新试验一 芦丁的提取、分离与鉴定

PAGEPAGE1实验一芦丁的提取、精制与鉴定一、实验目的与要求l、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法；2、掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷，苷元和糖部分的鉴定方法。R=-glu-rha芦丁R=H槲皮素芦丁溶解度：冷水1：8000热水1：200冷乙醇1：300热乙醇1：30难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。槲皮素溶解度：冷乙醇1：650热乙醇1：60可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中。二、实验原理本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质，用热水提取和精制；芸香苷属于苷类化合物，可被稀酸水解成槲皮素（苷元），葡萄糖和鼠李糖。芦丁和槲皮素通过化学反应，色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。三、实验内容（一）提取分离和纯化l、芦丁的提取：2、精制（重结晶）：3、芦丁的水解：流程图如下：

槐米（20g）研碎，于500ml烧杯中，加350，250ml水煮沸15min,10min棉花过滤提取液放置1-1.5h抽滤滤液（弃去）沉淀物（粗品芦丁）水解精制1/2粗品芦丁1/2粗品芦丁150ml，1%H2SO480倍水加热溶解，趁热抽滤直火加热水解30min 放冷抽滤，沉淀水洗至中性不溶物（弃去）滤液放置1-1.5h，抽滤滤液粗品槲皮素精品芦丁氢氧化钙调pH至中性过滤滤渣（弃去）水解液（水浴浓缩至2ml）(二)鉴定l、化学检识取芦丁和槲皮素少量，置2支试管中分别加乙醇8ml使溶解(1)盐酸—镁粉反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支试管中分别加浓盐酸5滴，再加少量镁粉，观察颜色变化。(2)Molish反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支试管中分别加10%α—萘酚0.5ml摇匀，倾斜试管，沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml，静置，观察二层溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。(3)FeCL3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支试管中分别加1%三氯化铁乙醇液几滴，观察颜色变化。(4)AlCl3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支试管中分别加1%三氯化铝乙醇液几滴，先置可见光下观察后，置紫外灯下观察颜色变化。(5)Mg(Ac)2反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支试管中分别加1%乙酸镁乙醇液几滴，观察颜色变化。2、色谱鉴定(1)槲皮素和芦丁的纸色谱鉴定点样：取圆形滤纸，距圆心1厘米处用铅笔划一同心圆，为起始线，间隔1厘米处点样品（a,b,c,d）。将点好样品的滤纸置于培养皿中分别用展开剂①、②径向展开。a自制芦丁乙醇液b芦丁对照品乙醇液c自制槲皮素乙醇液d槲皮素对照品乙醇液。展开剂：①正丁醇—醋酸—水(4：1：5，上层)②正丁醇—醋酸—水(4：1：5，下层)显色：①可见光下观察色斑。②喷1％AlCl3乙醇液，再置紫外灯下观察荧光。(2)糖的纸层析鉴定点样：取圆形滤纸，同上法点样和展开（e,f,g）。e水解液f葡萄糖对照品水溶液g鼠李糖对照品水溶液展开剂：正丁醇—醋酸—水(4：1：5，上层)显色：喷洒苯胺-邻苯二甲酸，电炉上加热烘烤至色斑出现。四，分析讨论芦丁酸水解时有何现象，如何解释？槲皮素和芦丁纸色谱鉴定时，用BAW（4：1：5）上层和下层展开后，解释两者的相对比移值大小关系？葡萄糖和鼠李糖的纸层析鉴定时，用BAW（4：1：5）上层展开后，何者相对比移值较大，为什么？芦丁，槲皮素鉴定（二）槲皮素衍生物的制备槲皮素五乙酰化物的制备：取槲皮素结晶200㎎，置于干燥三角锥形瓶中，加5ml醋酐，用毛细管滴加农硫酸一小滴，振摇使完全溶解，水浴上加热30分钟（注意应避免反应过程中引入水份），放冷后将反应液在搅拌下倾入100ml水中，一直搅拌至油滴消失，且有固体沉淀析出为止，抽滤沉淀并洗涤，干燥后以95％乙醇重结晶，即得槲皮素五乙酰化物无色结晶。芦丁的UV,HPLC,IR分析（一）芦丁的UV分析（实验地点，二号试验楼A栋411室）：（二）芦丁的HPLC分析（实验地点，二号试验楼A栋411室）：1，色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇－1％冰乙酸溶液（32：68）为流动相，检测波长为257nm，理论塔板数按芦丁峰计算不低于20002，对照品溶液的制备：精密称取在1203，供试品溶液的制备：取自制精制品约g，精密称定，置ml