油脂试样或提取的脂肪中,加入同位素内标,经氨基固相柱净化后,缩水甘油酯(GE)在2 3 3下与溴化钠反应转化为3-溴-1,-丙二醇脂肪酸酯(-MBPDE)。试液经中和后,-MBPDE及氯丙醇脂肪酸酯经硫酸-甲醇水解后,以固相萃取柱净化后,经七氟丁酰基咪唑衍生,用气相色谱-串联质谱仪检测,内标法定量。17

试剂和材料除另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为

GB/T6682规定的一级水。117. 试剂111121317.. 硫酸(H2SO4):含11121317.. 溴化钠(NaBr):纯度≥99%。17.. 碳酸氢钠(NaHCO3)。 C1415 ( 217.. 四氢呋喃( C1415 ( 217.. 二氯甲烷

CH2Cl):色谱纯。16 7 7 C1718 417..

七氟丁酰基咪唑(C

H3FN2O,AS号32477-35-3):含量≥97%,使16 7 7 C1718 417.. 甲醇(CH3OH):色谱纯。17.. 乙醚(C

H10O)。1911 2 C11 C1117.. 氨水(NH31911 2 C11 C1117..0

乙醇(C

H5OH):含量≥95%。17..1

正己烷(6H14):色谱纯。17..2

异辛烷(8H18):色谱纯。 C1111 21117..3

乙酸乙酯(4H8 C1111 21117..4

无水硫酸钠(NaSO4)。17..5

无水硫酸镁(MgSO4)。217. 试剂配制2 7 0 021017..

0.0%

酸化溴化钠溶液:称取1.g溴化钠,加入10mL水溶解,混匀;从中取 7 0 02101.mL硫酸和12mL水,混匀,有效期1个月。 8 82217..

1.%硫酸-甲醇溶液:移取1.0mL硫酸于烧杯中,加入甲醇混合,并不断搅拌,定容 8 822混匀

,有效期1个月。 6 623 6 624 12517..

9.%

碳酸氢钠溶液:称取9.g碳酸氢钠,加水溶解,定 6 623 6 624 12517..

0.0%

碳酸氢钠溶液:称取0.0g碳酸氢钠,加水溶解,定容至100mL,混匀,临用现配。17.. 乙醚-石油醚溶液(

+1):量取乙醚和石油醚各100mL,混匀。26 827 22817..

正己烷-乙酸乙酯(5+15):量取正己烷85mL和乙酸乙26 827 22817.. 脱水剂:称取无水硫酸钠和无水硫酸镁各5g,混合后使用,或使用商品脱水剂。17.. 氯化钠溶液(00g/L):称取氯化钠200g,溶于水并稀释至1L。317. 标准品3 C3117..

3-氯-1,2-丙二醇棕榈酸二酯(C35H67ClO4,AS号51930-97-3):纯度≥98%,或经国家认 C3113学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1授予标准物质证书的标准物质。 5 2 5C C3217..

D-3-氯-1,-丙二醇棕榈酸二酯(35H62D5ClO4, 5 2 5C C32度≥98%。3317..

2-氯-1,3-丙二醇硬脂酸二酯(C39H75ClO4),CAS号26787-56-4):纯度≥98%,或经国家认33并授予标准物质证书的标准物质。34 5 517..

D-2-氯-1,3-丙二醇硬脂酸二酯(C39H70D5ClO4,CAS号1329796-49-7,缩34 5 5纯度≥98%。 C C3517.. 缩水甘油棕榈酸酯(19H36O3,AS号7501-44-2):纯度≥98%,或经国家认证并授 C C35证书的标准物质。 5 C 53617..

D-缩水甘油棕榈酸酯(C19H31D5O3,AS号1794941-80-2,缩写 5 C 5361以上标准品的其他信息见附录B中表B.。144117. 标准溶液配44117.. 标准溶液 5 341122117... 氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油酯标准储备液(0.μg/mL):准确称取适量(精确 5 3411221氯-1,2-丙二醇棕榈酸二酯、-氯-1,3-丙二醇硬脂酸二酯、缩水甘油棕榈酸酯标准品,分别于3支25mL容量瓶中,加入异辛烷溶解,定容至刻度,混匀,溶液浓度为50.μg/mL,分别以3-MCPD、-MCPD和缩水甘油计,折算系数见附录B中表B.。转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下保存,保存期12个月。 40 0 541217... 混合标准工作液(.0μg/mL):准确移取2.0mL标准储备液(0. 40 0 5412中,用异辛烷定容至刻度,混匀。转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下保存,保存期3个月。4217.. 同位素内标溶42 1 5 5 54211 (1. 0 142217... 内标储备液( 1 5 5 54211 (1. 0 1422GE于3支25mL容量瓶中,加入异辛烷溶解,定容至刻度,混匀,经折算后内标浓度为10.μg/mL(折算系数见附录B中表B.)。转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下保存,保存期12个月。17... 混合内标工作液00μg/mL):准确移取1.0mL内标储备液(0.μg/mL)于10mL容量瓶中,用异辛烷定容至刻度,混匀。转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20

