2024年大学试题(医学)-生物制药工艺学历年高频考点试卷专家荟萃含答案

2024年大学试题(医学)-生物制药工艺学历年高频考点试卷专家荟萃含答案（图片大小可自由调整）第1卷一.参考题库(共25题)1.动物细胞大规模培养的方法有哪些？各自的特点是什么？ 2.两步发酵工艺逐渐在国内生产企业普遍采用，两步发酵生产维生素C可以分为（）、（）和（）三大步骤。3.简述具有生物活性DNA的制备过程。4.红霉素是（），在中性和酸性条件下呈（），所以可以用离子交换法进行提取。5.苯甘氨酸无水酰化路线的生产工艺的原理是，以（）为原料，进行（）；将7-ADCA与三甲基氯硅烷反应得到二硅烷基化的产物。6.ADCC是（）依赖的（）介导的细胞毒作用。7.简述生物活性物质的存在特点。 8.IgG是唯一能通过（）的抗体。9.疏水相互作用色谱的原理是什么？其常用载体及配基是什么？ 10.下面哪种方法不能用于对凋亡细胞的检测（）。A、透射电镜观察B、HE染色C、台盼蓝染色D、荧光显微镜观察11.氨基酸可通过（）或（）途径转变为糖或脂肪酸，间接提供能量。12.什么是胆汁酸？胆酸类药物的结构的基本骨架是什么？胆酸类药物的来源于哪里？13.与大肠杆菌和酵母系统相比，哺乳动物源细胞系统制药的优缺点，如何选择？ 14.环孢菌素A是微生物产生的（）。A、HMG-CoA还原酶抑制剂B、β-内酰胺酶抑制剂C、氨基糖苷类抗生素D、免疫抑制剂15.具有γ链的免疫球蛋白命名为（）。16.酶的纯化工艺的好坏主要看两个指标：一是（），二是（）。17.与氯霉素特点不符的是（）。A、口服难吸收B、易透过血脑屏障C、适用于伤寒的治疗D、骨髓毒性明显E、对早产儿、新生儿可引起灰婴综合症18.氨基酸一般溶于水、稀酸稀碱，不溶于乙醚、氯仿等有机溶剂，常用（）沉淀氨基酸。19.制药废水分为哪几种类型？有何特点？如何治理？20.生物制品根据其组成和用途可分为哪几类？21.容量因子22.什么是基因工程菌，工程菌构建的基本过程和各阶段的主要任务是什么，所涉及基因工程原理是什么？ 23.维生素C的生产工艺中，手性中心是如何实现的？24.固定化酶 25.出现下列情况，制药企业的产品不能出厂 （）。A、不合格成品B、未经检验的成品C、未出具检验报告的成品D、检验合格的成品E、已超过有效期但仍符合法定标准的成品第2卷一.参考题库(共25题)1.对硝其－α－溴代苯乙酮的制备中水含量有何影响？为什么？ 2.制备氢化可的松哪步采用oppenaner氧化反应，机理是什么？ 3.生物活性物质主要有哪些提取方法？4.生化药物中药用酶类主要包括（）、（）、（）、（）。5.CHO培养生产rhEPO的基本工艺过程及其控制点是什么，为什么？6.简述天然提取法制备手性药物的一般步骤。7.克隆真核基因常用的方法是（）和（）。8.7-氨基头孢烷酸的工艺流程广泛利用的是（）。A、酶水解法B、化学裂解法C、A和BD、发酵9.干扰素纯化工艺过程中各工段的目的是什么？ 10.初级代谢产物11.试述影响工程制药酶活性的因素。12.紫杉醇难溶于（）。A、水B、甲醇C、二氯甲烷D、乙腈13.青霉素发酵工艺的建立对抗生素工业有何意义？14.简述糖类药物的分类、生理功能。 15.AQC 16.简述动物细胞培养基的主要成分及其作用。17.免疫球蛋白是指具有（）和（）与抗体相似的球蛋白。18.简述生物药物的分类。 19.血清中抗体特异性的高度不均一称为（）。20.大环内酯类抗生素的结构是以（）为母体，以（）键和1-3分子的（）相连接的一类抗生素物质。21.（）是在个体发育中最早合成的免疫球蛋白。22.目前用于制药的动物细胞有4类，即（）、（）、（）、（）。23.凝聚及絮凝的定义是什么？ 