宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范

T/CASXXXX—2021宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范本标准规定了宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂的术语和定义、技术要求、检验方法、检验规则、标志、包装、运输、贮存等内容。本标准适用于宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂的加工和质量控制。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/T26428饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的测定GB27951-2011皮肤消毒剂卫生要求GB27954-2020黏膜消毒剂通用要求GB38456抗菌和抑菌洗剂卫生要求NY/T1151.2农药登记卫生用杀虫剂室内药效试验方法及评价第2部分：灭螨和驱螨剂JJF1070定量包装商品净含量计量检验规则T/CGAPA003-2019宠物营养补充剂标准综合体团体规范国家质量监督检验检疫总局令（2005）第75号定量包装商品计量监督管理办法《化妆品安全技术规范》2015版3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1宠物范畴凡是人工饲养的非食用的供观赏、娱乐、休闲、陪伴等服务的陆生或水生动物，统称为宠物。文件中的宠物范畴只包括犬和猫。3.2宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌剂含有益生菌（芽孢杆菌类）成分，用于宠物体表除菌的产品。3.3宠物用益生菌（芽孢杆菌类）清洁剂含有益生菌（芽孢杆菌类）成分，用于宠物体表清洁的产品。2T/CASXXXX—20213.4宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除臭剂含有益生菌（芽孢杆菌类）成分，用于宠物用品或宠物体表除臭的产品。4要求4.1材料要求产品配方中含有纯净水、益生菌（芽孢杆菌类）。4.2性能要求4.2.1感官要求产品感官要求应符合表1。表1感官要求4.2.2产品成分分析保证值产品成分分析保证值应符合表2。表2产品成分分析保证值4.2.3抑菌和驱螨性能产品的抑菌和驱螨性能应符合表3。表3抑菌和驱螨性能3T/CASXXXX—20214.2.4产品卫生指标产品卫生指标应符合表4。表4卫生指标4.3安全要求产品各项安全指标应符合表5。表5安全指标5试验方法5.1感官取适量样品，置于干燥洁净的100ml烧杯内，在非直射光线下进行观察，按指标要求进行评判。5.2芽孢杆菌数按GB/T26428规定进行。5.3汞按《化妆品安全技术规范》2015版中第四章1.2规定进行。5.4铅按《化妆品安全技术规范》2015版中第四章1.3规定进行。5.5砷按《化妆品安全技术规范》2015版中第四章1.4规定进行。5.6大肠菌群和金黄色葡萄球菌4T/CASXXXX—2021按GB27951-2011规定进行。5.7抑制石膏样小孢子菌性能按附录A规定进行。5.8抑制须癣毛癣菌性能按附录B规定进行。5.9抑制犬小孢子菌性能按附录C规定进行。5.10抑制厚皮马拉色菌性能按附录D规定进行。5.11抑制假中间型葡萄球菌性能按附录E规定进行。5.12驱螨率按NY/T1151.2规定进行。5.13一次完整皮肤刺激试验和急性经口毒性试验按GB27951-2011规定进行。5.14净含量按JJF1070规定进行。6检验规则6.1出厂检验6.1.1产品经生产厂家质量检验部门检验，保证各项指标符合要求，检验合格并签发产品合格证后方可出厂。