℃下保存,保存期3个月。4317.. 标准系列工作溶43(4.5 2. 4.(1. 0 1 5 1 2 43 6准确移取适量标准工作液 00μg/mL),经异(4.5 2. 4.(1. 0 1 5 1 2 43 60.00μg/mL、1.0μg/mL、00μg/mL、00μg/mL,混匀;准确移取100μL标准系列溶液和100μL内标工作液 00μg/mL),混匀,分别得到质量为5.0ng、0.ng、0.ng、00ng、00ng、00ng的系列标准液,然后按照19.~19.步骤操作。临用现配。517. 材料5 55117.. 硅藻土小柱: 551 5 852 :0 5535417.. 氨基固相萃取柱:00mg/6mL,临用前,用2mL 5 852 :0 5535417.. 气密针

1.mL或0.mL,最小刻度不大于0.5mL。17..

定量滤纸:直径11cm。5517.. 玻璃纤维滤筒或定量滤纸(直径5514学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载118

仪器和设备118. 气相色谱-串联质谱仪。12318. 电子天平:感量分别为0.1mg和12318.

恒温干燥箱。4518. 恒温水浴振荡器:控温精度为±5℃。4518. 涡旋振荡器。67818. 超声波振荡器。67818. 旋转蒸发仪。18. 氮吹仪。918. 离心机:最大转速不低于5000r/min。919

分析步骤119. 试样制备1同12.。219. 脂肪提取22119.. 植物油脂、动物油211 1 1

422称取试样0.g(精确至0.mg)于15mL离心管中,准确加入100μL内标工作1 1 1

4220 8 1

25入1.mL正己烷-乙酸乙酯(5+15)溶解,混匀,0 8 1

252219.. 鱼油粉等油脂制226对于鱼油粉等油脂制品,参照

GB5009.

第三法(碱水解法)提取脂肪后,计算脂肪含量,再按照62119..

步骤操作212319.. 婴幼儿配方食235 0称取粉状试样0.g(精确至1mg)或液态试样3.g(精确至0.1g)于50mL离心管中,准确5 01

422 3 1

25100μL内标工作液(7...),其余步骤1

422 3 1

252419.. 其他食244 11

422 0 8 1

25按照12..

步骤操作提取脂肪。称取脂肪0.g(精确至1mg)于15mL4 11

422 0 8 1

25100μL混合内标工作液(7...),再加入1.mL正己烷-乙酸乙酯(5+15)溶解,混匀,待净化(9..)。2519.. 脂肪的净258将上述待净化溶液转移至活化后的氨基固相萃取柱中,加入12mL正己烷-乙酸乙酯(5+15)洗8脱,收集全部流出液及洗脱液,于40℃下氮吹至干,供溴代反应。319. 溴代反应376向标准系列工作溶液和上述净化后的试样中加入2mL四氢呋喃,涡旋后,加入30μL0.0%酸化76溴化钠溶液,涡旋后于50℃下溴代反应15min。结束后加入3mL0.0%碳酸氢钠溶液中和,涡旋。加入3mL正己烷进行液-液萃取,涡旋,静置待溶液分层后,取上层溶液在40

℃下氮吹至近干,加入1mL四氢呋喃复溶,备用。15学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1419. 酸水解485 6 5 1

55于上述复溶溶液中加入1.