24.下列哪一个不属于兼性细胞（）。A、CHO细胞B、L929细胞C、淋巴细胞D、BHK细胞25.细胞破碎的方法及其原理是什么？选用原则是什么？第3卷一.参考题库(共25题)1.中国菌种保藏和管理中心主要有（）、（）、（）、（）。2.什么是人工免疫？人工免疫有哪两种方式？3.目标基因克隆的主要方法有哪些？分析其特点及其适用范围。 4.如何建立重组人红细胞生成素表达细胞？5.常用的重组人胰岛素制剂有哪些？6.下列关于抗体的描述错误的是（）。A、能与相应抗原特异性结合的具有特定功能的免疫球蛋白B、抗体都是免疫球蛋白C、在抗原的刺激下，淋巴细胞增值和分化，并分泌抗体D、免疫球蛋白都具有抗体活性功能7.理想的微载体具备的性能（）。A、质地较硬，耐高温，透明性，密度较低B、质地柔软，不耐高温，透明性，密度较高C、质地柔软，耐高温，透明性，密度较低D、质地柔软，耐高温，不透明性，密度较低8.简述目前氨基酸生产的主要方法。9.免疫球蛋白L链N端1/2，H链N端1/4或1/5的肽段，称为（）区。10.培养基11.分泌片由（）细胞分泌，分子量为70KD。12.简述多糖的提取纯化方法。 13.简述固定化细胞的特点？14.根据细胞的传代次数和寿命，细胞系可分为（）、和（）或（）。15.简述生物活性物质提取时，活性物质的保护措施？16.属于生物次级代谢产物的药物是（）。A、维生素B、抗生素C、核苷酸D、氨基酸17.维生素及辅酶类药物的一般生产方法包括（）。A、化学合成法B、酶法C、发酵法D、直接从生物材料中提取18.生物制品 19.下面不属于半合成抗生素的是（）。A、头孢菌素B、青霉素C、舒巴坦D、阿奇霉素20.药品生产的工艺规程必须遵循（）的原则。21.赖氨酸发酵培养基有碳源、（）、（）、无机盐和微量元素组成。22.简述链霉素提取和精制的工艺过程。 23.抗体的独特型决定簇位于（）。A、VL+CLB、VH+CH1C、VH+VLD、CH1+CH224.（）不是主要维生素的生产方式。A、转基因技术B、化学合成C、天然提取D、微生物发酵25.制备型高效液相色谱的重要参数：（）、（）、（）、（）。第1卷参考答案一.参考题库1.参考答案:1）单层贴壁培养优点：容易更换培养液，灌注培养时，能达到高细胞密度；有利于产物的分泌表达，可改变培养液与细胞的比例。缺点：操作较繁杂，检测受到限制，培养条件难以均一，传质和传氧差，放大培养是瓶颈2）悬浮培养优点：操作简单，培养条件相对均一，传质和传氧较好，容易放大培养。缺点：细胞体积小，密度低，培养病毒易失去标记而降低免疫能力3）微载体培养优点：细胞生长的环境均一，培养基利用率高，重复性好，减少了劳动强度，容易放大，兼具贴壁和悬浮培养的双重优点4）固定化培养优点：细胞密度高、抗剪切力和污染，生产首选2.参考答案:发酵；提取；转化3.参考答案: 4.参考答案:碱性化合物；阳离子5.参考答案:甘氨酸；二次酰基化6.参考答案:抗体；细胞7.参考答案:生物活性物质在生物体材料中含量较低，杂质含量很高，而且生理活性愈高的成分，含量往往愈低。目的物难分离纯化、易失活，制造过程中应把防失活放首位。8.参考答案:胎盘9.参考答案: （一）蛋白质的疏水性 疏水区占总表面的比例越大，疏水性越强。 （二）疏水相互作用 蛋白质疏水部位与疏水配基产生亲和作用。 相似相溶。 （三）利用疏水相互作用分离物质 无机盐能使蛋白质疏水区与介质疏水基团相互作用力增强。 （四）特点 分离条件温和、不损伤蛋白质活性、分离效率高以及柱容量大等优点。 载体： 多糖（琼脂糖） 硅胶（表面包被高分子材料） 配基： 配基通过非离子键与基质结合。 具有弱疏水性，烷基和芳香基常用。 配基碳链长度在C4-C8之间。