生物技术实践-2021届高三生物模拟试卷分类汇编（10月刊）

专题19生物技术实践

54.(黑龙江省实验中学2020-2021学年高三8月阶段测试生物试题)高温淀粉酶在大规模

工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选出了能高效生产高温淀粉酶的嗜热菌，其

随

活

匚＞

测

(1)I号培养基从物理状态来看，属于固体培养基，配制时要加入作为凝固剂，

平板冷凝后要将平板放置。

(2)配制固体培养基的基本步骤是。

A.计算、称量、倒平板、溶化、灭菌

B.计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

C.计算、称量、溶化、灭菌、倒平板

D.计算、称量、灭菌、溶化、倒平板

(3)溶化时，烧杯中加入琼脂后要不停地,防止琼脂糊底引起烧杯破裂。对培养基

灭菌的方法一般为o

(4)①过程是②过程所使用的接种方法是法。

(5)部分嗜热菌在I号培养基上生长时可释放分解培养基中的淀粉，在菌落周围

形成透明圈，挑选相应的菌落，接种到n号培养基上进一步分离纯化后，再对菌种进行扩大

培养。

(6)微生物的菌种保藏可以采用临时保藏法——将菌种接种到试管的培养基上,

在e的冰箱中，每隔3-6个月转接种。

【答案】(1).琼脂(2).倒过来(3).C(4).搅拌(5).高压蒸汽灭菌法

(6).稀释(7).稀释涂布平板(8).淀粉酶(9).固体斜面(10).4

【解析】

【分析】

1、分析题图：①过程是梯度稀释，②过程是稀释涂布平板法接种，目的是筛选单菌落。从

功能上看，I号培养基属于选择培养基；从物理状态上来说，1号培养基属于固体培养基。

2、微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接

种，划线，在恒温箱里培养.在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，

菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释

后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

【详解】（1）I号培养基从物理状态来看，属于固体培养基，配制时要加入琼脂作为凝固剂,

平板冷凝后要将平板倒过来放置，以防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。

（2）配制固体培养基的基本步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，C正确。故选C。

（3）溶化时，烧杯中加入琼脂后要不停地搅拌，防止琼脂糊底引起烧杯破裂。对培养基灭

菌的方法一般为高压蒸汽灭菌法。

（4）分析题图可知，①过程是梯度稀释，目的是对样品进行稀释；②过程是用稀释涂布平

板法进行接种。

（5）分解淀粉的嗜热菌在I号培养基上生长时可释放淀粉酶，分解培养基中的淀粉，在菌

落周围形成透明圈，透明圈越大淀粉酶的活性越强，所以要从中挑出透明圈大的菌落，接种

到H号培养基上进一步分离纯化后，再对菌种进行扩大培养。

（6）微生物的菌种保臧可以采用临时保臧法——将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，

在4°C的冰箱中，每隔3-6个月转接种。

【点睛】本题考查微生物选择、培养、利用等相关知识，意在考查学生从材料中获取相关的

生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题。

14.（湖南省长沙市长郡中学2020-2021学年高三入学摸底考试生物试题）玉米经深加工后可

用于生产酒精、玉米胚芽油、葡萄糖等产品（流程如下）。下列相关叙述错误的是（）

K米

A.玉米胚芽油易溶于有机溶剂，可选用萃取法提取

B.水解玉米秸秆纤维素的醐是一种复合酶，其中Cx酶的作用是将纤维二糖分解成葡萄糖

C.探究水解玉米淀粉的酶的最适用量时，需保持温度、pH、加入的淀粉量等无关变量相同

且适宜

D.纤维素分解菌可用于玉米秸秆还田，鉴别纤维素分解菌可用刚果红染色法

【答案】B

【解析】

【分析】

1、刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理：刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的

多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当我们在含

有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。纤维素

分解菌能分解纤维素，会形成以分解菌为中心的透明圈，这样，我们就可以通过是否产生透

明圈来筛选纤维素分解菌。

2、纤维素酶是一种复合酶，包括Ci酶、Cx酶、葡萄糖甘酶，其中Ci、Cx酶可使纤维素分

解为纤维二糖，葡萄糖甘酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。

【详解】A、玉米胚芽油易溶于有机溶剂，可选用萃取法提取，A正确；

B、纤维素酶是一种复合酶，它至少包括三种组分，即Ci酶、Cx酶和葡萄糖甘酶，其中葡

萄糖甘酶的作用是将纤维二糖分解成葡萄糖，B错误；

C、为避免浪费，需对催化玉米淀粉水解的酶的最适用量进行探究，实验的自变量是酶的用

量，淀粉的水解量为因变量，无关变量有温度、pH、加入的淀粉量、反应时间等，C正确;