mL1.8%硫酸-甲醇溶液,涡旋后于40

℃下水解16h,结85 6 5 1

550.0mL9.%碳酸氢钠溶液中和,涡旋,将溶液在40℃下氮吹至约1.mL,溶液供净化(9.)。19. 试液净化55将上述溶液转移至硅藻土小柱上,静置10min,以25mL正己烷淋洗和35mL二氯甲烷洗脱,用55装有10g脱水剂的三角瓶收集洗脱液,溶液振摇1h~1.h使脱水彻底。将溶液过滤至鸡心瓶中,在40℃下减压浓缩至0.mL左右,将溶液转移至密封性良好的5mL玻璃试管中,用1mL~2mL正己烷分两次淋洗鸡心瓶内壁,将溶液转入试管中,待衍生。619. 衍生化6于标准系列溶液和试样净化液中用气密针快速加入0.5mL七氟丁酰基咪唑,立即密封,涡旋,放入干燥箱中,于70℃下保温20min。衍生结束后,取出冷却至室温,体积不足时补加正己烷至约1mL,加入2mL200g/L氯化钠溶液,涡旋,使水相和正己烷分层,且水相澄清。取上层正己烷相,加入约30.g无水硫酸钠吸水干燥,将溶液转移至进样瓶中,供上机测定。3719. 空白试验7除不加试样外,其余与试样处理步骤相同,测定结果应低于检出限。88119. 仪器参考条88119.. 气相色谱条件气相色谱条件如下:2 282a)

色谱柱:DB-5MS柱(柱长30m,内径0.5mm,膜厚0.5μm),或性能相当2 282b)

载气:高纯氦气,纯度≥99.99%,流速为0.mL/min。c)

进样口温度:80℃。1 0d)

进样体积:

μL,不分流进样,不分流时间为1.1 05e)

程序升温:0℃保持1min,以3℃/min升温至100℃,再以40℃/min升温至300℃,并保5持3min。8219.. 质谱参考条82质谱参考条件如下:7a)

电离源:电子轰击源(EI)。7b)

电离能量:0eV。2251c)

离子源温度:30℃。2251d)

传输线温度:80℃。e)

溶剂延迟时间:

min。f)

四极杆温度:50℃。1g)

扫描方式:多反应监测模式(MRM)。1监测离子及质谱参数见附录C中表C.。919. 测定9在给定分析条件下,将制备好的空白溶液、标准系列溶液和试样溶液注入气相色谱-串联质谱仪中,进行定性分析和定量测定。16离子相对丰度>50%>20%~50%>10%~20%≤10%允许偏差±20%±25%±30%±50%下ｗｗ．ｂｚｆｘｗ兔学兔ｗ．ｃｏｍ标准载

m ×1000

1000 ……下ｗｗ．ｂｚｆｘｗ兔学兔ｗ．ｃｏｍ标准载

m ×1000

1000 …………(8)

m …………(9)19119.. 定性分911 1在相同测定条件下,试液与相应标准溶液中被测物的保留时间偏差不超过±0.5%,并且在扣除1 1景后的试样质谱图中,其中2个监测离子均出现且信噪比≥3,而且其相对丰度与浓度相当的标准溶液中监测离子的相对丰度的偏差应符合表3的规定,则可判断试样中存在该被测物。在上述气相色谱-串联质谱条件下,氯丙醇和3-MBPD及其内标衍生物的监测离子、色谱图分别见附录中表C.和图C.。表3

监测离子相对丰度的最大允许偏差9219.. 表3

监测离子相对丰度的最大允许偏差9292119... 标准曲线的9212 2以3-MCPDE、-MCPDE、GE的质量(分别以3-MCPD、-MCPD、缩水甘油计)为横坐标,以目2 2与相应内标的峰面积比为纵坐标,绘制标准曲线。92219... 试样溶液的9228 1

2 6测得氯丙醇脂肪酸酯的水解产物和同位素内标的峰面积比值,根据标准曲线计8 1

2 6脂肪酸酯和

GE的质量,其峰面积比值应在标准曲线的线性范围内;若质量超过标准曲线线性范围,应将试样(脂肪或油脂)用正己烷-乙酸乙酯(5+15)稀释或调整内标的添加量后重新测定(9.~19.),使得衍生后试样溶液中内标与标准曲线中内标的质量浓度相同。20

分析结果的表述120. 植物油脂、动物油脂、婴幼儿配方食品和脂肪18试样或脂肪中氯丙醇脂肪酸酯的含量按公式()计算:8C=

M1式中:2 2C ———试样或脂肪中3-MCPDE、-MCPDE、GE的含量(分别以3-MCPD、-MCPD、缩水甘2 2μ计),单位为微克每千克(g/kg);μ2 ngM1 ———由标准曲线计算的3-MCPDE、-MCPDE、GE的质量,单位为纳克2 ngm ———试样或脂肪的称取量,单位为克();1000

