微生物计数检查法USP61中英对照版自然科学

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非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法

USP61中英对比版

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PreparationofTestStrains供试菌株的制备

Usestandardizedstablesuspensionsofteststrainsorprepareasstatedbelow.Seed-lotculturemaintenancetechniques(seed-lotsystems)areusedsothattheviablemicroorganismsusedforinoculationarenotmorethan5passagesremovedfromtheoriginalmasterseed-lot.GroweachofbacterialandfungalteststrainsseparatelyasdescribedinTable1.

使用供试菌株的标准化稳定悬浮液或按下面所述制备。使用菌种保藏技术（种子批系统），以便用于接种的可萌发微生物从最初的主种子批开头传代不超过5次。根据在表1中的描述，分别培育每个细菌和霉菌供试菌株。

UseBufferedSodiumChloride-PeptoneSolutionpH7.0orPhosphateBufferSolutionpH7.2tomaketestsuspensions;tosuspendA.nigerspores,0.05%ofpolysorbate80maybeaddedtothebuffer.Usethesuspensionswithin2hours,orwithin24hoursifstoredbetween2oand8o.AsanalternativetopreparingandthendilutingafreshsuspensionofvegetativecellsofA.nigerorB.subtilis,astablesporesuspensionispreparedandthenanappropriatevolumeofthesporesuspensionisusedfortestinoculation.Thestablesporesuspensionmaybemaintainedat2oto8oforavalidatedperiodoftime.

使用pH7.0的缓冲氯化钠-蛋白胨溶液，或pH7.2的磷酸盐缓冲液制作供试悬浮液；为使黑曲霉孢子悬浮，可以将0.05%的聚山梨醇酯80加入该缓冲液中。这些悬浮液需在2个小时之内使用，或假如存放在2o至8o的条件下，则可在24小时之内使用。作为制备然后稀释黑曲霉或枯草杆菌的新奇体细胞悬浮液的替代方法，可制备稳定的孢子悬浮液，然后将适量的孢子悬浮液用于试验接种。此稳定的孢子悬浮液可以在2o至8o之间于一段经过验证的时间内保存。

NegativeControl阴性对比

Toverifytestingconditions,anegativecontrolisperformedusingthechosendiluentinplaceofthetestpreparation.Theremustbenogrowthofmicroorganisms.为了确认试验的条件，在制备供试品的场所使用所选的稀释液替代供试品，作阴性对比。其必需没有微生物的增长。

GrowthPromotionoftheMedia培育基的生长促进

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Testeachbatchofready-preparedmediumandeachbatchofmediumpreparedeitherfromdehydratedmediumorfromtheingredientsdescribed.

对每一批已经制备好的培育基和每一批从脱水培育基或依据描述的组分制备出来的培育基，进行测试。

Inoculateportions/platesofSoybean-CaseinDigestBrothandSoybean-CaseinDigestAgarwithasmallnumber(notmorethan100cfu)ofthemicroorganismsindicatedinTable1,usingaseparateportion/plateofmediumforeach.InoculateplatesofSabouraudDextroseAgarwithasmallnumber(notmorethan100cfu)ofthemicroorganismsindicatedinTable1,usingaseparateplateofmediumforeach.IncubateaccordingtotheconditionsdescribedinTable1.

在部分/整个平皿内的大豆酪蛋白消化物肉汤培育基和大豆酪蛋白消化物琼脂培育基中接种少量(不超过100cfu)表1中指定的微生物，每种微生物均使用单独的部分/整个平皿的培育基。在平皿内的Sabouraud（沙氏）葡萄粮琼脂培育基中接种少量(不超过100cfu)表1中指定的微生物，每种均使用一个单独平皿的培育基。根据表１中描述的条件进行培育。

Forsolidmedia,growthobtainedmustnotdifferbyafactorgreaterthan2fromthecalculatedvalueforastandardizedinoculum.Forafreshlypreparedinoculum,growthofthemicroorganismscomparabletothatpreviouslyobtainedwithapreviouslytestedandapprovedbatchofmediumoccurs.Liquidmediaaresuitableifclearlyvisiblegrowthofthemicroorganismscomparabletothatpreviouslyobtainedwithapreviouslytestedandapprovedbatchofmediumoccurs.