D、鉴别纤维素分解菌时用刚果红染色法，培养基上的菌落周围会形成透明圈，D正确。

故选Bo

【点睛】本题考查纤维素分解菌筛选的原理、酶最适用量的探究实验等知识，意在考查考生

对所学知识的识记和理解能力。

20.（湖南省长沙市长郡中学2020-2021学年高三入学摸底考试生物试题）表中生物工程实验

选择的材料与实验目的搭配合理的是（）

组

实验目的实验材料材料特点

别

获得生产人生长激素的转基因

A乳腺细胞分泌乳汁将相应产物排出体外

动物

分生区附近病毒极少，甚至不含病

B获得脱毒苗茎尖

毒

C获得植物突变体愈伤组织细分裂能力强，易诱发突变

胞

囊胚内细胞

D胚胎干细胞培养能分化形成各种组织和器官

团

A.AB.BC.CD.D

【答案】BCD

【解析】

【分析】

囊胚的内细胞团细胞属于胚胎干细胞，具有很强的分裂能力，可以用胚胎干细胞培养；采用

基因工程技术培养乳腺生物反应器时，受体细胞是受精卵，因为受精卵全能性最高。

【详解】A、采用基因工程技术培养乳腺生物反应器时，受体细胞是受精卵而不是乳腺细胞,

因为受精卵全能性最高，A错误；

B、植物分生区附近(如茎尖)含病毒极少，甚至不舍病毒，因此可采用茎尖组织培养技术

获得脱毒苗，B正确；

C、愈伤组织分裂能力强，易发生突变，容易获得突变体，C正确；

D、囊胚的内细胞团细胞具有很强的分裂能力，可以用于胚胎干细胞培养，进而诱导培养成

各种组织和器官，D正确。

故选BCD。

25.近期冷泉港实验室专门为城市农业培育了像葡萄一样的小番茄，这种小番茄也适合在太

空种植。科学家利用基因突变将控制生长的终止基因(SP)改造为SP1基因，利用基因敲

除(将同源DNA片段导入受体细胞，使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段)的

方法使小番茄的成熟期缩短为40天。如图为SP基因两端的序列和质粒中相关的序列，已知

限制酶I的识别序列和切点是一G2ATCC,限制酶II的识别序列和切点是-GATC。

CCTA<M""'E"E""CTAG

力,.„陋Cicnc1和《knell衣东四种标记选冈

Gene肉后#"腌0|Q-示奴制“仪」的识别序列放大

回答下列问题：

(1)除限制酶以外，基因工程中常用的工具还有__________。在上述实例中，为了便于重

组和筛选，需使用分别切割目的基因和质粒0质粒中标记基因的作用是

(2)利用物理因素和化学因素处理SP基因可，使筛选出SPi基因的概率增大。

可利用技术扩增SPi基因，将搭载SPi基因的重组质粒导入植物细胞的方法有

____________(答出两种)。

(3)利用SPi基因敲除SP基因属于生物变异中的,SPi基因成功表达的个体

生物学水平鉴定标准为。

【答案】(D.DNA连接酶、运载体⑵.限制酶I［和限制酶I⑶.鉴别受体细胞

中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来(4).诱发SP基因突变

(5).PCR(6).农杆菌转化法、基困枪法、花粉管通道法(7).基因重组(8).小番

茄的成熟期约为40天

【解析】

【分析】

基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目

的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。

在获取目的基因时，需要用到限制酶；构建基因表达载体时，还需要用到DNA连接酶和运

载体。作为运载体，要有合适的限制酶切割位点，具有复制原点，有启动子和终止子，还需

要有标记基因。

将目的基因导致受体细胞时，依据操作对象不同而采用不同的方法，对于植物采用农杆菌转

化法、基因枪法、花粉管通道法，对于动物常用显微注射法，对微生物常用Ca2+处理然后

再进行转化。

目的基因的检测与鉴定分三个方面：一是用DNA分子杂交检测目的是否导入受体细胞；二

是检测目的基因是否转录，用DNA-RNA分子杂交；三是个体水平的检测，检测受体生物

是否表达出相应的性状。

【详解】⑴基因工程的工具有限制酶、DNA连接酶、运载体。限制酶I的识别序列和切点

是一G2ATCC,限制的II的识别序列和切点是一IGATC,限制酶II能识别并切割限制前I

的识别序列，所以切割质粒时，只能用限制酶I,因为限制前II能将质粒切割成两段。切割

目的基因里，需要将两端都切割，选用限制酶n即可。标记基因可随重组运载体一起进入

受体细胞，使受体细胞获得标记基因所控制的性状，根据标记基因的有无，可将含有重组运

载体(即含有目的基因)的受体细胞筛选出来。

⑵物理因素和化学因素处理SP基因可导致发生基因突变。增加目的基因时，可采用PCR技

术扩增目的基因。将重组质粒导入植物细胞的方法有农村菌转化法、基因枪法和花粉管通道

法。

⑶利用SP|基因敲除SP基因，并未改变基因的结构，而是将整个基因插入，使目的基因与

染色体上原有基因进行了重新组合，属于基因重组。SP1基因能够缩短缩短小番茄的成熟时

间，若成功表达，则小番茄的成熟期约为40天。

【点睛】在构建基本的表达载体时，必须选择合适的限制酶。要能够将运载体切开，形成与

目的基因连接的缺口，但要注意不能将运载体切成两段，会导致目的基因无法与运载体正确

连接。选择限制酶时，要保证至少保留一个完整的标记基因以便进行筛选。

45.（吉林省白城市通榆县一中2020-2021学年高三上学期第一次月考生物试题）某科研小组

研究发现，若长期使用杀虫剂S（一种有机磷农药）可造成其在土壤中严重残留，而木霉能

有效将其降解。请分析回答下列问题：

（1）木霉可用加入作为唯一碳源的（按用途分）培养基

加以分离。

（2）配制培养基还需满足木霉对pH的需求，应在灭菌_____________（填“前”或"后”）调

节pH。探究木霉降解杀虫剂S的适宜pH,可向含有等量木霉、不同pH的培养基中分别加

入等量杀虫剂S,几天后检测O

（3）配制好的培养基应在适宜的环境中放置一段时间，观察培养基上______________,以

判别培养基是否被污染。欲测定木霉的数目，可用计数板直接计数。若将