10.参考答案:C11.参考答案:生糖；生酮12.参考答案: 人及动物体内存在的胆酸类物质是由胆固醇经肝脏代谢产生，通常与甘氨酸或牛磺酸形成结合型胆酸，总称胆汁酸。 胆酸类药物的结构的基本骨架：甾核。 胆酸类药物来源：存在于许多脊椎动物胆汁中，牛、羊及狗胆汁中含量比较丰富，以结合型胆结酸形式存在。13.参考答案: C.HO细胞：Chinese hamster ovary，中国仓鼠卵巢，亚二倍体核型，2n=22。 特点：贴壁型生长，也可悬浮培养，对剪切力和渗透压有较高的忍受能力。最为普遍和成熟表达糖基化蛋白药物的细胞。多种衍生突变株，高表达。 B.HK-21细胞：成纤维样细胞，非整倍体，2n=44.用于增殖病毒、制备疫苗和重组蛋白。 C.127细胞，贴壁生长，适合于牛乳头病毒DNA载体的转化。 V.ero细胞：多倍体核型，贴壁依赖性。 V.ero6最为常用，增至病毒，生产疫苗。14.参考答案:D15.参考答案:IgG16.参考答案:酶比活；总活力回收率17.参考答案:A18.参考答案:乙醇19.参考答案: ①含悬浮物或胶体的废水。废水中所含的悬浮物一般可通过沉淀、过滤或气浮等方法除去。是废水的常规预处理程序。气浮法的原理：利用高度分散的微小气泡作为载体去粘附废水中的悬浮物，使其密度小于水（相对密度<1）而上浮到水面，从而实现固液分离。对于悬浮物质：用沉淀、气浮、过滤等方法去除。对于树脂状物：由于不易上浮和沉淀，须采用辅助手段（如通入压缩空气、直接蒸汽加热、加入无机盐等）使悬浮物聚集起来沉淀或气浮分离。对于极小胶体：可用混凝法或吸附法处理。 ②含酸碱性废水。化学制药过程中常排出各种含酸或碱的废水，其中以酸性废水居多。含酸浓度高的废水——应考虑尽量回收利用及综合利用，如利用废硫酸制作磷肥等。含酸（碱）1%以下而没有经济价值的废水——经中和后才能排放，以免腐蚀排水管道，危害水中生物。中和时，尽量采用废碱或废酸，也可考虑用氨水中和，然后用于灌溉。若中和后的废水水质符合国家规定的排放标准，可直接排入下水道，否则需进一步处理。 ③含无机物废水。药厂中常见的无机物是溶解于废水中的卤化物、氰化物、硫酸盐及重金属离子。稀释法——不含毒物且一时无法回收综合利用的无机盐废水。浓缩结晶法——单纯的无机盐废水。化学处理法——剧毒的氰化物、氟化物废水。化学沉淀法——重金属废水（汞、铜、铬等）形成碳酸盐、氢氧化物、硫化物等。 ④含有机物废水。此类废水中所含的有机物一般为原辅材料、产物和副产物等。在进行无害化处理前，应尽可能考虑回收和综合利用。常用的回收和综合利用方法有蒸馏、萃取和化学处理等。对于成分复杂、难以回收利用或者经回收后仍不符合徘放标准的有机废水，则需采用适当方法进行无害化处理。生物处理法——易被氧化分解的有机废水。沉淀、萃取、吸附——低浓度、不易被氧化分解的有机废水。焚烧法——浓度高、热值高、又难以用其它方法处理的有机废水。20.参考答案: 1、预防用生物制品——疫苗 2、治疗性生物制品 3、诊断用生物制品21.参考答案:是色谱分析中的重要参数，定义为溶质在固定相中的总摩尔数与流动相中总摩尔数之比。当色谱柱、溶剂和分离温度一定时，容量因子为常数。22.参考答案: 将目的基因导入细菌体内使其表达，产生所需要的蛋白的细菌称为基因工程菌。 工程菌构建的基本过程如下：目标基因克隆（PCR、文库筛选、化学合成）→表达载体构建（酶切、链接）→遗传转化与筛选（外源基因导入与培养）→工程菌（获得新形状、功能、产生物质） 酶切：在特异位点上催化双链DNA分子的断裂，产生相应的限制性片段。（DNA+缓冲液+限制性内切酶；37℃，1小时；加热、加EDTA终止；电泳检查酶切完整性） 链接：DNA双链上相邻的3’羟基和5’磷酸基团共价结合形成3’-5’磷酸二酯键，使原来断开的DNA缺口重新连接起来。