肿瘤细胞增殖动力学

肿瘤细胞增殖动力学WhatKindofDiseaseIsCancer?SomeCases病例1：男性76岁，2003年9月3日因干咳、少痰、消瘦就诊。

CT检查确诊肺癌病例3：女性43岁，因上腹部时有疼痛伴返酸2

年、加重1个月入院。胃镜活检报告：胃幽门部黏膜内低分化癌。病例8：患者男性，34岁。因发现右锁骨肿块3月入院。检查右锁骨外段稍隆起，局部膨大，表面皮肤无红肿或静脉怒张，无疼痛；肩关节活动稍受限。

X光示右锁骨外段明显骨质破坏及增生。病理报告为右锁骨恶性淋巴细胞瘤。病例11：女性68岁，阴道不规则流血4-5个月。妇科检查：子宫前位，如妊娠2月大小，可触及数个结节，质地中等。超声检查提示子宫混合性占位性病变。

CT诊断：宫体癌，右侧卵巢囊肿。

病理诊断：子宫恶性混合性苗勒氏瘤，累及输尿管。肿瘤学癌发生癌演进临床表现癌治疗癌诊断CELLCelljunctionProliferationExtracellularmatrixTelomereSignaltransductionDifferentiationApoptosis

2.

WhatWeHaveKnownabouttheCellCycleControl?OncogeneAntioncogeneCheckpointsCellDivisionCycleGene,cdcgenes;CyclinsCyclinDependentKinases,CDKsCyclinDependentKinasesInhibitors,CDKIsSphasePromotingFactor,SPFMaturationPromotingFactor,MPF蛋白质水平基因水平

3.HowtoControlinaNormalCell?ControlofG1phaseControlofSphaseControlofG2phaseControlofMphaseControlofG1phaseProliferationfactorsCheckpoint

（G0／G1entrance、RPointG1／S）Cyclin-CDK

（cyclinD-CDK4／6、cyclinE-CDK2）P105RB

CDKIControlofSphaseCheckpoint(DNAsynthesison、off)Cyclin－CDKPCNACyclin－CDKSPF(cyclinA-CDK1)CyclinE-CDK2作为启动蛋白，识别autonomouslyreplicatingsequence，ARS，激活复制起点可能是originrecognitioncomplex，ORC的组成部分

PCNA

细胞增殖核抗原DNA聚合酶δ的亚基直接参与DNA复制和修复

ControlofMphase

CheckpointMPF（cyclinB-CDK1)

Checkpoint

G2／M：DNA复制没有完成，激活wee1-mik1蛋白激酶，细胞阻滞于G2期。

M中／晚期：检查微管蛋白的量、微管组织中心功能、纺锤体极性、微管与动粒附着、或附着在动粒上产生的张力。

MPF的活性调节

4.What’sWronginaTumorCell?oncogene的过表达antioncogene的失活cyclin基因和表达蛋白的异常cdki基因和表达蛋白的异常

5.HowtoEvaluateCellProliferation?CellProliferationKinetics

研究生物体内各种细胞群体在新生、增殖、消亡过程中处于各种状态的细胞数量、时间参数和分布位置的技术手段。检测方法1.细胞计数2.生长曲线3.倍增时间4.生长分数5.丢失系数6.标记指数7.分裂指数8.细胞周期参数1.CellCounting

直接计数－－台盼蓝计数法比色半定量－－四唑盐法四唑盐法

[3-4,4-二甲基噻唑－2]，5－二苯基四氮唑溴盐，简称MTT;

线粒体的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物;

比色测定间接反映活细胞数量。

细胞培养

显色:加入MTT溶液(5mg/ml)，继续培养4h，加DMSO，振荡10min

比色：490nm波长测定光吸收值

BreastCancerResearchandTreatmeat2004;84:251-260

6.TheirResearchStrategy?7.TheTechnologyTheyUsed?

2.GrowthCurveCellculture;Cellcounting：每次至少3瓶，每瓶至少3次，取平均数；共做7天；作图：培养时间为横坐标，细胞数为纵坐标，在对数坐标纸上作图。0.10246810Time/dayCancerCellNormalCell0.11101001000单层培养CellNumber0.10246810Time/day0.11101001000CellNumber悬浮培养NormalCellCancerCell3.DoublingTimeInvivo:DT=0.1×t/logDt–logDoDo

:首次测得的肿瘤直径（cm）

Dt

:t时间后测得的直径（cm）

ComputedTomography

某转移癌：

Do＝2，Dt＝4，t＝90DT=0.1×90/0.6-0.3=30(d)effectivedoublingtime,TDeff：考虑细胞丢失因素的细胞倍增时间

potentialdoublingtime,TDpot：不考虑细胞丢失因素的细胞倍增时间原发性肺癌腺癌6421

鳞癌8512

间变性癌5511乳腺癌1714结－直肠癌1990淋巴瘤274肿瘤类型病例数倍增时间（周）780例人体肿瘤体积倍增时间Steel（1977）（未完）4.GrowthFraction，GF肿瘤中增殖细胞占细胞总数的比例GF=P/P+QP:proliferationQ：quiescent5.丢失系数Φ丢失系数Φ＝KL/KBKL：细胞群体在增殖过程中的丢失率

KB：细胞群体在增殖过程中的生成率

6.LabelingIndex,LILI＝Ns/NNs:Numbersphase常用方法：

3H-TdR

BrdU

PCNA

、Ki673H-TdR3H-TdR和细胞短暂孵育；间隔时间取材；放射自显影；图像分析仪计数或液闪计数；SPSS统计分析。BrdUBrdU和细胞共孵育较长时间；取材固定；加入BrdU抗体；加入生物素标记的二抗；加入链霉菌抗生物素蛋白－过氧化酶；DAB显色；图像分析仪计数；SPSS统计分析。ChinesejournalofCancer2003;22(11):1127-1134PCNA取材固定；加入PCNA抗体；加入生物素标记的二抗；加入底物；显色；图像分析仪计数；SPSS统计分析。SynovialsarcomaImmunohistochemicalStrongstainingofPCNA

J.Vet.Sci2004;5(2):173-180Ki-67PositivestainingforKi67,CancerCytopathl2004;102:142-97.MitoticIndex，MI经典方法免疫荧光方法经典方法Synovialsarcome.MitoticfiguresJ.Vet.Sci2004;5(2):173-180JNipponMedSch2003;70（3）219-226免疫荧光方法8.ParameterofCellCycleTc、TG1、Ts、TG2和TM；常用的有3H-TdR标记法和流式细胞技术flowcytometryFlowCytometry利用流式细胞仪flowcytometre，FCM细胞快速、准确、多参数的定量分析体积，DNA含量、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体量、表面抗原量等等无菌分类收集活细胞。BreastCancerResearchandTreatment2004;84:251-260应用肿瘤的周期化、同步化治疗LI检测对化疗药物的敏感性提示疗效和预后