100mL含木霉的土壤样液稀释1伊倍，取0.1mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测

得菌落数的平均值为121个（空白对照组无污染），则原来的100mL样液中含有木霉

个，而原土壤样液中的实际值与计算值相比会。（偏大、偏小

或相等）

【答案】（1）.杀虫剂S（2）.选择（3）.前（4）.杀虫剂S的残留量（5）.是

否产生菌落（6）.血细胞（血球）（7）.1.21x1010（8）.偏大

【解析】

【分析】

1.选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设

计的培养基。具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。

2.微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，

划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数

逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，

均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。其中，稀释涂布平板法可用于计数活菌。

【详解】（1）要分离出能降解杀虫剂S的木霉，需要以杀虫剂S作为唯一碳源培养基，在

该培养基上只有能降解杀虫剂s的木霉能生存，其它微生物都不能生存，因此该培养基属

于选择培养基。

（2）培养基在灭菌前应调节pH值。探究木霉降解杀虫剂S的适宜pH。可向含有等量木霉,

不同pH的培养基中分别加入等量杀虫剂S,该实验的自变量是pH值，因变量是杀虫剂S

的含量，所以几天后检测杀虫剂S的残留量。

（3）判别培养基是否被污染需要将空白培养基在在适宜的环境中放置一段时间，观察培养

基上是否有菌落产生，若没有菌落产生则培养基没有被污染，否则被污染。测定木霉的数目，

可用血细胞计数板直接计数，也可以使用稀释涂布平板法计数。根据题干信息可知100mL

样液中木霉的数目为121+0.1x100x105=1.21x101。个，培养基上的菌落可能是由两个或多个

细胞繁殖的后代形成的，所以原土壤样液的实际值一般会比计算值偏大。

【点睛】本题主要考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的基本成分、种类及功能;

识记接种微生物常用的两种方法，掌握微生物计数的方法。

11.（吉林省长春外国语学校2020-2021学年高三上学期期初考试生物试题）请回答以下与微

生物实验室培养有关的问题：

（1）上图是利用法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步

分散到培养基的表面。

（2）在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是,若培养基需调节pH,则应

在灭菌之（填"前"或"后"）调节。

（3）在培养过程中，关键。

（4）如图为接种后的示意图，在划线接种的整个操作过程中，对接种环至少需要进行

次灼烧灭菌。接种后盖上皿盖，将平板放入恒温箱中培养，这样放置的

目的是o

（5）用稀释涂布平板法统计活菌数目时，每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目，最后选

取作为结果，这样可以防止因培养时间不足而遗漏菌落

的数目。

【答案】（1）.平板划线（2）.稀释（3）.琼脂（4）.前（5）.防止外来杂菌的

污染（6）.6（7）.倒置（8）.避免培养基被污染和防止培养基水分过快挥发（9）.

菌落数目稳定时的记录

【解析】

【分析】

图中接种的方式是平板划线法.平板划线法是将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板，

用接种环沾取少量待分离的材料，在培养基表面平行或分区划线，然后，将培养皿放入恒温

箱里培养.在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最

后可能形成纯种的单个菌落。

培养基配置的步骤：计算-称量-溶解-灭菌-倒平板.

【详解】（1）上图使用了接种环，所以采用平板划线法进行接种；把聚集的菌种逐步稀释分

散到培养基表面。

（2）固体培养基中常用凝固剂是琼脂；应该在灭菌之前调节pH。

（3）微生物的培养过程中，关键是要做到防止外来杂菌的污染。

（4）图中一共划线5个区域，每次划线之后都要灼烧接种环，同时接种之前也要灼烧，所

以一共进行6次灼烧；为了防止培养基被污染和防止培养基水分过快挥发，所以培养时需要

将平板倒置放入恒温箱中。

（5）统计菌落数目时，需要选取菌落数目稳定时作为记录的结果。

【点睛】本题以培养基的配方为载体，考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求考生掌

握微生物分离与纯化的两种方法和培养基配置的步骤。

（钦州一中2021届高三8月月考理科综合）11.回答与胡萝卜有关的问题：

（1）胡萝卜含有的胡萝卜素中，根据将胡萝卜素分为三类，最主要的是P•胡

萝卜素，该胡萝卜素在人体内可以转变成两分子o

（2）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，通常在萃取前要将胡萝卜粉碎和,以提高萃取

效率：水蒸气蒸储法不适合胡萝卜素的提取，原因是。

（3）现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂，应选用其中的作为胡萝卜素的萃取剂，萃

取的效率主要取决于。

（4）鉴定萃取物中是否含有胡萝卜素时，通常可采用法。

【答案】（1）.碳碳双键（2）.维生素A（3）.干燥（4）.水蒸气蒸储法适用于分

离挥发性物质，而胡萝卜素为非挥发性物质，不能随水蒸气蒸储出（5）.乙酸乙酯（6）.