（载体片段和基因片段，缓冲液，连接酶；16-26℃，数小时；70℃加热10min终止反应） 转化：把外源基因导入宿主细胞的过程。（氯化钙法向大肠杆菌导入外源基因）23.参考答案: 维生素C分子中含有两个手性碳原子，故有四个光学异构体。其中L（+）-抗坏血酸括性最高，D（-）-异抗坏血酸活性仅为其20％，工业上将其作为食品抗氧剂。D（-）-抗坏血酸和L（+）-异抗坏血酸几乎无活性。24.参考答案:固定化酶是指限制或者固定于特定空间位置的酶，具体来说，就是指经过物理、化学方法处理，使酶变成不易随水流失的固定化催化剂。25.参考答案:A,B,C第2卷参考答案一.参考题库1.参考答案:水分存在时与溴化氢反应，诱导其延长或基本不起反应，因此对硝基苯乙酮溴代反应时，水分存在不利于反应，必段严格控制溶剂的水份。2.参考答案:第二步制备环氧黄体酮时采用oppenaner氧化反应；机理：环氧化物上的醇羟基易被氧化为酮，具有很强的专一性。3.参考答案: 常用的提取方法： 1）水溶液提取 各种水溶性、盐溶性的生物活性物质可以利用水或烯酸、稀碱、稀盐溶液进行提取，这类溶剂提供了一定的离子强度、PH值及相当的缓冲能力。 2）表面活性剂提取 表面活性剂既有亲水基团又有疏水基团，在分布于水-油界面时有分散、乳化和增溶作用。 3）有机溶剂提取 对于水不溶性的脂类、脂蛋白、膜蛋白结合酶等，可采用有机溶剂进行提取。常用的有机溶剂有乙醇、丙酮、丁醇等。4.参考答案:促进消化酶类；消炎酶类；抗肿瘤酶类；与纤维蛋白溶解作用有关的酶类5.参考答案: ①复苏：液氮冻存的CHO细胞系在37℃中水浴快速融化。无菌离心，弃上清。 ②培养：加适量DMEM（10%小牛血清），37℃、CO2培养箱培养，连续传三代。 ③消化：用胰蛋白酶消化贴壁细胞后，制成细胞浓度约为2.5×106个/ml。用于接种。 ④反应器灭菌：加纤维素载体片及pH7.0的PBS缓冲液，高压灭菌。 ⑤接种：排出PBS缓冲液，加DMEM培养基（含10％血清），接入种子细胞。 ⑥贴壁培养：pH7，<50r/min，37℃，DO50-80%。 ⑦扩增培养：80－100r/min。pH7，37℃。 ⑧灌流培养：控制温度、DO、pH值等培养条件，进行无血清培养基连续培养。 ⑨收获培养物：连续收获，4℃－8℃保存。 控制点： ①搅拌控制：接种后，搅拌速度缓慢，使细胞贴附于载体上，随着细胞数量的增加逐渐提高搅拌速度。 ②温度控制：较为严格，恒定37℃ ③pH值控制：7.2-7.4，输入CO2和碳酸氢盐溶液维持其恒定。 ④溶解氧控制：在50-80％的范围内，通入氧气、空气、氢气或氮气的比例混合气体。 ⑤葡萄糖控制：流加补料 ⑥代谢废物控制：监测铵、乳酸盐类等，维持较低浓度，减少对细胞损害。6.参考答案: ①酶法分析 ②酶催化的还原反应 ③酶催化的氧化反映 ④酶催化的不对称合成反应 ⑤酶催化的转氨基化作用7.参考答案:逆转录法；化学合成法8.参考答案:B9.参考答案:①溶解粗干扰素：配置缓冲液（超纯水，pH7.5磷酸缓冲液，0.45μm滤器和10ku超滤系统，百级层流下收集），冷却至2-10℃。在均浆器中完全溶解粗干扰素。②等点沉淀与疏水层析：磷酸调节至pH5.0，沉淀杂蛋白，离心收集上清液（含有人干扰素）。用NaOH调节上清液pH7.0，并用5M NaCl调节溶液电导值180ms/cm，上样，进行疏水层析，利用干扰素的疏水性进行吸附。在2-10℃下，用0.025M磷酸缓冲液（pH7.0）+1.6M NaCl进行洗涤，除去非疏水性蛋白。