6.2型式检验6.2.1正常生产时每年进行一次，有下列情况之一时必须进行：——新产品投产前；——出厂检验结果与上次型式检验有较大差异；——更换设备、主要原辅材料或更改关键工艺可能影响产品质量时；——停产半年及以上，在恢复生产时；——市场监督管理部门提出进行型式检验要求时。T/CASXXXX—20216.2.2检验项目为本标准规定的全部项目。7标志及包装包装标志应符合GB/T191的规定，使用的容器与材料应符合相应的卫生标准和相关规定。8运输和贮存8.1运输运输时应有防晒、防雨淋等设施；不得与有毒、有害、易燃易爆或影响产品质量的物品混装运输。装卸应避免倒置。8.2贮存8.2.1应贮存在温度不高于45℃的通风干燥仓库，不得靠近水源、火炉和暖气装置。8.2.2贮存应离地至少20cm,离内墙至少20cm,距外墙至少50cm,中间留有通道，按箱子图示标志堆放，并严格掌握先进先出原则。6T/CASXXXX—2021（规范性）产品共培养抑制石膏样小孢子菌效果测试方法A.1范围本标准规定了“宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范”中产品共培养抑制石膏样小孢子菌效果测试方法。本标准适用于“宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范”中产品共培养抑制石膏样小孢子菌效果测试方法。A.2实验器材和试剂配制A.2.1实验器材锥形瓶、细菌培养皿、量筒、精密pH试纸、无菌试管、无菌刻度吸管、移液枪、恒温培养箱、冰箱、菌落计数器、酒精灯、电动混合器、恒温干燥箱、恒温水浴锅、高压灭菌锅、电子天平、生物安全柜等微生物实验器材。A.2.2试剂配制A.2.2.1沙氏琼脂培养基（该培养基含氯霉素）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L，琼脂15g/L，氯霉素0.1g/L。用于石膏样小孢子菌的平板菌落计数。A.2.2.2沙氏葡萄糖液体培养基（该培养基不含氯霉素及其他抑菌剂）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L。用于石膏样小孢子菌的增菌培养。A.2.2.3石膏样小孢子菌繁殖体悬液的制备在500ml三角瓶中加入100ml沙氏葡萄糖液体培养基，塞上透气塞子，121℃高压灭菌20min，备用。取冻干菌种管，在无菌操作下打开，用无菌吸管吸取0.5ml左右液体培养基于管中将冻干菌粉全部溶解。取沙氏葡萄糖液体培养基5.0ml-10ml试管，滴入少许菌种悬液，置于28℃培养箱中培养24h，用接种环取第一代培养的菌悬液，划线接种于斜面上，与28℃培养箱中培养24h即为第3代培养物；取菌种新鲜培养物，吸取5ml稀释液加入斜面试管中，反复吹吸，洗下菌苔，随后将洗液移至另一根无菌试管中，用电动混合器混匀。繁殖体悬液保存在4℃冰箱中备用，应当天使用，不应过夜。用平板计数法测定菌悬液的菌数。用生理盐水作适当的稀释后，选取其中2-3个稀释度的稀释液。吸取样液1ml，置于灭菌细菌培养皿内，每个样液接种三个灭菌细菌培养皿。用凉至40-45℃的培养基作倾注，绕8字混合均匀，待培养基凝固后倒扣细菌培养皿于28℃培养箱内培养，48h后进行菌落计数。菌悬液先保存在4℃冰箱中备用，待菌数结果出来后再使用。细菌繁殖体悬液浓度应为106-107CFU/ml，若测定结果高于此范围，则用生理盐水做稀释；若测定结果低于此范围，则采用离心的方法将其浓缩。7式中：dD——细菌培养皿间菌落数误差率，%T/CASXXXX式中：dD——细菌培养皿间菌落数误差率，%A.3操作步骤在无菌操作下，吸取石膏样小孢子菌悬液1ml接种于89ml沙氏葡萄糖液体培养基中，混合均匀，再加入10ml产品；另取1ml石膏样小孢子菌悬液接种于89ml沙氏葡萄糖液体培养基中，加入10ml无菌水作为空白对照组，混合均匀。将两组混合培养物放置于28℃条件下培养，48h后测定共培养后两组混合培养物中石膏样小孢子菌的菌数。计数方法同上。