萃取剂的性质和用量（7）.纸层析

【解析】

【分析】

1.提取胡萝卜素的提取流程为：胡萝卜-粉碎-干燥-萃取-过滤-浓缩-胡萝卜素。胡萝卜素常

用来总量因缺乏维生素A引起的疾病。

2.胡萝卜素的提取：

（1）胡萝卜素的性质：胡萝卜素是橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙

醇，易溶于石油酸等有机溶剂。

（2）胡萝卜素的提取来源：提取天然胡萝卜素的方法主要有：一是从植物中提取；二是从

大面积养殖的岩藻中荻得；三是利用微生物的发酵生产.

（3）萃取剂：最适宜作胡萝卜素萃取剂的是石油酸。

（4）实验流程：胡萝卜一粉碎一干燥一萃取（石油酸）一过滤_一浓缩一胡萝卜素一鉴定

（纸层析法）。

（5）胡萝卜素常用来治疗因缺乏维生素A引起的疾病；还是常用的食品色素；还具有使癌

变细胞恢复为正常细胞的作用。

【详解】（1）胡萝卜含有的胡萝卜素中，根据碳碳双键，胡萝卜含有的胡萝卜素中，最主要

的是胡萝卜素，该胡萝卜素在人体内可以转变成两分子维生素A,后者缺乏会引起人在

弱光下视物不清的病症，该疾病称为夜盲症，胡萝卜素是非挥发性物质。

（2）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，通常在萃取前要将胡萝卜粉碎和干燥，以提高萃取效率:

水蒸气蒸储法不适合胡萝卜素的提取，原因是水蒸气蒸播法适用于分离挥发性物质，而胡萝

卜素为非挥发性物质，不能随水蒸气蒸播出。

（3）现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂，应选用其中的乙酸乙酯作为胡萝卜素的萃取剂，乙酸

乙酯沸点比较高，萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和用量。

（4）鉴定萃取物中是否含有胡萝卜素时，通常可采用纸层析法。

【点睛】本题考查植物有效成分的提取的有关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知

识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题

的能力。

(桂林十八中18级高三第一次月考考试试卷理科综合)11.枯草芽抱杆菌产生的蛋白酶在

医药和化工等领域具有重要的价值。为筛选蛋白酶产量高的枯草芽泡杆菌菌株，分别将浸过

不同菌株的提取液(a-e)及无菌水⑴的无菌圆纸片置于平板培养基表面，在37七恒温箱中放

置2-3天，结果如图1。请回答问题：

⑴在筛选枯草芽抱杆菌蛋白酶高产菌株时，培养基营养成分应包括水、无机盐、生长因子、

葡萄糖、一。培养枯草芽抱杆菌时，常用摇床进行振荡培养，目的是o

(2)a-e中蛋臼酶产量最高的菌株是—(用字母回答)，判断依据是一。

涂上蛋白,经煮沸的

灭*后郎界”中而法度的膜的皎片洗衣希溶液

蛋白质导致培养“不透明

图1图2

(3)利用凝胶色谱法分离提取到部分蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、

浓度为20mmol/L的到适当高度进行洗脱，结果先洗脱出来的是的

蛋白质。

(4)质监局为了检验标有含该蛋白酶的加酶洗衣粉质量，设计了如图2所示实验。如果实验

结果是一，则说明该洗衣粉中含有蛋白醐。若用该实验来判断此酶活性大小可通过观察

一实现。

【答案】(1).蛋白质(酪蛋白)(2).增加培养液中的溶氧量并使菌株与培养液充分

接触，有利于目的菌的生长繁殖(3).a(4).a周围的透明圈最大，说明其产生的蛋白

酶数量多或活性高(5).磷酸缓冲液(6).相对分子质量较大(7).A组胶片上的蛋

白膜消失，B组胶片上的蛋白膜未消失(8).胶片上的蛋白膜消失所需时间的长短(相同

时间内蛋白膜消失的面积)

【解析】

【分析】

培养基的成分：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子。

分离蛋白质的方法：凝胶色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对

分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部，路程较短，移动速度较快。

加酶洗衣粉指含有酶制剂的洗衣粉，常见的酶制剂有蛋白醒、脂肪酶、淀粉前和纤维素酶。

【详解】(1)蛋白酶高产菌株可以分解蛋白质，在筛选枯草芽抱杆菌蛋白的高产菌株时，培养

基营养成分应包括水、无机盐、生长因子、葡萄糖、蛋白质。培养枯草芽抱杆菌时，为了增

加培养液中的溶氧量并使菌株与培养液充分接触，有利于目的菌的生长繁殖，常用摇床进行

振荡培养。

(2)由图1可知，菌株a的透明圈最大，说明其蛋白酶含量高或活性高，故a的蛋白酶的产量

最高。

(3)利用凝胶色谱法分离提取到的部分蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、

浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液到适当高度进行洗脱，由于相对分子质量较大的蛋白质无法