用0.01M磷酸缓冲液（pH8.0）进行洗脱，收集洗脱液，干扰素。或②等电点沉淀与盐析：磷酸调节pH4.5，调节电导值40 ms/cm，2-10℃静置过夜，除杂蛋白。1000ku超滤膜过滤，除去大蛋白。调整溶液pH8.0，10ku超滤膜，0.005M缓冲液。③阴离子交换层析与浓缩：0.01M磷酸缓冲液（pH8.0）平衡树脂，盐浓度线性梯度5~50ms/cm进行洗脱，2-10℃，配合SDS收集干扰素峰。把目标馏分合并，调整溶液pH和电导值，10ku超滤膜，0.05M醋酸缓冲液（5.0）中透析。④阳离子交换层析与浓缩：用0.1M醋酸缓冲液（pH0.5）平衡树脂。上样，相同缓冲液冲洗。盐浓度线性梯度5-50ms/cm进行洗脱，配合SDS收集干扰素峰。合并馏分，10ku超滤膜系统。⑤凝胶过滤层析：0.15M NaCl的0.01M磷酸缓冲液（pH7.0）清洗系统和树脂。上样，相同洗脱液进行洗脱。合并干扰素部分。⑥无菌过滤分装：0.22μm膜过滤干扰素溶液，分装，-20℃以下的冰箱中保存。10.参考答案:微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质11.参考答案:① 底物浓度的影响 ② 酶浓度的影响 ③ 温度的影响 ④ pH的影响 ⑤ 激活剂和抑制剂12.参考答案:A13.参考答案: 青霉素是发现最早，最卓越的一种B-内酰胺类抗生素，它是抗生素工业的首要产品，青霉素是各种半合成抗生素的原料。青霉素的缺点是对酸不稳定，不能口服，排泄快，对革兰氏阴性菌无效。青霉素经过扩环后，形成头孢菌素母核，成为半合成头孢菌素的原料。14.参考答案:糖类的分类方法有很多种，根据其分子构成一般分为单糖、双糖、多糖。糖类的生理功能：（1）供给能量这是糖类最重要的生理功能。糖类产热快，供能及时，价格最便宜。每克糖类能提供16.7kJ（4.0kcal）的能量，而脑神经及神经组织只能靠血液中的葡萄糖供给能量，如果血糖过低，可出现昏迷、休克和死亡。（2）构成机体的重要物质所有的神经组织和细胞中都含有糖类，作为控制和代替遗传物质的基础，脱氧核糖核酸和核糖核酸都含有核糖。 （3）节约蛋白质当机体供能不足时，可动用蛋白质和脂肪代谢产生的能量来弥补，如果膳食镇南关提供了足够能量的糖类，这样就可以节省蛋白质，而且摄入蛋白质的同时摄入糖类，有利于氨基酸的活化和三磷腺甘的形成，从而有利于蛋白质的合成，增加体内氨储留。营养学上称此为糖类对蛋白质的节约作用。（4）抗生酮作用脂肪在体内氧化要靠糖类供给能量，当糖类供给不足或因疾病（糖尿病）不能利用糖类时，机体所需要的热能大部分由脂肪供给，而脂肪在缺少糖类是，氧化不完全，会产生酮体。酮体是一种酸性物质，在体内积存过多可引起身体疲劳、促进衰老，甚至引起酸中毒，所以酮体对人体的危害是非常大的，如果糖类供应充足，脂肪完全可进行氧化，不会产生酮体。（5）保肝解毒当肝糖原及葡萄糖充足时，肝对某些化学物质如四氧化碳、砷及酒精等多种有毒物质有较强的解毒能力，对各种细菌感染引起的毒血症也有较强的解毒作用。15.参考答案:是检验分析结果的质量，是科学管理实验室的一种方法。16.参考答案: 动物细胞培养基的成分主要有糖类、氨基酸、维生素与无机盐、激素及附加成分。 作用：糖类提供细胞生长的碳源和能源。分解后释放出能量ATP。氨基酸可通过生糖或生酮途径转变为糖或脂肪酸，间接提供能量。维生素既不是细胞的物质基础，也不是能量物质，对代谢和生长起调节和控制作用。 无机盐是细胞代谢所需酶的辅基，同时保持细胞的渗透压和缓冲PH的变化。激素对细胞的生长有刺激作用。贴附因子的作用是让细胞的贴壁生长。17.参考答案:抗体活性；化学结构18.