A.4计算公式式中：X——抑菌率，%A——共培养后对照组平均菌落数B——共培养后实验组平均菌落数A.5活菌计数中误差分析活菌计数中细菌培养皿间菌落数误差率、稀释度间菌落数误差率不宜超过10%，对误差率的自检，可以按式①——式⑥计算。S=……………① 式中：S——细菌培养皿间菌落平均数S——各细菌培养皿菌落数之和Ν——细菌培养皿总数 N…………②式中：D——细菌培养皿间菌落数平均差S——细菌培养皿间菌落数平均数S——各细菌培养皿菌落数Ν——细菌培养皿总数dD=根100%………………③ D——细菌培养皿间菌落数平均差S——细菌培养皿间菌落平均数 L L= 式中： 式中：L——稀释度间菌落平均数L——各稀释度平均菌落之和M——稀释度数……………………④8T/CASXXXX—2021DL=Lm(M>1)………………⑤ L——稀释度间菌落平均数Lm L——稀释度间菌落平均数Lm——各稀释度菌落数M——稀释度数 dL=根100 dL=根100%…………………⑥D——稀释度间菌落数平均差 L——稀释度间菌落数平均9T/CASXXXX—2021（规范性）产品共培养抑制须癣毛癣菌效果测试方法B.1范围本标准规定了“宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范”中产品共培养抑制须癣毛癣菌效果测试方法。本标准适用于“宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范”中产品共培养抑制须癣毛癣菌效果测试方法。B.2实验器材和试剂配制B.2.1实验器材锥形瓶、细菌培养皿、量筒、精密pH试纸、无菌试管、无菌刻度吸管、移液枪、恒温培养箱、冰箱、菌落计数器、酒精灯、电动混合器、恒温干燥箱、恒温水浴锅、高压灭菌锅、电子天平、生物安全柜等微生物实验器材。B.2.2试剂配制B.2.2.1沙氏琼脂培养基（该培养基含氯霉素）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L，琼脂15g/L，氯霉素0.1g/L。用于须癣毛癣菌的平板菌落计数。B.2.2.2沙氏葡萄糖液体培养基（该培养基不含氯霉素及其他抑菌剂）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L。用于须癣毛癣菌的增菌培养。B.2.2.3须癣毛癣菌繁殖体悬液的制备在500ml三角瓶中加入100ml沙氏葡萄糖液体培养基，塞上透气塞子，121℃高压灭菌20min，备用。取冻干菌种管，在无菌操作下打开，用无菌吸管吸取0.5ml左右液体培养基于管中将冻干菌粉全部溶解。取沙氏葡萄糖液体培养基5.0ml-10ml试管，滴入少许菌种悬液，置于28℃培养箱中培养24h，用接种环取第一代培养的菌悬液，划线接种于斜面上，与28℃培养箱中培养24h即为第3代培养物；取菌种新鲜培养物，吸取5ml稀释液加入斜面试管中，反复吹吸，洗下菌苔，随后将洗液移至另一根无菌试管中，用电动混合器混匀。繁殖体悬液保存在4℃冰箱中备用，应当天使用，不应过夜。用平板计数法测定菌悬液的菌数。用生理盐水作适当的稀释后，选取其中2-3个稀释度的稀释液。吸取样液1ml，置于灭菌细菌培养皿内，每个样液接种三个灭菌细菌培养皿。用凉至40-45℃的培养基作倾注，绕8字混合均匀，待培养基凝固后倒扣细菌培养皿于28℃培养箱内培养，48h后进行菌落计数。菌悬液先保存在4℃冰箱中备用，待菌数结果出来后再使用。细菌繁殖体悬液浓度应为106-107CFU/ml，若测定结果高于此范围，则用生理盐水做稀释；若测定结果低于此范围，则采用离心的方法将其浓缩。式中：dD——细菌培养皿间菌落数误差率，%T/CASXXXX式中：dD——细菌培养皿间菌落数误差率，%B.3操作步骤在无菌操作下，吸取须癣毛癣菌悬液1ml接种于89ml沙氏葡萄糖液体培养基中，混合均匀，再加入10ml产品；另取1ml须癣毛癣菌悬液接种于89ml沙氏葡萄糖液体培养基中，加入10ml无菌水作为空白对照组，混合均匀。将两组混合培养物放置于28℃条件下培养，48h后测定共培养后两组混合培养物中须癣毛癣菌的菌数。计数方法同上。