水产品中镇静剂类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

1水产品中镇静剂类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法本标准规定了水产品中13种镇静剂类药物残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于淡水虾、淡水鱼、海水虾、海水鱼4类水产品中13种镇静剂类药物残留量的测定，其它动物类食品可参照执行。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理用乙腈提取试样中的镇静剂类药物，然后用QuEChERS吸附剂净化提取液，用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.1乙腈：色谱纯。4.1.2甲醇：色谱纯。4.1.3甲酸铵：色谱纯。4.1.4甲酸：色谱纯。4.1.5无水硫酸钠：分析纯，500℃灼烧4h，置于干燥器内备用。4.1.6N-丙基乙二胺吸附剂（PSA）：40μm~60μm粒径范围，100Å平均孔径。4.1.7十八烷基键合硅胶吸附剂（C18）：40μm~60μm粒径范围，60Å平均孔径。4.1.850%甲醇-水溶液：量取50mL甲醇（4.1.2）于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。4.1.9甲酸铵溶液（2mmol/L）：称取甲酸铵（4.1.3）0.126g（精确至0.001g），加少量水溶解后，用水定容至1000mL，摇匀备用。4.1.10含0.1%甲酸的2mmol/L甲酸铵溶液：准确吸取甲酸（4.1.4）1mL，加甲酸铵溶液（4.1.9）稀释并定容至刻度，摇匀，过滤。4.1.11含0.1%甲酸的甲醇溶液：准确吸取甲酸（4.1.4）1mL，置于1000mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀备用。24.1.12QuEChERS离心管：准确称取100mgPSA（4.1.6）、40mgC18（4.1.7）和500mg无水硫酸钠（4.1.5），储存于15mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，旋紧盖塞，置于干燥器内备用。4.1.13微孔滤膜：0.22μm，尼龙膜。4.2标准品13种标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度均≥95%。4.3标准溶液配制4.3.1标准储备溶液：分别准确称取标准品（4.2）100.0mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至100mL，此溶液浓度均为1mg/mL。4℃避光密封保存，有效期6个月。4.3.2混合标准储备溶液：将13种镇静剂类药物标准储备溶液（4.3.1）用甲醇稀释成10µg/mL的混合标准中间溶液，4℃避光密封保存，有效期1个月。4.3.3空白基质溶液：称取空白试样，按照6.2规定的样品预处理方法操作制备。4.3.4基质混合标准溶液：用空白基质溶液（4.3.3）将标准中间溶液（4.3.2）稀释成适合浓度的混合标准工作溶液，现配现用。5仪器5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.3离心机：转速不低于8000r/min。5.4涡旋振荡器。5.5超声波清洗器。5.6旋转蒸发仪。5.7均质机。6分析步骤6.1试样制备淡水鱼、淡水虾、海水鱼及海水虾：取样本，先将鱼体、虾体表面杂质洗净，鱼去鳞、去皮，取肌肉部分；虾去壳、头，取可食部分；试样经均质混匀，-18℃以下冷冻保存，备用。6.2试样前处理取试样，常温自然解冻后，称取5.0g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入20mL乙腈上清液转至另一50mL离心管中；残渣中再加入20mL乙腈重复提取一次，合并两次上清液。精密量取提取液4mL置于QuEChERS离心管（4.1.12）中，剧烈振荡1min，8000r/min离心5min，移取全部上清液于10mL试管中，于40℃下氮吹近干，加入1mL50%甲醇-水溶液（4.1.8）溶解残渣，过0.22μm微孔滤膜（4.1.13），供液相色谱-串联质谱联用仪分析。6.3测定6.3.1液相色谱分离条件3a）色谱柱：ACQUITYUPLCHSST3，2.1×100mm（i.d.1.8µm，或性能相当者。b）流动相：A：含0.1%甲酸的2mmol/L甲酸铵溶液（4.1.2B：含0.1%甲酸的甲醇溶液（4.1.2）。c）柱温：35℃。d）流速：0.35mL/min。e）进样量：3µL。f）梯度洗脱程序见表格1。表1梯度洗脱程序6.3.2质谱参考条件b）扫描方式：正离子扫描。c）离子源温度：400℃。d）干燥气：10.0L/min。e）雾化气：3.0L/min。f）毛细管电压：4000V。g）加热气流量：10.0L/minh）检测方式：多反应监测（MRM）。