自身免疫性肝病抗体谱检测试剂盒酶联免疫斑点法-北京和杰创新

北京和杰创新生物医学科技有限公司自身免疫性肝病抗体谱检测试剂盒（斑点-酶联免疫法）说明书【产品名称】中文名称：自身免疫性肝病抗体谱检测试剂盒（斑点-酶联免疫法）英文名称：DetectionKitforAutoimmuneLiverDiseasesAntibodyProfile（DOT-ELISA）【包装规格】20人份/盒（10项；7项；4项）；40人份/盒（10项；7项；4项）。10项:AMAM2、SP100、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52、SSA、SSB、CENPB。7项:AMAM2、SP100、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52。4项:AMAM2、LKM-1、LC-1、SLA/LP。【预期用途】用于定性检测人血清中的抗AMAM2、SP100、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52、SSA、SSB、CENPB的IgG抗体。临床意义：自身免疫性肝病包括自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)，及此三类疾病的重叠综合征等[1-3]。对其发病机制、诊断以及治疗的研究得到了越来越多的关注。血清标志性自身抗体的检测,如PBC患者AMA抗体检测,AIH患者抗-LKM1、抗-SLA/LP、抗LC-1的检测,是自身免疫性肝病的重要实验室诊断依据，对其自身抗体的检测具有重要的临床意义。【检测原理】自身免疫性肝病抗体谱的检测采用斑点-酶联免疫法（DotEnzymeLinkedImmunosorbentAssay，Dot-ELISA），用于定性检测人血清中抗AMAM2、SP100、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52、SSA、SSB、CENPB10种抗体。膜条上平行包被了经纯化的AMAM2、SP100、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52、SSA、SSB、CENPB10种抗原及质控带。在第一次孵育时，已稀释的病人样本与膜条上的抗原反应。如果样本阳性，特异性的IgG抗体将与相应的抗原结合。为检测已结合的抗体，再加入酶标羊抗人IgG（碱性磷酸酶结合物）进行第二次孵育，然后加入底物液以产生蓝紫色颜色反应。【主要组成成分】表1试剂盒的组成序号组成性状40人份装量20人份装量1检测膜条固体40人份×1袋20人份×1袋2样品稀释液液体70.0ml×1瓶40.0ml×1瓶3酶标二抗(100×)液体0.8ml×1支0.4ml×1支4浓缩洗液(10×)液体100.0ml×1瓶50.0ml×1瓶5底物液液体40.0ml×2瓶40.0ml×1瓶6一次性吸管固体3ml×3支3ml×3支7说明书—1份1份检测膜条主要组分：膜条上平行包被了经纯化的AMAM2、SP100、GP210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52、SSA、SSB、CEPNB抗原及质控带，以上抗原为重组抗原，质控带包被有羊抗人IgG。样品稀释液主要组分：BSA1.20.05MTBS缓冲液（pH7.2）40mlProclin-30040μl吐温2020μl酶标二抗(100×)主要组分：碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG10μlBSA12mgProclin-3000.4μl0.05MTBS缓冲液（pH7.2）0.4ml浓缩洗液（10×）主要组分：Tris 60.5gHCl 20ml氯化钠 85gProclin-300 0.2ml吐温5ml底物液主要组分：四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-磷酸盐(NBT/BCIP)0.1ml0.05MTBS缓冲液（pH7.2）40mlProclin-30040μl【储存条件及有效期】2～8℃避光保存，有效期为12【样本要求】人血清，要求清亮、无沉淀；样本一周以内检测可在4℃样本一周以上检测需在-20℃【检验方法】 （1）准备：将浓缩洗液（10×）用蒸馏水1：10倍稀释，混匀后作洗涤、膜条预处理和稀释酶标二抗用，配制的洗液应在同一个工作日内使用。 （2）预处理：检测膜条包装桶从冰箱取出，恢复至室温后再打开盖取出膜条。