———换算系数。计算结果应扣除空白值,保留3位有效数字。220. 鱼油粉等油脂制品和其他食品29鱼油粉等油脂制品和其他食品中氯丙醇脂肪酸酯的含量按公式()计算:9X

=C×

F式中:2 2X

———试样中3-MCPDE、-MCPDE、GE的含量(分别以3-MCPD、-MCPD、缩水甘油计),单2 217学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1μ微克每千克(g/kg);μ8C

———按公式

(

)计算得到的脂肪中

3-MCPDE、2-MCPDE、GE

的含量,单位为微克每千克8μ(g/kg);μggF

———试样中提取得到的脂肪质量,单位为克();ggm

———试样的称取量,单位为克();计算结果应保留3位有效数字。21

精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。22

其他1 3 25 3 20 0 3 20 0当植物油脂、动物油脂的称取量为0.g时1 3 25 3 20 0 3 20 0量限为100μg/kg。当婴幼儿配方食品(固体)的称取量为0.g时,-MCPDE、-MCPDE和GE的检出限为6.μg/kg,定量限为10μg/kg;对于液体试样,称取量为3.g,-MCPDE、-MCPDE和

GE的检出限为1.μg/kg,定量限为2.μg/kg。22对于鱼油粉等油脂制品和其他食品中3-MCPDE、-MCPDE和GE的检出限和定量限,根据植物油22脂、动物油脂中3-MCPDE、-MCPDE和GE的检出限和定量限,结合试样中测定的脂肪含量折算得到。第三法 同位素稀释-碱水解-气相色谱-质谱法23

原理B23 B取油脂试样或提取的脂肪两份于

A、

管中,加入同位素内标,用氢氧化钠-甲醇水解,反应液经B23 B化、液-液萃取净化,经乙醚-乙酸乙酯萃取、苯基硼酸衍生后,以气相色谱-质谱仪检测,内标法定量。A管中缩水甘油酯(GE)碱水解为缩水甘油后,其在酸性条件下与氯化钠作用生成3-氯-1,-丙二醇(-MCPD),这与3-MCPDE水解后的产物相同,由

A、

管中3-MCPDE的差值经换算后得到试样中GE的含量。B管用于测定氯丙醇脂肪酸酯的含量。24

试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为

GB/T6682规定的一级水。124. 试剂111 C1213 424.. 甲醇11 C1213 424.. 正己烷(6H14):色谱纯。24.. 乙醚(C

H10O)。 C1415 724.. 乙酸乙酯(4H8O C1415 724.. 甲苯(C

H8):色谱纯。16 51724.. 甲基叔丁基醚(C

H12O):16 51724.. 硫酸(H2SO4):含量≥95%。 C181924.. 苯基硼酸(6H7BO2): C181924.. 溴化钠(NaBr):纯度≥99%。18学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载11124..0

氯化钠111124..1

氢氧化钠1111 224..2

无水硫酸钠(Na11 21111 211 C11224..3

氨水(NH3·H21111 211 C11224..4

乙醇(C

H5OH):含量≥95%。24..5

石油醚:沸程为30℃~60℃。24..6

乙二醇(2H6O2)。24. 试剂配制2124..

25%硫酸溶液:量取25mL硫酸缓缓倒入75mL水中,并不断搅拌,冷却至室温后转移至21容量瓶中,加水定容至刻度,混匀。 2 52224.. 酸化氯化钠溶液(00g/L):称取20g氯化钠,加水溶解后转移至100mL容量瓶中, 2 52225%硫酸溶液,用水定容至刻度,混匀。 6 52324.. 酸化溴化钠溶液(00g/L):称取60g溴化钠,加水溶解后转移至100mL容量瓶中, 6 52325%

硫酸溶液,用水定容至刻度,混匀。 (35 52424.. 氢氧化钠-甲醇溶液

0.

mol/L):称取3.g氢氧化钠,加入甲醇溶解后,定容 (35 524匀。于10℃下保存不低于2h,备用。25 62624.. 苯基硼酸溶液:称取适量苯基硼酸,溶于乙醚,配制成饱和溶液25 62624.. 乙醚-乙酸乙酯溶液(

+4):量取60mL乙醚和40mL乙酸乙酯,混匀。 02724..