B.4计算公式式中：X——抑菌率，%A——共培养后对照组平均菌落数B——共培养后实验组平均菌落数B.5活菌计数中误差分析活菌计数中细菌培养皿间菌落数误差率、稀释度间菌落数误差率不宜超过10%，对误差率的自检，可以按式①——式⑥计算。S=……………① 式中：S——细菌培养皿间菌落平均数S——各细菌培养皿菌落数之和Ν——细菌培养皿总数 N…………②式中：D——细菌培养皿间菌落数平均差S——细菌培养皿间菌落数平均数S——各细菌培养皿菌落数Ν——细菌培养皿总数dD=根100%………………③ D——细菌培养皿间菌落数平均差S——细菌培养皿间菌落平均数 L L= 式中： 式中：L——稀释度间菌落平均数L——各稀释度平均菌落之和M——稀释度数……………………④T/CASXXXX—2021DL=Lm(M>1)………………⑤式中：D——稀释度间菌落数平均差L——稀释度间菌落平均数Lm——各稀释度菌落数 dL dL=根100%…………………⑥式中：dL——稀释度间菌落数误差率，% D——稀释度间菌落数平均差 L——稀释度间菌落数平均T/CASXXXX—2021（规范性）产品共培养抑制犬小孢子菌效果测试操作规程C.1范围本标准规定了“宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范”中产品共培养抑制犬小孢子菌效果测试方法。本标准适用于“宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范”中产品共培养抑制犬小孢子菌效果测试方法。C.2实验器材和试剂配制C.2.1实验器材锥形瓶、细菌培养皿、量筒、精密pH试纸、无菌试管、无菌刻度吸管、移液枪、恒温培养箱、冰箱、菌落计数器、酒精灯、电动混合器、恒温干燥箱、恒温水浴锅、高压灭菌锅、电子天平、生物安全柜等微生物实验器材。C.2.2试剂配制C.2.2.1沙氏琼脂培养基（该培养基含氯霉素）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L，琼脂15g/L，氯霉素0.1g/L。用于犬小孢子菌的平板菌落计数。C.2.2.2沙氏葡萄糖液体培养基该培养基不含氯霉素及其他抑菌剂）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L。用于犬小孢子菌的增菌培养。C.2,2,3犬小孢子菌繁殖体悬液的制备在500ml三角瓶中加入100ml沙氏葡萄糖液体培养基，塞上透气塞子，121℃高压灭菌20min，备用。取冻干菌种管，在无菌操作下打开，用无菌吸管吸取0.5ml左右液体培养基于管中将冻干菌粉全部溶解。取沙氏葡萄糖液体培养基5.0ml-10ml试管，滴入少许菌种悬液，置于28℃培养箱中培养24h，用接种环取第一代培养的菌悬液，划线接种于斜面上，与28℃培养箱中培养24h即为第3代培养物；取菌种新鲜培养物，吸取5ml稀释液加入斜面试管中，反复吹吸，洗下菌苔，随后将洗液移至另一根无菌试管中，用电动混合器混匀。繁殖体悬液保存在4℃冰箱中备用，应当天使用，不应过夜。用平板计数法测定菌悬液的菌数。用生理盐水作适当的稀释后，选取其中2-3个稀释度的稀释液。吸取样液1ml，置于灭菌细菌培养皿内，每个样液接种三个灭菌细菌培养皿。用凉至40-45℃的培养基作倾注，绕8字混合均匀，待培养基凝固后倒扣细菌培养皿于28℃培养箱内培养，48h后进行菌落计数。菌悬液先保存在4℃冰箱中备用，待菌数结果出来后再使用。细菌繁殖体悬液浓度应为106-107CFU/ml，若测定结果高于此范围，则用生理盐水做稀释；若测定结果低于此范围，则采用离心的方法将其浓缩。式中：dD——细菌培养皿间菌落数误差率，%T/CASXXXX式中：dD——细菌培养皿间菌落数误差率，%C.3操作步骤在无菌操作下，吸取犬小孢子菌悬液1ml接种于89ml沙氏葡萄糖液体培养基中，混合均匀，再加入10ml产品；另取1ml犬小孢子菌悬液接种于89ml沙氏葡萄糖液体培养基中，加入10ml无菌水作为空白对照组，混合均匀。将两组混合培养物放置于28℃条件下培养，48h后测定共培养后两组混合培养物中犬小孢子菌的菌数。