在膜条反应槽中加入洗涤液，每槽1.5ml，室温摇床上摇摆5min。 （3）血清温育：将膜条反应槽中的液体吸干或倒干，在膜条反应槽中加入样品稀释液，每槽1.5ml，随后加入待检血清15μl。充分混匀后，室温摇床上摇摆30min。 （4）洗涤：将膜条反应槽中的液体吸干或倒干，加入洗涤液1.5ml，室温摇床上摇摆5min后弃去，再重复洗涤2次。 （5）酶标二抗温育：每槽加入1:100稀释（用洗涤液稀释）的酶标二抗1.5ml，室温摇床上摇摆30min。 （6）洗涤：重复步骤4）。 （7）底物温育：每槽加入1.5ml的底物液，室温摇床上摇摆10min。 （8）终止：将膜条反应槽中的液体吸干或倒干，每槽加入蒸馏水1.5ml，室温摇床上摇摆1min后弃去，再重复洗涤2次。蒸馏水洗净后将膜条取出晾干。 （9）结果观察：肉眼观察反应区内各抗原带有无着色及着色深浅。【参考范围】 通过检测滴度1:100临界值血清及200例献血者血清来研究该试剂的参考范围。根据地域的不同、人群的不同，建议各检验室建立自己的参考范围。【检验结果的解释】在自身免疫性肝病检测膜条彻底干燥以后，根据膜条上各抗原线着色的深浅来判断结果。质控线出现蓝紫色条带说明实验结果可靠。如果相应抗原线处出现蓝紫色条带则为阳性反应。抗原膜条与正常人血清不发生反应，除质控线显蓝紫色外，其余抗原线无条带或微弱条带的反应为阴性反应。抗原在检测膜条上的位置：ALD谱10项ALD谱7项ALD谱4项AMAM2AMAM2SP100AMAM2AMAM2SP100gp210LKM-1LC-1SLA/LPRO-52SSASSBCENPBControlControlAMAM2SP100gp210LKM-1LC-1SLA/LPRO-52SLA/LPLKM-1SLA/LPLKM-1LC-1LC-1CControl【检验方法的局限性】该试剂盒只提供自身免疫性肝病抗体的检测结果，具体病情及诊断应由临床医生结合临床表现和其他信息综合判断。【产品性能指标】外观：产品包装完整、标签清晰。液体试剂中，样品稀释液、底物液和酶标二抗为淡黄色，其它试剂为无色，均无混浊，无未溶物。检测膜条干净、无污渍、无破损。膜条宽度：2±0.5mm。临界值：将自身免疫性肝病内部参考品按照1:80稀释后至少检测20次，阳性率≥95%。将自身免疫性肝病内部参考品按照1:120稀释后至少检测20次，阴性率≥95%，且显色一致。批间差：抽取三个批次的试剂盒，按照临界值的检测方法：将自身免疫性肝病内部参考品按照1:80稀释后至少检测20次，阳性率≥95%。将自身免疫性肝病内部参考品按照1:120稀释后至少检测20次，阴性率≥95%，且显色一致。干扰：血红蛋白浓度小于5mg/ml的溶血、甘油三脂浓度小于20mg/ml的脂血和胆红素浓度小于0.4ml/ml的黄疸对检测结果没有影响。【注意事项】1．本试剂盒只做定性检测。2．脱色摇床摇摆频率30次/分。3．检测膜条质控带必须显色否则试验不成立。4．使用前试剂应摇匀。5．整个检测过程膜条应正面朝上，同时保证液体覆盖住膜条。6．显色液对光敏感，请尽量避光使用保存。7．不同批号的试剂不可混用。8．一次性吸管可以用于洗涤过程加注洗液，且仅限于洗涤过程。切勿用于样品稀释液、酶标二抗和底物的加液过程。9．试剂盒的所有组分都应视作潜在传染源小心处理。【参考文献】1.JoshiS,CauchDK,HeathcoteEJ,etal.Antimitochondrialantibodyprofiles:uretheyvalidprognosticindicatorsinprimary，biliarycrrhosis?[J].nAmJGastroenterol,2002,97:999-1002．2.王宇明,毛青,陈嵩等．原发性胆汁性肝硬化和自身免疫性肝炎重叠综合征的临床与病理分析[J]中华肝脏病杂志,2005,13:6-8．3.FeldJJ,HeathcoteEJ.EpidemiolgyofautoimmuneLiverdisease[J].JGastroenterolHepatol,2003,18:1118-1128．4.Wiesl,BrimnerS,HenningerJ,etal.IdentifieationoftargetantigenforSLA/LPautoantibodiesinautoimmunehepatitis[J].lancet.2000;355:1510-15155.PObermayer-Straub,CPStrassburg,MPManns.Autoimmune

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