1.%乙二醇溶液:移取100μL乙二醇于10mL容量瓶中,加入乙酸乙酯定容至刻度, 027324. 标准品3 C3124..

3-氯-1,2-丙二醇棕榈酸二酯(C35H67ClO4,AS号51930-97-3):纯度≥98%,或经国家认 C31授予标准物质证书的标准物质

。 C3224..

2-氯-1,3-丙二醇硬脂酸二酯(C39H75ClO4,AS号26787-56-4):纯度≥98%,或经国家认 C32授予标准物质证书的标准物质。 C C3324.. 缩水甘油棕榈酸酯(19H36O3,AS号7501-44-2):纯度≥98%,或经国家认证并授 C C33证书的标准物质。 5 2 5C C3424..

D-3-氯-1,-丙二醇棕榈酸二酯(35H62D5ClO4, 5 2 5C C34度≥98%。35 5 524..

D-2-氯-1,3-丙二醇硬脂酸二酯(C39H70D5ClO4,CAS号1329796-49-7,缩35 5 5纯度≥98%。1以上标准品的其他信息见附录B中表B.。144124. 标准溶液配44124.. 标准溶液41见10..414224.. 同位素内标溶42 5 1 5 54215 5 124...

D-氯丙醇脂肪酸酯内标储备液( 5 1 5 54215 5 12-MCPDE标准品,加入甲苯溶解,分别转移,定容至25mL容量瓶中,混匀,溶液浓度为10.μg/mL,分别以D-3-MCPD、

-2-MCPD计,折算系数见附录B中表B.。将溶液转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20℃下保存,保存期12个月。 5 (1. 0 142224...

D-氯丙醇脂肪酸酯内标工作液00μg/mL):移取1.0mL

内 5 (1. 0 142219学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1入甲苯定容至10mL,混匀。将溶液转移至密封性良好的棕色玻璃瓶中,于-20

℃下保存,保存期3个月。4324.. 缩水甘油酯标准系列溶43( 25 2. 4.(1. 5 1 23 5准确移取适量缩水甘油酯标准工作液

4.00μg/mL),经甲苯稀( 25 2. 4.(1. 5 1 23 50.00μg/mL、1.0μg/mL、00μg/mL、00μg/mL,混匀;准确移取100μL标准系列溶液和100μL内标工作液 00μg/mL)于15mL离心管中,混匀,得到质量分别为20.ng、0.ng、00ng、00ng、400ng的系列标准液,然后按照26.(A管)~26.步骤操作。该溶液制备后用于

GE定量换算因子的823测定(见26...)。临用现8234424.. 氯丙醇脂肪酸酯标准系列溶44(

00 25 2. 4.( 5准确移取适量氯丙醇脂肪酸酯标准工作液

4.

μg/mL),经甲苯稀释至(

00 25 2. 4.( 50.00μg/mL、1.0μg/mL、00μg/mL、00μg/mL,混匀;准确移取100μL标准系列溶液和100μL内标工作液

1.00μg/mL)于15mL离心管中,混匀,得到氯丙醇脂肪酸酯分别为20.0ng、0.0ng、4 3B 5100ng、200ng、00ng的系列标准液,然后按照26.(

管)~26.步骤操作4 3B 5524. 材料55124.. 玻璃纤维滤筒或定量滤纸(直径5125

仪器和设备气相色谱-质谱仪,其他仪器设备同11。26

分析步骤126. 试样制备1同12.。226. 试样提取22126.. 植物油脂、动物油211 5B称取两份试样,每份0.g(精确至1mg)于15mL离心管(A、

管)中,准确加入100μLD-1 5B2 22脂肪酸酯内标工作液(4...),混匀,供水解2 222

2 5注:自加入内标开始的步骤(6.~26.)也可使用经过验证符合要求的自动化前处理仪2

2 52226.. 鱼油粉等油脂制226对于鱼油粉等油脂制品,参照

GB5009.第三法(碱水解法)提取脂肪后,计算试样中脂肪含量,再61按照26..步骤操作。1326. 碱水解3 /32A管:于标准系列溶液、上述15mL离心管中各加入75μL甲苯和100μL甲基叔丁基醚,混匀 /32于10℃下冷却7min,加入200μL0.5molL氢氧化钠-甲醇溶液,涡旋,于10℃下放置7min。水解结束后立即于

A管加入600μL酸化氯化钠溶液(00g/L),涡旋,放置5min。6B管:在水解结束后立即于

B管加入600μL酸化溴化钠(00g/L),代替

A

管中的酸化氯化钠620学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1GB5009.91—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载12(00g/L),其余操作步骤不变。2426. 液-液萃取净化4B于上述

A、

管中各加入600μL正己烷,涡旋,进行液-液萃取,静置分层后弃去正己烷层,再加入B600μL正己烷重复净化步骤。若分层不理想,可在2000r/min下离心3min,下层水溶液供衍生用。注:若溶液出现凝固物现象,可加热消除,必要时振荡,至试液充分均匀。526. 衍生化55 (5 (3于净化后的水溶液中加入0.

mL乙醚-乙酸乙酯

6+4),涡旋,取上层溶液于离心管中,再5 (5 (30.mL乙醚-乙酸乙酯

6+4)重复萃取步骤,合并萃取液,加入30μL苯基硼酸溶液,涡旋30s进行衍生,加入30μL1.%乙二醇溶液,涡旋,静置1min,加入约0.g无水硫酸钠吸水干燥,将溶液转移至进样瓶中,供上机测定。626. 空白试验6除不加试样外,其余步骤与试样一致,同步处理。测定结果应低于检出限。726. 仪器参考条件77126.. 气相色谱参考条71气相色谱参考条件如下:: 2a)

色谱柱

5%苯基-甲基聚硅氧烷的弱极性毛细管气相色谱柱(柱长30m,内径0.5mm,膜: 220.5μm),或性能相当者。21 0 55b)

进样体积:

μL,不分流进样,不分流时间为2.min。溶剂延迟时1 0 55c)

载气:高纯氦气,纯度≥99.99%,流速为1.mL/min。7 2d)

柱温程序升温:0℃保持2min,0℃/min升温至200℃,再以40℃/min升温至300℃7 2持4min。8 3e)

进样口程序升温条件:0℃保持0min,00℃/min升温至165℃,保持10min,再以3008 3升温至320℃,保持8min。2注:若未配置程序升温进样口,进样口温度:50℃。使用柱中反吹时,在最后一个目标物出峰1min之后开始反27172吹,色谱柱要求见12..717226.. 质谱参考条件质谱参考条件如下:E7a)

电离源:电子轰击离子源(I)。E7b)

电离能量:0eV。23c)

离子源温度:50℃。23d)

传输线温度:00℃。S 1e)

扫描模式:选择离子监测(IM),监测离子见附录D中表S 1826. 测定8在给定分析条件下,将制备好的空白溶液、标准系列溶液和试样溶液注入气相色谱-质谱仪中,进行定性分析和定量测定。8126.. 定性分815在相同测定条件下,试液与标准工作液中待测物的保留时间偏差在±0.%以内,且在扣除背景后521ｗｗ．ｂｚｆｘｗ学兔兔ｗ．ｃｏｍ标准下载

m ×1000

1000 ……ｗｗ．ｂｚｆｘｗ学兔兔ｗ．ｃｏｍ标准下载

m ×1000

1000 …………(10)

m …………(11)11 1 2的试样质谱图中,其中所选3个监测离子(对于2-MCPD衍生物,只有两个监测离子)均出现且1 1 2而且其相对丰度与浓度相当的标准溶液中监测离子的相对丰度的偏差应符合表1要求,则可判断试样中存在对应的被测物。标准溶液中氯丙醇及其内标苯基硼酸衍生物的监测离子、色谱图和质谱图分别见附录D中表D.、图D.和图D.。8226.. 定量测8282126... 氯丙醇脂肪酸酯标准8212测得氯丙醇脂肪酸酯系列标准工作溶液中3-MCPD、-MCPD和同位素内标的峰面积。以标准工2作液中氯丙醇脂肪酸酯的质量为横坐标,标准品与相应内标的峰面积比为纵坐标,绘制3-MCPDE标准曲线和2-MCPDE标准曲线。82226... 试样溶液的82222

3 5测得3-MCPD、-MCPD和同位素内标的峰面积比值,根据氯丙醇脂肪酸酯标准曲线计算22

3 5溶液中氯丙醇脂肪酸酯的质量,其峰面积比值应在标准曲线的线性范围内;若质量超过标准曲线的线性范围,应将试样(脂肪或油脂)用甲苯稀释后或调整内标的添加量后重新测定(6.~26.),使得衍生后试样溶液中内标与标准曲线中内标的质量浓度相同。82326...

GE定量换算因子的8232 3 52

8213将缩水甘油酯标准系列溶液(4..)经前处理后依次进样,测得其氯化2 3 52

8213的峰面积比值,由3-MCPDE标准曲线(6...)计算得到

GE转化为3-MCPD的质量。以

GE的质量为横坐标,-MCPD的质量为纵坐标,进行一元线性回归,其斜率t即为

GE定量的换算因子。27

分析结果的表述11127. 试样中氯丙醇脂肪酸酯含量的计11127.. 植物油脂、动物油脂和脂肪2 1此试样中3-MCPDE、-MCPDE的含量由B管按照公式(0)计算得2 1X=

M式中:2 μ2 ngX ———试样或脂肪中3-MCPDE、-MCPDE的含量,单位为微克每2 μ2 ngM ———由标准曲线计算得到3-MCPDE、-MCPDE的质量,单位为纳克(g);m ———B管中试样或脂肪的称取量,单位为克();1000

———换算系数。计算结果应扣除空白值,保留3位有效数字。1227.. 鱼油粉等油脂制121鱼油粉等油脂制品中氯丙醇脂肪酸酯的含量按公式(1)计算:1X

=C×

F式中:2 2 μ1 2 μX

———试样中3-MCPDE、-MCPDE的含量(以3-MCPD、-MCPD计),单位2 2 μ1 2 μC

———按公式(1)计算得到的脂肪中3-MCPDE、-MCPDE的含量,单位为微克每千克(g/kg);22ｘｗ．ｃ学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｏｍ标准下载

m A

×1000-X ｘｗ．ｃ学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｏｍ标准下载

m A

×1000-X B

×1

t ……(12)

m …………(13)1ggF

———试样中提取得到的脂肪质量,单位为克();ggm

———试样的称取量,单位为克();2计算结果保留3位有效数字。227. 试样中GE含量的计算2127.. 植物油脂、动物油脂和脂211试样或脂肪中

GE的含量按照公式(2)计算得到:1G1=

M

式中:μG1 ———试样或脂肪中

GE的含量,单位为微克每千克(g/kg);μngM

———由标准曲线计算得到

A管试样中3-MCPDE的总量,单位为纳克(g);ngmA ———A管中试样或脂肪的称取量,单位为克();换算系数;μXB ———B管试样或脂肪中3-MCPDE的含量,单位为微克每千克(g/kg);μ823t ———GE的换算因子(见26..823计算结果应扣除空白值,保留3位有效数字。注:若3-MCPDE与

GE含量之比值>10时,GE含量可能偏高,应改用第二篇第一法或第二法测定。2227.. 鱼油粉等油脂制221鱼油粉等油脂制品中

GE的含量按公式(3)计算:1G2=G1×

F式中:μ1 μggG2———试样中

GE的含量(以缩水甘油计),单位为微克每千克μ1 μggG1

———按公式(2)计算得到的脂肪中

GE的含量,单位为微克每千克(g/kg);F

———试样中提取得到的脂肪质量,单位为克();m

———试样的称取量,单位为克();计算结果保留3位有效数字。28

精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。29

其他1 3 2植物油脂、动物油脂的称取量为0.g时,-MCPDE、-MCPDE和

GE的检出限为1 3 2限为200μg/kg。22对于鱼油粉等油脂制品中3-MCPDE、-MCPDE和

GE的检出限和定量限,根据植物油脂、动物油22脂中3-MCPDE、-MCPDE和

GE的检出限和定量限,结合试样中测定的脂肪含量折算得到。23名称分子式CAS号定量离子m/z监测离子m/z定量内标3-MCPDC3H7ClO296-24-2253253、275、289、291D5-3-MCPDD5-3-MCPDC3H2D5ClO2342611-01-2257257、278、294、2962-MCPDC3H7ClO2497-04-1253253、75、289、291D5-2-MCPDD5-2-MCPDC3H2D5ClO21216764-05-4257257、79、294、2961,3-DCPC3H6Cl2O96-23-17575、77、275、277D5-1,3-DCPD5-1,3-DCPC3HD5Cl2O1173020-20-67979、81、278、2802,3-DCPC3H6Cl2O616-23-97575、77、111、253D5-2,3-DCPD5-