对于固体培育基，所获得的生长与标准化接种体的计算值之间的差异因素决不能大于2。对于刚刚制备好的接种体，发生的微生物生长与用此前检验并批准过的培育基批次所得到的微生物生长相当。假如消失了与此前从上一个经过测试并批准的培育基批次获得的微生物生长相当的、清楚可见的、微生物生长，则液体培育基适用。

SuitabilityoftheCountingMethodinthePresenceofProduct在存在产品的状况下计数法的适用性

PREPARATIONOFTHESAMPLE样品的制备

Themethodforsamplepreparationdependsonthephysicalcharacteristicsoftheproducttobetested.Ifnoneoftheproceduresdescribedbelowcanbedemonstratedtobesatisfactory,asuitablealternativeproceduremustbedeveloped.样品制备方法取决于供试品的物理特征。假如以下描述的规程不能够被令人满足地证明，则必需开发一个适用的替代规程。

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Water-SolubleProducts—Dissolveordilute(usuallya1in10dilutionisprepared)theproducttobeexaminedinBufferedSodiumChloride-PeptoneSolutionpH7.0,PhosphateBufferSolutionpH7.2,orSoybean-CaseinDigestBroth.Ifnecessary,adjusttoapHof6to8.Furtherdilutions,wherenecessary,arepreparedwiththesamediluent.

水溶性产品——溶解或稀释（通常制备1:10的稀释液）供试品，于pH值为7.0的缓冲氯化钠-蛋白胨溶液中，pH值为7.2的磷酸盐缓冲液，或大豆酪蛋白消化物肉汤培育基。如有必要，将pH值调整为6至8。在需要时，用相同的稀释剂进一步地稀释。

NonfattyProductsInsolubleinWater—Suspendtheproducttobeexamined(usuallya1in10dilutionisprepared)inBufferedSodiumChloride—PeptoneSolutionpH7.0,PhosphateBufferSolutionpH7.2,orSoybean—CaseinDigestBroth.Asurface—activeagentsuchas1gperLofpolysorbate80maybeaddedtoassistthesuspensionofpoorlywettablesubstances.Ifnecessary,adjusttoapHof6to8.Furtherdilutions,wherenecessary,arepreparedwiththesamediluent.不溶于水的非脂肪性供试品——将检测的供试品（通常制备1:10的稀释液）悬浮于pH值为7.0的缓冲氯化钠-蛋白胨溶液，pH值为7.2的磷酸盐缓冲液，或者大豆酪蛋白消化物肉汤培育基中。可以加入某个表面活性剂，比如1克每升的聚山梨酯80，以关心难以与水混合的物质悬浮。如有必要，调整pH值为6至8。在需要时，用相同的稀释剂进一步的稀释。

FattyProducts—Dissolveinisopropylmyristatesterilizedbyfiltration,ormixtheproducttobeexaminedwiththeminimumnecessaryquantityofsterilepolysorbate80oranothernoninhibitorysterilesurface-activereagentheated,ifnecessary,tonotmorethan40oor,inexceptionalcases,tonotmorethan45o.Mixcarefullyandifnecessarymaintainthetemperatureinawaterbath.Addasufficientquantityoftheprewarmedchosendiluenttomakea1in10dilutionoftheoriginalproduct.Mixcarefully,whilemaintainingthetemperaturefortheshortesttimenecessaryfortheformationofanemulsion.Furtherserial10-folddilutionsmaybepreparedusingthechosendiluentcontainingasuitableconcentrationofsterilepolysorbate80oranothernoninhibitorysterilesurface-activereagent.

脂肪性供试品——溶解于以过滤除菌的豆蔻酸异丙酯，或者将供试品与所需最少量的、经过加热的无菌聚山梨酯80或另一种非抑菌性的无菌表面活性剂进行混合，如有必要，可加热至不超过40o或者，在特别状况下，至不超过45o。认真混匀，如有必要，在水浴锅里中维持该温度。加入充分数量、经过预热的所选择稀释剂，制成原产品的1:10稀释液。认真混匀，同时维持该温度至形成乳化剂所必需的最短的时间。可以用所选择的含有适当浓度的无菌聚山梨酯80或者另一种非抑菌性的无菌表面活性剂的稀释液，来制备后续的系列10倍稀

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释液。

FluidsorSolidsinAerosolForm—Asepticallytransfertheproductintoamembranefilterapparatusorasterilecontainerforfurthersampling.Useeitherthetotalcontentsoradefinednumberofmetereddosesfromeachofthecontainerstested.气溶胶与液溶胶——以无菌操作将供试品转移至一个过滤膜设备或一个无菌容器里，以进一步取样。从每个被检测的容器中，使用全部内容物或剂量的规定倍数。

TransdermalPatches—Removetheprotectivecoversheets(“releaseliners”)ofthetransdermalpatchesandplacethem,adhesivesideupwards,onsterileglassorplastictrays.Covertheadhesivesurfacewithasuitablesterileporousmaterial(e.g.,sterilegauze)topreventthepatchesfromstickingtogether,andtransferthepatchestoasuitablevolumeofthechosendiluentcontaininginactivatorssuchaspolysorbate80and/orlecithin.Shakethepreparationvigorouslyforatleast30minutes.