参考答案: 按生理功能和用途分类： （1）治疗药物：对疑难杂症如肿瘤、爱滋病、免疫性疾病、内分泌障碍等具有特殊的作用； （2）预防药物：对传染病的预防； （3）诊断药物：免疫诊断试剂、单克隆抗体诊断试剂、酶诊断试剂、放射性诊断药物和基因诊断药物等；某些生物活性物质亦是检测疾病的指标，如谷草转氨酶等； （4）其它生物医药用品：生物药物在其他方面应用也很广泛：如生化试剂、保健品、化妆品、食品、医用材料等。 按原料的来源分类： （1）人体组织来源的生物药物：主要有人血液制品类、人胎盘制品类、人尿制品类； （2）动物组织来源的生物药物：动物的脏器、其他小动物制得的药物如蛇毒、蜂毒等。 （3）植物组织来源的生物药物：中草药、有效成分； （4）微生物来源的药物：抗生素、酶、氨基酸、维生素等； （5）海洋生物来源的药物。19.参考答案:异质性20.参考答案:大环内酯基团；苷；糖衍生物21.参考答案:IgM22.参考答案:原代细胞系；二倍体细胞系；异倍体细胞系；融合或重组的工程细胞系23.参考答案:在某些电解质作用下，使扩散双电层的排列电位降低，破坏胶体系统的分散状态，而使之凝聚的过程。某些高分子絮凝剂存在下，在悬浮粒子之间产生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程。24.参考答案:C25.参考答案: （一）机械法 特点：处理量大、破碎效率高、速度快、工业上常用手段。 原理：挤压、剪切 （二）非机械法 化学法；酶解法；物理法。 细胞破碎的一般原则：若提取的产物在细胞质内，需用机械破碎法；若在细胞膜附近则可用较温和的非机械法；若提取的产物与细胞膜或壁相结合时，可采用机械法与化学法相结合的方法，以促进产物溶解度的提高或缓和操作条件，但保持产物的释放率不变。第3卷参考答案一.参考题库1.参考答案:中国典型培养物保藏中心；中国科学院典型培养物保藏委员会；中国普通微生物菌种保藏管理中心；抗生素菌种保藏管理中心2.参考答案:人工免疫是人为地给机体输入抗原以调动机体的免疫系统，或直接输入免疫血清，使获得某种特殊抵抗力，用以预防或治疗某些疾病者。人工免疫的两种方式：（1）人工主动免疫；（2）人工被动免疫。3.参考答案: ①PCR扩增。 优点：简便快速，高效，数kb单基因克隆。 缺点：DNA聚合酶活性和保真性限制。（94℃变性→55℃退火→72℃延伸→94℃变性……） ②文库筛选。 优点：长片段，无碱基错误，位置序列基因克隆。 缺点：繁琐，过程复杂，耗时，昂贵。 ③化学合成：简便，准确，已知序列基因克隆，引物合成。 缺点：受合成仪性能限制，长度很短。4.参考答案:①构建红细胞生成素表达载体有两种方式获得编码人红细胞生成素基因。一种是提取胎肝染色体DNA，然后以特异性寡核苷酸为引物，经聚合酶链式反应扩增出人红细胞生成素的基因片段，然后与克隆载体连接，克隆基因。另一种是提取人胎肝mRNA，逆转录合成cDNA文库，进行文库筛选，得到人红细胞生成素基因。②构建表达红细胞生成素的细胞株以二氢叶酸还原酶缺陷型的中国仓鼠卵巢细胞系为宿主细胞。将此细胞培养于100mm培养皿中，待细胞长满至50%～60%时，用无血清细胞培养基淋洗细胞，加入由5ml无血清培养基、10ugprEPO，10ugpDHFR，60ug脂质体组成的转染混合液，37℃培养4小时。吸出培养基，加入含10%胎牛血清的F12培养基，37℃培养过夜。随后在含青霉素、链霉素及10%胎牛血清的DEME中培养，获得抗性克隆。用胰酶消化，以1：5稀释细胞，在培养基中加入MTX至浓度为1nmol/L，继续培养10-14天，至抗性克隆出现。筛选抗性克隆。利用酶联免疫分析法确认所得到的细胞表达人红细胞生成素。5.参考答案: