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文档简介
ICS
05
DB23黑
龙
江
省
佳
木
斯
市
地
方
标
准
稻瘟病菌无毒基因检测
PCR
佳木斯市市场监督管理局 发
布
1.1-2020
2023
稻瘟病菌无毒基因检测
Magnaporthe
本文件适用于黑龙江省佳木斯地区水稻稻瘟病菌无毒基因
AVR-Co39
19495.2
3.2
3.3
提取稻瘟病菌菌丝
片段大小的序列来判断样品是否携带该无毒基因。
NanoDrop
2000
干燥的稻瘟病菌丝
0.05
0.1
10%
0.5
8.0
8.0
2475
dd
6682
19495.2
0.1
65
700
μL
65
15
10
600
24
10
10
500
1.5
24
10
10
300
1.5
900
10
10
2.5
2.4
μL100
0.2
μL
0.2
μM0.3
μM
20-
100
ngdd
20.1
2.5U/μL0.3
75
100
NanoDrop
2000
100
8.2
ddH
8.2.2
8.2.3
将离心管置于
仪中，反应程序为：95
预变性
95
变性
30
55
61
℃退
30
72
延伸
30
60
（每对引物的退火温度及延伸时间参见附录
29
个循环，72
200
0.5
0.5
50
50
2.5
20
0.5
μL
130
0.5
1.0
8.4
25
无毒基因引物序列
5′-3
℃）Avr1-Co39CTCTGAACAACTAAGCAACA4055CAACCTGGACTCTTATTGATCAvr-PiaTTATTGCTACCACCTTCCTC3055GTAGTAACTGAGTTGGCGTT
CCTCGGCTTCTTGTATATTACT3055TAAATCGTGCGCTTTCAGATAvr-PikCTGCACACATCAACAGTCTT3056TCACAGTTAAGGCAACGTAGAvr-Pita1*GTTTCCGCCTTTATTGGTTT56AATCCCATCCCATTCGTAACAvr-Pita2*TTCTCTAACCTGCCACGATA3055CCTCCATTCCAACACTAACGAvr-Piz-tGATCAAAT
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