进入凝胶内部，路程较短，移动速度较快，故最先洗脱出来。

(4)图2中，自变量是洗衣粉是否煮沸，因变量是观察蛋白膜的消失时间。若洗衣粉中含有

蛋白酶，加热煮沸后会导致蛋白酶变性失活，蛋白膜不会消失，故结果是A组胶片上的蛋

白膜消失，B组胶片上的蛋白膜未消失。本实验可以通过观察胶片上的蛋白膜消失所需时间

的长短来判断酶活性的大小，酶活性越强，蛋白膜消失所需的时间越短。

【点睛】蛋白酶分解菌培养在含蛋白质的培养基中，蛋白酶的含量越高，活性越强，则分解

蛋白质产生的透明圈越大。

(钦州一中2021届高三开学摸底考试理科综合)11.某兴趣小组为了检测某品牌酸奶中乳

酸杆菌数量，进行了如图所示的实验操作。回答下列问题。

(1)配制培养基时，培养基中的碳源是指。对未倒

平板前的空培养皿进行灭菌的常用方法是法。

(2)图示实验中进行接种的方法叫做法，①过程中10g酸奶相当于被稀释了

,倍。若培养基灭菌合格，培养适宜时间后A、B、C三个培养皿中的乳酸菌菌落数依次

为45、48、42个，则该品牌酸奶中每10g样品中的乳酸杆菌数量约为个。

（3）接种过程应在酒精灯火焰旁进行，目的是o

（4）培养乳酸杆菌时，培养皿需置于无氧环境中培养，原因是。

【答案】（1）.能为微生物的生长提供碳元素的物质（2）.干热灭菌（法）（3）.稀

释涂布平板（法）（4）.10（5）.4.5x108（6）.防止杂菌污染（7）.乳酸菌是厌

氧菌，需在无氧条件中才能生存（受氧气抑制）

【解析】

【分析】

据图分析，图示为利用稀释涂布平板法对某品牌酸奶中乳酸杆菌数量进行计数的过程，图

中显示酸奶样品一共稀释了5次，每一次稀释10倍，最后取0.1mL涂布于A、B、C三个

平板上，据此分析答题。

【详解】（1）微生物培养基的主要成分包括碳源、氮源、水和无机盐，其中碳源指的是能为

微生物的生长提供碳元素的物质。

（2）图示为稀释涂布平板法的操作过程，根据以上分析已知，酸奶样品一共稀释了5次，

每一次稀释10倍，且三个培养皿的平均菌落数=（45+48+42）+3=45个，则每克样品中的

活菌数=平均菌落数x稀释倍数+涂布所用稀释液体积=45x105+0.1=4.5x107个，因此10g样品

中的总活菌数=4.5x107x10=4.5x108个。

（3）为了防止杂菌污染，接种过程应在酒精灯火焰旁进行。

（4）乳酸菌是厌氧菌，需在无氧条件中才能生存（受氧气抑制），所以培养乳酸菌时，培养

皿需置于无氧环境中。

【点睛】解答本题的关键是掌握微生物的培养与分离的相关知识点，了解微生物培养基的成

分、常用的接种方法，能够利用公式和题干数据计算乳酸菌的数量，并能够解释实验过程中

的无菌操作。

（河北省唐山市路北区H■•一中2020-2021学年高三入学检测）25.I回答下列与细菌培养相

关的问题。

（1）在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是（填蛋白陈、

葡萄糖或NaNCh）。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其

原因是。硝化细菌在没有碳源的培养基上（填能够或不能）生长，原因是

（2）用平板培养细菌时一般需要将平板（填倒置或正置）。

（3）单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征

来初步区分不同种的微生物，原因是o

n培养胡萝卜根组织可获得试管苗，获得试管苗的过程如图所示。回答下列问题。

①②③④⑤⑥

（1）利用胡萝卜根段进行组织培养可以形成试管苗。用分化的植物细胞可以培养成完整的

植株，这是因为植物细胞具有。

（2）从步骤⑤到步骤⑥需要更换新的培养基，其原因是。在新的培养基上愈

伤组织通过细胞的过程，最终可形成试管苗。

（3）步骤⑥要进行照光培养，其作用是。

（4）经组织培养得到的植株，一般可保持原品种的,这种繁殖方式属于

繁殖。

【答案】（1）.蛋白陈（2）.不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同（3）.能够

（4）.硝化细菌可以利用空气中的C02作为碳源（5）.倒置（6）.在一定的培养条件下，

不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征（7）.全能性（8）.诱导愈伤组织形成和诱

导愈伤组织分化形成试管苗所需的生长素和细胞分裂素的比例不同（9）.分化（或答：再

分化）（10）.诱导叶绿素的形成，使试管苗能够进行光合作用（11）.遗传特性（12）.

无性

【解析】

【分析】

本题主要考察了微生物的实验室培养和植物组织培养的过程。微生物培养需要提供水、碳源、

氮源和无机盐等，同时还需要满足某些微生物对pH、特殊营养物质和氧气的需求。植物组

织培养利用了细胞的全能性，已经分化的细胞会经过脱分化和再分化，从而形成幼苗。

【详解】I。）葡萄糖只含有C、H、O,它只能提供碳源，NaNCh可以提供氮源，蛋白豚

可以同时提供碳源、氮源；不同的细菌生长繁殖所需的最适pH不同，因此配制培养基时需

要调节培养基的pH；硝化细菌在没有碳源的培养基上能够生长；其是一种自养型生物，可

以利用空气中的CO2作为碳源；

（2）用平板培养细菌的时候需要将平板倒置，可以防止培养时的水珠滴落造成培养基的污

染等；

（3）在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，因此菌落的性状、

大小、颜色等特征可以作为初步区分不同种微生物的依据：

II（1）从一个已经分化的细胞，培养成完整的植株，者是植物细胞具有全能性的表现；

（2）诱导愈伤组织形成和诱导愈伤组织分化形成试管苗所需生长素和细胞分裂素的比例

不同，所以在愈伤组织培育完成后需要更换培养基；愈伤组织会经历细胞的再分化发育成试

管苗；

（3）步骤⑥属于细胞再分化，需要形成叶肉细胞，而诱导叶绿素的形成需要光照，同时使

试管苗能够进行光合作用；

（4）植物组织培养属于无性繁殖；该繁殖过程不会改变亲本的遗传特性，保持亲本的优良

性状。

【点睛】该题考察了两个方向，其一是微生物的实验时培养，重点侧重在培养基的成分、培

养过程等，其次是植物组织培养，需要识记组培的原理、过程和优点等知识点，考察较为基

础。

（河南省部分学校2020-2021学年高三开学考试（一））30.形形色色的发酵食品在食品业

中占有重要地位，发酵食品的制作离不开微生物。请回答下列问题：

（1）为了提高果酒的品质、产量和节约生产成本，厂家提出了如下革新，请将其完善：

①榨汁时添加适量__________________以提高果汁的出汁率并使果汁变得澄清；

②使用培养基筛选出优质酵母菌。

（2）在果酒的制作过程中，有时会出现“酒败成酷'’的情况，其中导致酿酒失败的微生物是

.在__________充足、温度适宜的条件下，该微生物能将酒精转变成乙醛,

进而转变成醋酸。

（3）泡菜和腐乳因独特的风味深受国人喜爱，腐乳的制作过程中，加盐的作用有

_________________________（答出2点即可）。

（4）果酒的制作离不开酵母菌，传统方法制作腐乳时也有酵母菌参与，制作腐乳时，酵母

菌的营养基质来自:以葡萄糖为底物制作果酒的过程中，酵母菌产生的二氧化碳量与

酒精量的比值大于1,原因是o

【答案】（1）.果胶酶（2）.选择（3）.醋酸菌（4）.氧气（5）.①析出豆腐中

的水分，使豆腐块变硬，在后期制作过程中不会过早酥烂；②抑制微生物的生长，避免豆腐

块腐败变质（或调味）（6）.豆腐块（7）.初期酵母菌进行有氧呼吸，产生二氧化碳不

产生酒精，无氧呼吸时产生的二氧化碳量与产生的酒精量相等

【解析】

【分析】

果酒制备的菌种是酵母菌，条件：温度18-25C,缺氧、酸性。参与腐乳制作的微生物主要

是毛霉，其新陈代谢类型是异养需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将

豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。

【详解】（1）果胶酶能分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层，将果胶分解成可溶性的半乳

糖醛酸，提高了果汁的出汁率并使果汁变得澄清；使用选择培养基筛选出优质酵母菌。

（2）导致酿酒失败的微生物是醋酸菌；在氧气充足、温度适宜的条件下，该醋酸菌能将酒

精转变成乙醛，进而转变成醋酸。

（3）腐乳的制作过程中，加盐的作用有析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬，在后期制作过

程中不会过早酥烂；抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质；调味。

（4）豆腐块富含营养，制作腐乳时，酵母菌的营养基质来自豆腐块；以葡萄糖为底物制作

果酒的过程中，初期酵母菌进行有氧呼吸，产生二氧化碳，不产生酒精，无氧呼吸时产生的

二氧化碳量与产生的酒精量相等，因此，制作果酒过程中，酵母菌产生的二氧化碳量与酒精

量的比值大于1。

【点睛】本题考查果酒和果醋的制作、腐乳的制作、泡菜的制作，要求考生识记参与果酒、

果醋、腐乳和泡菜制作的微生物及其代谢类型，掌握果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作原理及

条件，能结合所学的知识准确答题。

].（2020学年高三上学期8月执信、广雅、六中三校联考试卷）某同学用新鲜的泡菜滤液

为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产

生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。请回答下列问题：

（1）为了缩短泡菜制作时间，有人会在冷却的盐水中加入少量陈泡菜液，推测加入陈泡菜

液的目的是。

（2）泡菜液中的乳酸来自乳酸菌的过程。在制作泡菜初期，泡菜坛水槽总是

有气泡冒出的主要原因是。随着泡制时间的延长，泡菜坛中亚硝

酸盐的含量变化趋势为。亚硝酸盐和对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与

N-1蔡基乙二胺盐酸盐结合形成色染料，可用于亚硝酸盐含量的检测。

（3）从功能上，分离纯化所用固体培养基属于。为分离纯化出优质的乳酸菌,

应挑选的菌落作为候选菌.

（4）为长期保存纯化得到的优质乳酸菌，可以将培养的菌液与充分混匀后，

置于"C以下的冷冻箱中保存。

【答案】(1).增加乳酸菌数量(2).无氧呼吸(乳酸发酵)(3).混入的其它微生

物呼吸作用释放了CO2(4).先增加后下降(5).玫瑰红(6).鉴别培养基(7).

溶钙圈(透明圈)大(8).灭菌的甘油(9).-20

【解析】

【分析】

泡菜发酵的实验原理：

(1)乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸；

(2)利用乳酸菌制作泡菜的过程中会引起亚硝酸盐的含量的变化；

温度过高，食盐用量不足10%、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增

加.一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降；

(3)测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化

反应后，与N-1-蔡基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的标准显色液目测

比较，估算泡菜中亚硝酸盐含量。

【详解】(1)由于陈泡菜水中含有乳酸菌，在盐水中加入陈泡菜水的目的是加进乳酸菌的菌

种，使乳酸菌的种群数量快速增加；

(2)泡菜中乳酸的发酵过程既是乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸的过程，在制作泡菜初期，

泡菜坛水槽总是有气泡冒出的主要原因是混入的其它微生物呼吸作用释放了CO2,泡菜制作

过程中，随着炮制时间的增加，亚硝酸盐含量先升高后降低，亚硝酸盐和对氨基苯磺酸发生

重氮化反应后，与N-1蔡基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，可用于亚硝酸盐含量的

检测；

(3)从功能上，分离纯化所用固体培养基属于鉴别培养基，分离纯化所用固体培养基中因

含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，因此，分离纯化时应挑

选出具有透明圈的菌落作为候选菌；

(4)微生物菌种的保藏有临时保藏和长期保藏之分。对于需要长期保存的菌种，可以采用

甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌，将1mL培养的菌液转移到

甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中保存。

【点睛】本题的知识点是泡菜制作原理，影响亚硝酸盐含量的因素，在泡菜制作过程中乳酸

菌和杂菌的种群数量变化，对于泡菜制作过程这原理的掌握及影响种群数量变化因素的理解

是解题的关键。

2.（2021届广东省广州市六区高三9月教学质量检测（•））牛奶消毒不过关容易携带细菌。

根据国家标准（GB19645—2010）规定，每亳升合格的牛奶细菌总数不能超过50000个。某

兴趣小组利用恒温水浴锅对新鲜牛奶进行消毒然后检测消毒的效果，如下图所示。

5mL生牛奶

IniLImL1niL1mL

养

培

数

计

阡

肉

牛

陈

口

蛋

养

培基

（1）图中步骤①对牛奶的消毒的方法是,一般采用对牛肉膏蛋白陈培养基进

行灭菌，蛋白陈的作用有（写两点）。

（2）步骤②将牛奶进行梯度稀释的目的是使聚集在一起的微生物分散，便于能在培养基表

面形成。步骤③的接种方法是，这种方法可以用来统计样品中活菌的数目,

其原理是

（3）兴趣小组通过步骤①〜③接种了3个平板和1个未接种的平板放入恒温培养箱，在适

宜的温度条件下培养48h,然后统计出4个平板上的菌落数分别是57、53、55和9。根据这

样的实验结果（填“能''或"不能”）判断该兴趣小组消毒后的牛奶细菌超标，原因是

（4）如果要检测牛奶中是否含有大肠杆菌，需要在培养基中加入（填物质），观察是

否出现黑色（或蓝黑色）的菌落。

【答案】（1）.巴氏消毒（2）.高压蒸汽灭菌（3）.提供碳源、氮源等（4）.单个

菌落（5）.稀释涂布平板法（6）.当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌

落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有

多少活菌（7）.不能（8）.因为未接种的培养基上有菌落出现，说明培养基灭菌不彻

底，则其它培养基上的菌落数不能表示牛奶中细菌数量（9）.伊红美蓝

【解析】

【分析】

（1）常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。培养基、培养皿、接种环、

实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌和消毒方法依次：高压蒸汽灭菌、干热灭菌、

灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。

（2）接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。接种的目的是使聚集在一起的微

生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群体，即菌落。

【详解】（1）图中步骤①对牛奶的消毒方法是巴氏消毒，既可以杀灭牛奶中的微生物，又可

以使牛奶中的营养成分不会被破坏。对牛肉膏蛋白陈培养基进行灭菌常用高压蒸汽灭菌法，

蛋白陈含多种有机物，能为微生物提供碳源、氮源、维生素等。

（2）步骤②将牛奶进行梯度稀释的目的是使聚集在一起的微生物分散，便于能在培养基表

面形成单个菌落。步骤③的接种方法是稀释涂布平板法，这种方法可以用来统计样品中活菌

的数目，其原理是样品稀释度足够高时，稀释液中的一个活菌可在平板上长出一个单菌落，

通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌。

（3）由于未接种的平板上也有菌落，说明培养基灭菌不合格，则其它培养基上的菌落数不

能表示牛奶中细菌数量，故不能由上述平板上菌落数计算消毒后的牛奶细菌是否超标。

（4）伊红美蓝可使大肠杆菌的菌落呈现黑色，所以要检测牛奶中是否含有大肠杆菌，需要

在培养基中加入伊红美蓝，观察是否出现黑色（或蓝黑色）的菌落。

【点睛】本题考查无菌技术、微生物的接种方法以及微生物的计数等知识，意在考查考生对

所学知识的理解和应用能力。