计数方法同上。C.4计算公式式中：X——抑菌率，%A——共培养后对照组平均菌落数B——共培养后实验组平均菌落数C.5活菌计数中误差分析活菌计数中细菌培养皿间菌落数误差率、稀释度间菌落数误差率不宜超过10%，对误差率的自检，可以按式①——式⑥计算。S=……………① 式中：S——细菌培养皿间菌落平均数S——各细菌培养皿菌落数之和Ν——细菌培养皿总数 N…………②式中：D——细菌培养皿间菌落数平均差S——细菌培养皿间菌落数平均数S——各细菌培养皿菌落数Ν——细菌培养皿总数dD=根100%………………③ D——细菌培养皿间菌落数平均差S——细菌培养皿间菌落平均数 L L= 式中： 式中：L——稀释度间菌落平均数L——各稀释度平均菌落之和M——稀释度数……………………④T/CASXXXX—2021DL=Lm(M>1)………………⑤ L——稀释度间菌落平均数Lm L——稀释度间菌落平均数Lm——各稀释度菌落数M——稀释度数 dL=根100 dL=根100%…………………⑥ D——稀释度间菌落数平均差 L——稀释度间菌落数平均T/CASXXX—2021（规定性）产品共培养抑制厚皮马拉色菌效果测试方法D.1范围本标准规定了“宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范”中产品共培养抑制厚皮马拉色菌效果测试方法。本标准适用于“宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范”中产品共培养抑制厚皮马拉色菌效果测试方法。D.2实验器材和试剂配制D.2.1实验器材锥形瓶、细菌培养皿、量筒、精密pH试纸、无菌试管、无菌刻度吸管、移液枪、恒温培养箱、冰箱、菌落计数器、酒精灯、电动混合器、恒温干燥箱、恒温水浴锅、高压灭菌锅、电子天平、生物安全柜等微生物实验器材。D.2.2试剂配制D.2.2.1沙氏琼脂培养基（该培养基含氯霉素）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L，琼脂15g/L，氯霉素0.1g/L。用于厚皮马拉色菌的平板菌落计D.2,2,2沙氏葡萄糖液体培养基（该培养基不含氯霉素及其他抑菌剂）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L。用于厚皮马拉色菌的增菌培养。D.2.2.3细菌繁殖体悬液的制备在500ml三角瓶中加入100ml沙氏葡萄糖液体培养基，塞上透气塞子，121℃高压灭菌20min，备用。取冻干菌种管，在无菌操作下打开，用无菌吸管吸取0.5ml左右液体培养基于管中将冻干菌粉全部溶解。取营养肉汤培养基5.0ml-10ml试管，滴入少许菌种悬液，置于37℃培养箱中培养24h，用接种环取第一代培养的菌悬液，划线接种于斜面上，与37℃培养箱中培养24h即为第3代培养物；取菌种新鲜培养物，吸取5ml稀释液加入斜面试管中，反复吹吸，洗下菌苔，随后将洗液移至另一根无菌试管中，用电动混合器混匀。细菌繁殖体悬液保存在4℃冰箱中备用，应当天使用，不应过夜。用平板计数法测定菌悬液的菌数。用生理盐水作适当的稀释后，选取其中2-3个稀释度的稀释液。吸取样液1ml，置于灭菌细菌培养皿内，每个样液接种三个灭菌细菌培养皿。用凉至40-45℃的培养基作倾注，绕8字混合均匀，待培养基凝固后倒扣细菌培养皿于28℃培养箱内培养，48h后进行菌落计数。菌悬液先保存在4℃冰箱中备用，待菌数结果出来后再使用。细菌繁殖体悬液浓度应为106-107CFU/ml，若测定结果高于此范围，则用生理盐水做稀释；若测定结果低于此范围，则采用离心的方法将其浓缩。式中：dD——细菌培养皿间菌落数误差率，%T/CASXXX式中：dD——细菌培养皿间菌落数误差率，%D.3操作步骤在无菌操作下，吸取厚皮马拉色菌悬液1ml接种于89ml营养肉汤培养基中混合均匀，再加入10ml产品；另取1ml厚皮马拉色菌悬液接种于89ml营养肉汤培养基中，加入10ml无菌水作为空白对照组，混合均匀。