高中生物专题5DNA和蛋白质技术课题1DNA的粗提取与鉴定课件

专题5DNA和蛋白质技术课题1DNA的粗提取与鉴定DNA的提取是现代生物技术进行中药鉴别的最关键步骤。总DNA的有效提取要求材料中的DNA尽可能少地降解。DNA的质量将直接关系到实验的成败。不同的研究目的对DNA的纯度和量的要求不尽相同。课题背景课题1DNA的粗提取与鉴定课题2多聚酶链式反响扩增DNA片段课题3血红蛋白的提取和别离课题目标尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。一、根底知识1.提取DNA的方法②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质那么溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步别离。〔1〕DNA的溶解性①在不同浓度的NaCl溶液中溶解度当氯化钠的物质的量浓度为2mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为0.14mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。问题1.DNA在NaCl溶液中的溶解度如何变化？问题2.如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？③洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。〔2〕DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。②大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。2.DNA的鉴定①二苯胺染色法DNA与二苯胺〔沸水浴〕会染成蓝色②甲基绿染色法甲基绿与DNA结合，呈绿色【典型例题】以下有关“DNA粗提取与鉴定”实验的表达，正确的选项是〔〕〔多项选择〕A．新鲜猪血、菜花等动植物材料均可用于DNA的粗提取B．植物材料需先用洗涤剂破坏细胞壁再吸水胀破C．DNA不溶于95%的冷酒精而溶于2mol/L的NaCl溶液D．溶有DNA的NaCl溶液中加人二苯胺试剂，需沸水浴加热后冷却，再观察颜色CD【方法点拨】1.新鲜猪血中大量成熟红细胞内无DNA2.植物材料需先用纤维素酶和果胶酶破坏细胞壁再吸水胀破3.DNA不溶于95%的冷酒精而溶于2mol/L的NaCl溶液1.实验材料的选取二、实验设计〔1〕选取原那么材料易得DNA含量丰富提取简便〔2〕选材鸡血细胞2.破碎细胞，获取含DNA的滤液〔1)动物细胞参加蒸馏水，搅拌过滤后收集滤液〔2〕植物细胞参加洗涤剂和食盐，搅拌研磨后过滤收集滤液3.去除滤液中的杂质方案一：30mL含DNA的滤液＋2mol/LNaCl→同方向搅拌，DNA溶解→参加蒸馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶解液问题1：滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？核蛋白、多糖和RNA等杂质问题2：为什么反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质？用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去在低盐溶液中的杂质。方案二：30mL滤液＋嫩肉粉〔木瓜蛋白酶〕→静置10～15分钟→DNA滤液方案三：30mL滤液→60～75℃恒温保温10~15分钟→过滤获得DNA滤液问题3：方案二与方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白质，使提取的DNA与蛋白质分开；方案三是利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性，与DNA别离。4.DNA的析出与鉴定〔1〕析出：滤液+同体积冷却95%酒精

白色丝状物〔2〕溶解：将白色丝状物溶于2mol/L的NaCl溶液中DNA＋二苯胺蓝色物〔3〕鉴定：沸水5min【典型例题】D【方法点拨】相关操作选取的试剂A破碎鸡血细胞蒸馏水B溶解核内DNA2mol/LNaCl溶液C提取杂质较少的DNA冷却的95%的酒精DDNA的鉴定双缩脲试剂下表有关“DNA粗提取和鉴定”的相关操作中所选取的试剂，错误的选项是〔〕1.可以利用DNA在氯化钠溶液中的溶解度不同，将DNA分子溶解或析出2.DNA不容易酒精，因此可以用95%的冷酒精提取杂质较少的DNA三、操作提示3.二苯胺试剂要现配现用，否那么会影响鉴定的效果。1.以鸡血为实验材料时，每100mL血液中需要参加3g柠檬酸钠，防止血液凝固。2.参加洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否那么容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。参加酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。【课堂小结】〔2015江苏卷.25〕图1、2分别为“DNA的粗提取与鉴定”的实验中局部操作步骤示意图,以下表达正确的选项