DB2310-T 118-2024 灵芝液体菌种生产技术规程

65.020.20CCS

B

392310 DB

2310/T

—2024灵芝液体菌种生产技术规程牡丹江市市场监督管理局发

布DB

2310/T

118—2024本文件按照GB/T

—《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由黑龙江省农业科学院牡丹江分院和牡丹江镜心湖菌业有限公司提出。丹江医科大学。董雪梅、王远杭、潘春磊、闫水华、侯延国、王菲。DB

2310/T

118—20241 范围本文件规范了灵芝（Ganoderma

lucidum）液体菌种生产环境卫生要求、生产设施与设备、菌种选择、生产工艺、发酵罐液体种质量要求、生产档案。本文件适用于灵芝液体菌种制备。2 规范性引用文件文件。GB

5749

生活饮用水卫生标准GB/T

12728

食用菌术语GB

50073

洁净厂房设计规范NY/T

食用菌菌种生产技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1灵芝液体菌种种、用于代料栽培的发酵罐菌种。3.2液体菌种发酵罐进行食用菌液体菌种培养的专用设备。3.3起始

液体培养基配置后的初始

pH。3.4发酵罐空消对投料前的发酵罐进行高压蒸汽灭菌。3.5DB

2310/T

118—2024发酵罐实消对投料后的发酵罐进行高压蒸汽灭菌。3.6接种量接入种子液的体积和接种后培养基体积的比例。3.7放罐发酵液从发酵罐释放出来，进行后续处理的操作。3.8终止

液体菌种达到放罐指标时的培养基

。4 环境卫生要求4.1 生产环境生产环境应符合

NY/T

的规定。4.2 生产车间应符合

GB

50073

的规定。5 生产设施与设备5.1 设施验室等。5.2 设备5.2.1 生产设备5.2.2 检验设备恒温培养箱、冰箱、显微镜、天平、

计等。5.2.3生产用具玻璃三角瓶、接种火环圈、试管、量筒、玻璃漏斗、定量定性滤纸等生物实验室常规用品。DB

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118—20245.2.4 培养原料应符合

NY/T528

要求，不溶水的固体物料粉碎后过

40

目筛。6 菌种选择丝生长健壮、产量高的灵芝菌种。7生产工艺7.1 工艺流程母种→摇瓶菌种→液体发酵罐菌种→放罐。7.2 生产要求7.2.1 母种制作按照

NY/T

528

要求制作母种。7.2.2 摇瓶菌种制备7.2.2.1 培养基制备按照附录

配方配制培养基，用水符合

GB

5749

要求，摇瓶使用

500

mL～1000

mL

温无色三角瓶，裝液量为容器容量三分之一，分装后封口，121

℃灭菌

30

，放入超净工作台中自然冷却至

28

7.2.2.2 接种培养

15

r/min～180

r/min，培养

8

d～10

d，培养温度控制在

28

7.2.2.3 检查定期检查，及时去除污染或异常菌种，留样用于检验。7.2.3 液体菌种制备7.2.3.1 投料前准备罐中加入三分之二水，关闭入料口阀门，打开排气阀，通电、通气，压力维持

0.11

～0.13

保压

1

h。7.2.3.2培养基制备按照附录

HCL

或

1

mol/L

NaOH

调节起始

为

5.5~6.8。7.2.3.3发酵罐实消项

目指

标检验方法pH5.5～酸碱测试仪菌丝干重（）≥0.4称重法显微镜下菌丝形态菌丝粗壮、细长、有分枝显微镜（低倍镜、高倍镜、油镜）检测样品无菌检查落生长平板培养法菌丝活力菌丝在固体培养基上正常生长，无杂菌试管培养法项

目指

标检验方法菌液色泽菌丝球呈乳白色，滤液呈棕黄色肉眼观察菌液形态不迅速分层、菌球间液体不浑浊肉眼观察菌液气味有灵芝菌株特有的香味，无酸、臭等特殊气味鼻嗅DB

2310/T

118—2024发酵罐内蒸汽压力维持在

0.11

Mpa～0.13

Mpa

保压

1

h

26

℃以下。7.2.3.4 接种火焰保护下接种，接种前调节罐体压力至

0.02

；接种后调节罐体内压力至

0.05

。7.2.3.5 培养培养温度保持在

25

℃～

℃，压力维持在

0.04

～0.06

6

d～8

d，隔天检测，放罐前

24

h

再次检测，达到放罐指标，终止发酵。7.2.3.6 留样与检测母种每个批号保留

3～5

4

℃下贮存；摇瓶菌种、放罐前菌种分别无菌取样

30

mL～40

角瓶内

4

℃留存；检测项目、指标、方法见

8。8 发酵罐液体种质量要求8.1 感官指标应符合表

1

的要求。表1 感官指标表1 感官指标应符合表

2

的要求。表

表

2

理化指标DB

2310/T

118—20249

生产档案

12728

标准，具体操作人员现场记录填写，定期由主管领导审核，签字后归档，档案保存至少

2

年。附录

A（资料性附录）灵芝液体菌种培养基建议配方DB

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118—2024A.1：摇瓶液体培养基配方：土豆

200

g，葡萄糖

g，酵母粉

5

g，蛋白胨

3

g，磷酸二氢钾

g酸镁

g，水

1000

。A.2：发酵