将两组混合培养物放置于37℃条件下培养，48h后测定共培养后两组混合培养物中厚皮马拉色菌的菌数。计数方法同上。D.4计算公式式中：X——抑菌率，%A——共培养后对照组平均菌落数B——共培养后实验组平均菌落数D.5活菌计数中误差分析活菌计数中细菌培养皿间菌落数误差率、稀释度间菌落数误差率不宜超过10%，对误差率的自检，可以按式①——式⑥计算。S=……………① 式中：S——细菌培养皿间菌落平均数S——各细菌培养皿菌落数之和Ν——细菌培养皿总数 N…………②式中：D——细菌培养皿间菌落数平均差S——细菌培养皿间菌落数平均数S——各细菌培养皿菌落数Ν——细菌培养皿总数dD=根100%………………③ D——细菌培养皿间菌落数平均差S——细菌培养皿间菌落平均数 L L= 式中： 式中：L——稀释度间菌落平均数L——各稀释度平均菌落之和M——稀释度数……………………④T/CASXXX—2021DL=Lm(M>1)………………⑤ L——稀释度间菌落平均数Lm L——稀释度间菌落平均数Lm——各稀释度菌落数M——稀释度数 dL=根100%…………………⑥ 式中：dL——稀释度间菌落数误差率，% D——稀释度间菌落数平均差 L——稀释度间菌落数平均T/CASXXX—2021（规范性）产品共培养抑制假中间型葡萄球菌效果测试方法E.1范围本标准规定了“宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范”中产品共培养抑制假中间型葡萄球菌效果测试方法。本标准适用于“宠物用益生菌（芽孢杆菌类）除菌、清洁、除臭剂通用技术规范”中产品共培养抑制假中间型葡萄球菌效果测试方法。E.2实验器材和试剂配制E.2.1实验器材锥形瓶、细菌培养皿、量筒、精密pH试纸、无菌试管、无菌刻度吸管、移液枪、恒温培养箱、冰箱、菌落计数器、酒精灯、电动混合器、恒温干燥箱、恒温水浴锅、高压灭菌锅、电子天平、生物安全柜等微生物实验器材。E.2.2试剂配制E.2.2.1营养琼脂培养基制备分别称取牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、琼脂粉15.0g、氯化钠5.0g置于1000ml烧杯中，加纯化水1000ml使其溶解，煮沸，冷却至60℃,用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸将pH值调节为7.2~7.4，分装到250ml三角瓶，121℃高压灭菌20min，冷藏备用。E.2.2.2营养肉汤培养基制备分别称取牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g置于1000ml烧杯中，加纯化水1000ml使其溶解，煮沸，冷却至60℃,用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸将pH值调节为7.2～7.4，分装到500ml三角瓶，每瓶装89ml，塞上透气塞子，121℃高压灭菌20min，冷藏备用。E.2.2.3假中间型葡萄球菌测试片（球菌测试片）用于假中间型葡萄球菌的菌落计数。E.2.2.4细菌繁殖体悬液的制备在500ml三角瓶中加入100ml沙氏葡萄糖液体培养基，塞上透气塞子，121℃高压灭菌20min，备用。取冻干菌种管，在无菌操作下打开，用无菌吸管吸取0.5ml左右液体培养基于管中将冻干菌粉全部溶解。取营养肉汤培养基5.0ml-10ml试管，滴入少许菌种悬液，置于37℃培养箱中培养24h，用接种环取第一代培养的菌悬液，划线接种于斜面上，与37℃培养箱中培养24h即为第3代培养物；取菌种新鲜培养物，吸取5ml稀释液加入斜面试管中，反复吹吸，洗下菌苔，随后将洗液移至另一根无菌试管中，用电动混合器混匀。细菌繁殖体悬液保存在4℃冰箱中备用，应当天使用，不应过夜。T/CASXXX—2021用平板计数法测定菌悬液的菌数。用生理盐水作适当的稀释后，选取其中2-3个稀释度的稀释液。吸取样液1ml，置于灭菌细菌培养皿内，每个样液接种三