免疫组化技术发展现状以及临床应用课件

主要内容病理概述病理科主要研究方法免疫组化临床应用免疫组化技术发展现状病理概述诊断病理学(diagnosticpathology)：即外科病理学、人体病理学，是病理学一分支，指临床上由于诊断和治疗的需要，对取自病人活体内的病变组织、细胞，进行病理诊断的一门医疗实践科学。研究对象：患者病变组织、细胞研究目的：确诊和治疗疾病、提供判定疗效和预后信息研究方法：组织切片、细胞涂片应用技术：HE、IHC、ISH、CISH、FISH……发展历史：150年历史，国内不到100年历史。与传统IVD的区别研究对象不同血液，尿液等VS细胞和组织取材过程不同病理通常通过手术方式获取样本结果判断方法不同病理不能通过机器直接得到标准结果主要内容病理概述病理科主要研究方法免疫组化临床应用免疫组化技术发展现状H.E.染色：苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining)，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色。伊红为酸性染料，使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。免疫组化免疫组织化学技术(immunohistochemistry)，IHC；基本原理—抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。在常规肿瘤病理诊断中，有时单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断，需要IHC进行确诊。免疫组化具有特异性强、敏感性高、定位准确、形态与功能相结合等特点。原位杂交（insituhybridization,ISH）是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。按标记类型可分为DNA-DNA，DNA-RNA，RNA-RNA荧光原位杂交技术（fluorescenceinsituhybridization,FISH）将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。特殊染色为了显示与确定组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等，需要分别选用相应的显示这些成分的染色方法进行染色。包括：胶原纤维染色（Masson等）、网状纤维染色、弹力纤维染色、肌肉组织染色（磷钨酸苏木素）、脂肪染色（苏丹III）、糖原染色（PAS）、粘液染色（PAS）等。主要内容病理概述病理科主要研究方法免疫组化临床应用免疫组化技术发展现状免疫组化的临床应用主要包括以下几方面：⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位；⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型；⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志物进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；⑸发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。⑹为临床提供治疗方案的选择。小B细胞淋巴瘤免疫组化特点CD5CD10CD23cyclinD1B－CLL／SLL＋－＋－淋巴浆细胞性淋巴瘤－－－－滤泡性淋巴瘤－＋－－套细胞性淋巴瘤＋－－＋淋巴结边缘区Ｂ细胞淋巴瘤－－－－结外边缘区Ｂ细胞淋巴瘤（黏膜相关淋巴组织淋巴瘤）－－－－乳腺浸润性导管癌免疫组化分子分型

与治疗预后关系ERPRHER-2预后治疗有效药物LuminalA＋＋－最好他莫昔芬LuminalB＋＋＋较好他莫昔芬+阿那曲唑TripleNegative－－－一般含铂药物+EGFR抑制剂HER-2+－－＋最差曲妥珠单抗cerBb-2CD20ERCK主要内容病理概述病理科主要研究方法免疫组化临床应用免疫组化技术发展现状取材固定、修块脱水、透明浸蜡、包埋、修蜡块制作切片烤片脱蜡、水化抗原修复染色、复染脱水、清洗封片光镜观察分析、出报告1天4小时1天1块组织从取材到最终出报告至少需3天时间目前病理诊断的瓶颈市场需求的病理诊断手工操作自动化操作时间和试剂不能精确控制，影响结果。产出率低、医院和病理医生收益低操作复杂，技术含量高，对医生要求高。完全手工操作耗时耗力。结果准确操作简便快速诊断节约成本免疫组化主要玩家国际：罗氏、莱卡、DAKO占据国内绝大部分免疫组化自动化市场主要问题：价格高，基层医院无法承受免疫组化主要玩家国内：试剂有一定积累，仪器刚刚起步，质量和稳定性不行迈新：试剂研发历史最长，有试剂优势；仪器近年推出。基因：有试剂，有一款半自动免疫组化中杉：有试剂无机器深达：刚推出机器，效果未知达盟全自动免疫组化核心专利技术，使清洗更加彻底，染色效果更有保障；核心专利技术，提高试剂使用效率，最小试剂