TCAICC 04-2023 生乳中甲萘威的快速检测 胶体金免疫层析法

ICS67.050Z备案号：全 联 农 业 产 业 商 会 标 准生乳中甲萘威的快速检测胶体金免疫层析法Rapiddetectionofcarbarylinrawmilk—Colloidalgoldimmunochromatography送审稿2023-12-31发布 2024-01-01实施全联农业产业商会发布PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次目 次 I前 言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1原理 1试剂与材料 1仪器与设备 2分析步骤 2结果判定 3结果确认 3性能指标 4其他 4附 录 A（规范性）快速检测方法性能指标计算 5前 言本文件按照GB/T1本文件由全联农业产业商会提出。本文件起草单位：全联农业产业商会、北京勤邦科技股份有限公司、内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司本文件主要起草人：万宇平、王兆芹、郭树、姚国新、姚佳、赵三军、魏力杰、杨海涛、李慧、王丹、郝晓娜、张昊本文件为首次发布。PAGEPAGE1生乳中甲萘威的快速检测胶体金免疫层析法范围本文件规定了生乳中甲萘威的胶体金免疫层析快速检测方法。本文件适用于生乳中甲萘威的快速定性测定。规范性引用文件（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法国市监食检规〔2023〕1号市场监管总局关于规范食品快速检测使用的意见术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。原理（T线）试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。试剂甲醇（CH3OH）。CAS1，纯度≥98%。表1 甲萘威参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量甲萘威Carbaryl63-25-2C12H11NO2201.22注：或等同可溯源物质。溶液配制甲萘威标准储备液（1.0mg/mL）：准确称取甲萘威参考物质（5.1.2）10mg（精确0.01mg）（5.1.1）10mL1.0mg/mL的甲萘威标准储备液。-20℃避光保存，6个月。（10（1.00.1mL10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.1）10μg/mL的甲萘威标准中间液。-201个月。（0.1（100.1mL10mL（5.1.1）0.1μg/mL的甲萘威标准工作液。临用新配。材料甲萘威胶体金免疫层析试纸条，适用基质为生乳。需在阴凉、干燥、避光条件下保存。金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。试纸条。仪器与设备0.01mg。6.2 移液器：10μL～200μL、100μL～1000μL。迷你金属浴。胶体金读数仪（可选）。分析步骤试样制备取适量有代表性样品充分混匀。试样提取以生乳为基质的样品可直接上样检测或根据产品说明书稀释后检测。测定步骤吸取200μ5..15103℃温育5in，将检测试纸条（5.3.2）样品端垂直向下插入金标微孔中，35℃温育5min，取出试纸条，对结果进行判定。注1：测定步骤建议按照试纸条说明书。注2：结果判定可使用胶体金读数仪，读数仪的具体使用参照仪器使用说明书。质控试验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。空白试验称取空白试样，按照7.2和7.3步骤与样品同法操作。加标质控试验准确移取空白试样1.9mL放入离心管中，加入0.1mL甲萘威标准工作液（0.1μg/mL）（5.2.3），使试样中甲萘威浓度为5μg/L，按照7.2和7.3步骤与样品同法操作。结果判定目视判定通过对比质控线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。目视判定示意图见图1。阴性结果质控线（C线）显色，检测线（T线）颜色深于质控线（C线或与质控线（C线）颜色基本一致，表明样品中甲萘威含量低于方法检出限，判定为阴性。阳性结果（C线（T线（C线无效质控线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，表明操作不正确或试纸条已失效，检测结果无效。图1 目视判定示意图读数仪测定按读数仪说明书要求操作，直接读数并进行结果判定。质控试验要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。结果确认当检测结果为阳性时，采用参比方法进行确证。性能指标检出限：5μg/L。10.2 灵敏度：≥95%。10.3 特异性：≥90%。假阴性率：≤5%。假阳性率：≤10%。注：性能指标计算方法见附录A。交叉反应率：抗蚜威、克百威<1%。其他本方法参比方法为GB/T23210-2008《牛奶和奶粉中511种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法》（包括所有的修改单）。附 录 A（规范性）快速检测方法各个性能指标计算方法见表A.1。表A.1 快速检测方法性能指标计算方法样品情况a检测结果b总数阳性阴性阳性N11N12N1.＝N11＋N12阴性N21N22N2.＝N21＋N22总数N.1＝N11＋N21N.2＝N12＋N22N＝N1.＋N2.或N.1＋N.2显著性差异2)2(12－21－1)2/(12＋21)，自由度(df)＝1灵敏度(p＋)/%p＋＝N11/N1.×100特异性(p－)/%p－＝N22/N2.×100假阴性率(pf－)/%pf－＝N12/N1.×100＝100－灵敏度假阳性率(pf＋)/%pf＋＝N21/N2.×100＝100－特异性相对准确度c/%(N11＋N22)/(N1.＋N2.)×100注：N为任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如，N11表示第一行，第一列；N1.表示所有的第一行，