3.（2021届广东省仲元中学、中山一中等七校联合体高三上学期第一次联考）为解决生活污

水中油脂对环境造成的污染。科研人员要从污水中筛选出分解油脂能力最强的微生物。请分

析回答：

图甲图乙

（1）首先取生活污水，与特定液体培养基混合培养。取生活污水的目的是

,该液体培养基有什么特别之处?。这一轮培养的目的

是o

（2）图甲和图乙所代表的方法中能对微生物进行分离和计数的是法。用该方法统

计样本菌落数时（"需要''或"不需要”）设置空白对照组，原因是。

（3）科研人员按图乙方法培养了3个平板，一段时间后得到的菌落数依次为485、501、523,

出现这样的实验结果，其可能的原因是。

（4）从实验结果来看，确定分解油脂能力最强的微生物的方法是。

【答案】（1）.获取分解油脂的微生物（2）,以油脂为唯一碳源（3）.增大分解油脂

的微生物浓度（4）.稀释涂布平板（5）.需要（6）.因为需要判断培养基是否被污

染（7）.菌液稀释度不够（8）.单菌落（面积）最大

【解析】

【分析】

微生物常见接种的方法：

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。

在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成

单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可

形成单个菌落。

据图分析，图甲表示平板划线法，可以用于对菌种的分离；图乙表示稀释涂布平板法，可以

用于对菌种的分离和计数。

【详解】（1）该实验的目的是从污水中筛选出分解油脂能力最强的微生物，因此取生活污水

的目的是为了获取分解油脂的微生物，使用的特定液体培养基应该以油脂为唯一碳源，这一

轮培养的目的是增大分解油脂的微生物浓度。

（2）根据以上分析已知，图甲表示平板划线法，图乙表示稀释涂布平板法，后者可以用于

菌种的计数；稀释涂布平板法计数时需要设置空白对照，以判断培养基是否被污染。

（3）微生物计数的范围是30-300,若利用图乙方法得到的菌落数依次为485、501、523,

说明菌液稀释度不够。

（4）该实验的目的是从污水中筛选出分解油脂能力最强的微生物，单菌落（面积）最大的

应该是分解油脂能力最强的微生物。

【点睛】解答本题的关键是掌握微生物分罔与计数的相关知识点，了解微生物常见的两种接

种方法，准确判断图中两种接种方法的名称，明确只有稀释涂布平板法可以用于菌种的计数。

（大同市2021届高三学情调研测试试题）30.随着口罩需求的与日俱增，住建部对不同场所产

生的废弃口罩提出了明确的处理要求•为加快废弃口罩的处理，某科研团队准备从土壤中筛

选能高效降解一次性口罩（熔喷布）的细菌，请回答下列问题。

（1）居民小区、办公场所、商场产生的废弃口罩可作为生活垃圾中的其他垃圾进行收集转

运。为避免环境污染和病原体的传播，废弃口罩必须先进行严格的处理。

（2）细菌大多分布在距地表约3〜8cm的潮湿土壤层，因此土壤取样时，一般

。熔喷布主要成分为聚丙烯纤维（PP，组成仅含有C、H两种元素），用

于筛选的固体培养基除需加入经过处理的聚丙烯粉末外，还应加入。对培养基灭菌常

用法。在接种到鉴别培养基之前，可以通过的方法增加目的菌的

浓度。

（3）在培养基中加入能与PP结合而显色的染色剂，可使目的菌落周围会出现透明圈，如

下图所示，D表示透明圈直径，d表示菌落直径。为保证筛选出的细菌分解PP的能力最强,

应当选择的菌落作为目的菌群。

（4）已知目的菌分解PP需要多种酶的共同参与，工厂化降解PP时,常采用

法来固定目的菌，采用该方法的原因_______________。

【答案】（1）.灭菌（2）.铲去表层土（3）.水、氮源、无机盐和琼脂（4）.高压

蒸汽灭菌（5）.选择培养（6）.D/d比值最大（或d/D比值最小）（7）.包埋法（8）.

体积大的细胞难以被吸附或结合，不易从包埋材料中漏出

【解析】

【分析】

1、微生物的实验室培养关键做到无菌操作，培养基的灭菌常用高压蒸汽灭菌法，培养皿常

用干热灭菌法。

2、固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包

括包埋法、化学结合法和物理吸附法。一般来说，酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固

定，而细胞多采用包埋法固定化，这是因为细胞个大，而酶分子很小：个大的细胞难以被吸

附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。

【详解】（1）为避免环境污染和病原体的传播，废弃口罩必须先进行严格的灭菌处理。

（2）绝大多数细菌分布在距地表约3〜8cm的土壤层，因此，土壤取样时一定要铲去表层

土壤。除了聚丙烯纤维外，要配制用于筛选的固体培养基还需要加入琼脂以及基本的水、氮

源和无机盐。培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。在液体培养基中选择培养的目的是

增加目的菌的浓度。

（3）从图中可以看出，D/d比值越大，菌株降解PP的能力越强，因此应当选择D/d比值最

大的菌落作为目的菌群。

（4）固定目的菌株常用的方法是包埋法，原因是体积大的细胞难以被吸附或结合，不易从

包埋材料中漏出。

【点睛】本题是对用于微生物培养的培养基的配方及营养成分、选择培养基的选择作用、常

用的接种方法、无菌操作技术、固定化技术等相关知识的综合性考查，回忆微生物培养的培

养基的配方和营养成分、选择培养基的选择作用、常用的接种方法的具体操作和目的，无菌

操作技术、常用的固定化技术后结合问题进行解答。

（山东省2021届高三开学质量检测）13.我国利用不同微生物的发酵作用制作食品，历史

悠久，在多种文献中均有记载：

①《齐民要术》中记载：“作盐水，令极咸，于盐水中洗菜，即内雍中。”

②《北山酒经》中记载：“每坛加蜡三钱，竹叶五片，隔水煮开，乘热灌封坛口。”

③《齐民要术》中记载了二十三种利用谷物酿制食醋的工艺。其经历的三个主要发酵过程为:

糖化一酒化一醋化。

④《本草纲目拾遗》中记述：“豆腐又名菽乳，豆腐腌过酒糟或酱制者，味咸甘心。”

下列说法错误的是（）

A.①介绍的是泡菜制作技术，配制的盐水要煮沸冷却后使