水产苗种中孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物残留量的测定 液相色谱法

1水产苗种中孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物残留量的测定液相色谱法1范围测定方法。本标准适用于水产苗种中孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物隐色孔雀石绿(LMG）、隐色结晶s渐范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法农业部1192号公告-1-2009水产苗种违禁药物抽检技术规范3原理样品中残留的孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物用乙睛-乙酸馁缓冲液提取，二氯甲院液液落取，固相落取柱净化，反相色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。4试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T6682级水的标准。4.1乙睛:色谱纯。4.s二氯甲院:色谱纯。4.3甲醇:色谱纯。4.4甲酸。4.5冰乙酸。4.6二甘醇。4.7氨水。4.8乙酸馁。4.9盐酸轻腔。4.10对-甲苹礦酸。4.1120%盐酸轻腔溶液:称取盐酸轻腔20g，溶解于100mL水中。4.1s1.0mo1/L对-甲苹礦酸溶液:称取对-甲苹礦酸19.0g，溶解于100mL水中。4.130.125mo1/L乙酸馁缓冲溶液:称取9.64g乙酸馁溶解于1000mL水中，冰乙酸调PH到4.5。4.14定容液:乙睛+乙酸馁缓冲溶液（20+80，v/v）。2❤✐❥❦➟malachitegreen,MG➥❅♦♣q➟crystalvioletCV➥blue,MB➥❅❿➀A➟azureA,AZ-A➥❅❿➀B➟azureB,AZ-B➥❅❿➀C➟azureC,AZ-C➥❅❽⑩❤✐❥❦➟leucomalachitegreen,LMG➥❅❽⑩♦♣q➟leucocrystalviolet,LCV➥à度Þ大❼98%Ø✂✄e✎✏储备ð⑧✏确ñ❒❺❈✤❤✐❥❦❅❽⑩❤✐❥❦❅♦♣q❅❽⑩♦♣q✎✏❆ñ❒❺❈✤tt✐❥❦❅❽⑩❤✐❥❦❅♦♣q❅❽⑩♦♣q✤✎✏储备ð⑧至✗✛✛ô❾ý❈瓶❋❻➷➬稀释至刻度â✎✏❋间⑧✗➧校避光保存â✎✏工作ð⑧根据需■临❻时✏确吸❒❞❈✤混â✎✏❋间⑧❻❞ý⑧✏确稀释至❺当浓度❮❰✉Ï÷✛ô❾è❀÷ô❾或✑②比例混匀或✑②比例混匀配qÖ❉❷×5.3大企：谢喜0.0I示。5.5旋涡振荡器5.6固相落取装置5.7旋转蒸发仪:或官之相当者5.9氧化铅柱：32ⅢⅢx寸.eⅢⅢ（内径）,柱内填料：氧化铅+硅藻土（I+I）6测定步骤6.1样品制备按照农业部IIδS合公品-I-S00δ水华里细连券和物抑投及*理狽抑行6.2提取,地人咒购持假格渡（寸.II）I.2ⅢΓ,纠-由来嘿,社购協歲如格渡（寸.I3）2ⅢΓ,,旋涡混匀IⅢJn,辐免摇取I0ⅢJn,,上婦渡转移至I00ⅢΓ离心管中,稅海用社嘿I0ⅢΓ重发摇取,合共上婦渡6.3液液莖取净化,二且蟲SⅢΓ,二賞由只I2ⅢΓ,I0ⅢJn,将下長格渡转移至I00ⅢΓ新投巡中,,,寸000大\ⅢJn离心I0ⅢJn,下長格渡合共至I00ⅢΓ新投巡中,寸2托旋转蒸发至近干,社嘿鄉排新投巡,寸2托旋转蒸发至近干,用S.2ⅢΓ社嘿格帐稅海3e.寸国相窑敬唐怀将DSC-MCAX性共亲在回相蕊敢亲高上,依次用5mL乙睛、5mL水活怀,持務提敢液到性上,再用乙睛洗梨形瓶两次,每次2.5mL,依次过性,用5mL水、5mL乙睛淋洗,吹DSC-MCAX性延士,加入6mL洗脱液A（4.19）,弃去第1mL洗脱液A,,,,分别士40校下氮气吹至延士,向两个锡心管中分别加入定容液溶解残留物,并定容至0.5mL,各務敢400μL溶液合并,过0.45μm滤膜,供液 相年爆飒定。e.2涧车e.2.」年爆尝性s）年爆性：MG-C18性,250mmx4.6mm（內性）,粒度5μm,或与之性能相寻者。p）流动相：乙睛-乙酸馁缓冲溶液,梯度洗脱程序见表1。系」協頃进联括佳虹间\m:社嘿\W社购協發如格源\W0S080IS82I2S282I2SeS08032S080C）流速：1.0mL/miu。e）检飒稅k：610um。e.2.Σ牲准甲祥詩間海地量敢谐合标海中间液（4.17）,用流动相暢綠成AZ-A、AZ-C、MB浓度分别为20μg/L、40μg/L、,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标海职祥。e.2.3年爆分蚪在上述年爆条性下,,标海工作溶液和蚌皆溶液中各待飒訊分的响应值均应在价路检飒祥性范围內。标海皆怪留时间該希值为：AZ-C6.45miu、AZ-A7.20miu、AZ-B7.76miu、MB8.29miu、MG11.82miu、CV13.62miu、LMG20.72miu、LCV21.24」祥能H算」.」H算蚌皆中折馬史該、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物的残留量投公式（1）A算,结果怪留三位有效数合。m:X——蚌皆中折馬史該、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物残留量,单位为微克每千克(μg/kg）；5——蚌皆溶液中折馬史該、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物的浓度,N——样品最终定容体积,单位为毫升（mΓ):m——样品的质量,单位为克（号）。8分洋发貳頃,准地頃和煌莖頃8.]发貳頃。8.s准地頃,回收率为70识一I20识,AZ-B、MG、CV、I20识。8.3煌莖頃李元兵的批内相对标准偏差<I5识,批间相对标准偏差<I5识。寸2附等V（急粉性附等）年爆图AZ-C-6.520 AZ-C-6.520 AZ-A-7.261 AZ-B-7.823 MB-8.355 MG-11.869 CV-13.666 LMG-20.845 LCV-21.405图V.」性准渴凌年爆图（VΣ-CVΣ-V“g\Γ,VΣ-BCΛ图V.s