i）定性离子对和定量离子对等详细仪器条件见表格2。4表214种镇静剂的质谱参数Q1/V碰撞能量/eVQ3/V6.3.3液相色谱-质谱测定根据试样中被测物的药物含量，选取响应值相近的混合标准工作液（4.3.4）同时进行分析。混合标准工作液和待测液中各种药物的响应值均应在仪器响应范围内。如果含量超过标准曲线范围，应用50%甲醇-水溶液（4.1.8）稀释到合适浓度后分析。在上述仪器条件下，13种化合物多反应监测（MRM）质谱图参见附录B图B.1。6.4空白试验除不加试料外，均按上述操作步骤进行。7结果计算和表述7.1定性标准在相同试验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内；且试样中定性、定量离子的相对丰度比与浓度接近的标准溶液中对应的定性、定量离子的相对丰度比进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，可判定为试样中含有对应的待测物。5表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差>50>20-50>10-207.2定量测定采用标准曲线法定量。由按式（1）或仪器数据处理软件计算获得：式中：——试样中各待测物的含量，单位为微克每千克(μg/kg）；——试样中各待测物峰面积对应的浓度，单位为微克每升(μg/L）；A——试样溶液中被测物的色谱峰面积；——基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积；——试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；——试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。计算结果应扣除空白值，保留3位有效数字8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。9准确度本方法对水产品中13种镇静剂类药物加标浓度为0.5~5μg/kg时，回收率在70~120%之间。10定量限本方法对水产品中地西泮、氯丙嗪、安眠酮、艾司唑仑、硝西泮、普鲁卡因、氯硝西泮、劳拉西泮、奥沙西泮、阿普唑仑、三唑仑、咪达唑仑、氯氮卓的定量限均为0.500μg/kg。6附录A（资料性附录）表A.1镇静剂类化合物标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量1C16H13ClN2O2C17H19ClN2S3C16H14N2O4C16H11ClN45NitrazepamC15H11N3O36C13H20N2O27C15H10ClN3O38C15H10Cl2N2O29C15H11ClN2O2C17H13ClN4C17H12Cl2N4C18H13ClFN3C16H14ClN3O 附录B（资料性附录）1:1:阿普唑仑309.10>281.00(+)CE:-26.01:阿普唑仑309.10>274.10(+)CE:-26.0阿普唑仑-14.0-25.0::2:氯氮卓300.05>283.05(+)CE-14.0-25.0:: 2:氯氮卓300.05>227.00(+)CE 氯氮卓3:氯硝西泮316.00>240.90(+)CE:-34.03:氯硝西泮316.00>240.90(+)CE:-34.03:氯硝西泮316.00>213.80(+)CE:-38.0 CE38.0氯硝西泮 4:地西泮285.10>257.10(+)CE:-21.0 4:地西泮285.10>222.10(+)CE:-27.0 地西泮85:艾司唑仑295.10>267.00(+)CE:-25.05:艾司唑95>27.CE5.5:艾司唑仑295.10>267.00(+)CE:-25.05:艾司唑仑295.10>192.00(+)CE:-23.05:艾司唑仑295.10>192.00(+)CE:-23.0 艾司唑仑三唑仑7:劳拉西泮7:劳拉西泮321.10>302.90(+)CE:-14.07:劳拉西泮321.10>275.00(+)CE:-22.0劳拉西泮8:咪达唑仑326.10>291.00(+)CE:-27.08:咪达唑仑326.10>243.90(+)CE:-24.08:咪达唑仑326.10>291.00(+)CE:-27.08:咪达唑仑326.10>243.90(+)CE:-24.0 咪达唑仑 9:硝西泮282.10>254.00(+)CE:-19.0 9:硝西泮282.10>236.00(+)CE:-24.0 硝西泮10:奥沙西泮287.00>241.00(+)CE:-21.010:奥沙西泮287.00>162.90(+)CE:-37.01奥沙西泮287.00>241.00(+)CE:-21.010:奥沙西泮287.00>241.00(+)CE:-21.010:奥沙西泮287.00>162.90(+)CE:-37.010奥沙西泮287.00>12.90(+)CE:-37.0 奥沙西泮13:安眠酮13:安眠酮251.00>132.00(+)CE:-23.013:安眠酮251.00>91.10(+)CE:-20.0