贴剂——去除贴剂的防护面（“释放衬板”）并将它们放置在无菌玻璃或塑料托盘上，胶贴剂的一面对上。用适当的无菌多孔材料（例如：无菌纱布）盖住胶贴面，以防止贴剂粘在一起，并将贴剂转移到所选的含有灭活剂（例如聚山梨醇酯80和/或卵磷脂）的适量稀释剂中。用力摇动供试品至少30分钟。

INOCULATIONANDDILUTION接种和稀释

Addtothesamplepreparedasdirectedaboveandtoacontrol(withnotestmaterialincluded)asufficientvolumeofthemicrobialsuspensiontoobtainaninoculumofnotmorethan100cfu.Thevolumeofthesuspensionoftheinoculumshouldnotexceed1%ofthevolumeofdilutedproduct.

向按上述规定制备的样品中以及向对比制备品（其中无供试物质）中，加入充分体积的微生物悬浮液，以获得一个不多于100cfu的接种体。接种的菌体悬浮液体积应当不超过被稀释产品体积的1%。

Todemonstrateacceptablemicrobialrecoveryfromtheproduct,thelowestpossibledilutionfactorofthepreparedsamplemustbeusedforthetest.Wherethisisnotpossibleduetoantimicrobialactivityorpoorsolubility,furtherappropriateprotocolsmustbedeveloped.Ifinhibitionofgrowthbythesamplecannototherwisebeavoided,thealiquotofthemicrobialsuspensionmaybeaddedafterneutralization,dilution,orfiltration.

为证明供试品有可接受的微生物回收率，必需使用已制备样品的最低可能稀释倍数来进行检

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测。当由于抗菌活性或低溶解度而无法做到这一点时，必需进一步开发更适合的规程。假如样品对生长的抑制不能以其他方式避开，可以在中和、稀释、或过滤之后，加入等量的微生物悬浮液。

NEUTRALIZATION/REMOVALOFANTIMICROBIALACTIVITY抗菌活性的中和/去除

ThenumberofmicroorganismsrecoveredfromthepreparedsampledilutedasdescribedinInoculationandDilutionandincubatedfollowingtheproceduredescribedinRecoveryofMicroorganismsinthePresenceofProduct,iscomparedtothenumberofmicroorganismsrecoveredfromthecontrolpreparation.

用制备好的样品按接种和稀释项下的描述稀释，并按在产品存在的状况下微生物的回收率项下描述的规程培育，将从中回收的微生物的数量与从对比制备品中回收的微生物的数量进行比较。

Ifgrowthisinhibited(reductionbyafactorgreaterthan2),thenmodifytheprocedurefortheparticularenumerationtesttoensurethevalidityoftheresults.Modificationoftheproceduremayinclude,forexample,

假如生长被抑制（以大于2的因素削减），那么修改特定的计数测试规程，以确保结果的有效性。规程的修改可以包括，例如：

(1)Anincreaseinthevolumeofthediluentorculturemedium稀释剂或培育基体积的增加;

(2)Incorporationofaspecificorgeneralneutralizingagentsintothediluent将某个特定或通用的中和剂整合至稀释剂中;(3)Membranefiltration膜过滤;or或

(4)Acombinationoftheabovemeasures上述方法的组合.

NeutralizingAgents—Neutralizingagentsmaybeusedtoneutralizetheactivityofantimicrobialagents(seeTable2).Theymaybeaddedtothechosendiluentorthemediumpreferablybeforesterilization.Ifused,theirefficacyandtheirabsenceoftoxicityformicroorganismsmustbedemonstratedbycarryingoutablankwithneutralizerandwithoutproduct.

中和剂——中和剂可以用于中和抗菌剂（见表2）的活性。最好在灭菌之前，将它们加入到所选的稀释剂中或培育基中。假如使用，则必需通过进行一个带中和剂而不含产品的空白试验，来论证它们的功效和无毒性。

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Ifnosuitableneutralizingmethodcanbefound,itcanbeassumedthatthefailuretoisolatetheinoculatedorganismisattributabletothemicrobicidalactivityoftheproduct.Thisinformationservestoindicatethatthearticleisnotlikelytobecontaminatedwiththegivenspeciesofthemicroorganism.However,itispossiblethattheproductinhibitsonlysomeofthemicroorganismsspecifiedherein,butdoesnotinhibitothersnotincludedamongtheteststrainsorthoseforwhichthelatterarenotrepresentative.Then,performthetestwiththehighestdilutionfactorcompatiblewithmicrobialgrowthandthespecificacceptancecriterion.假如没有找到合适的中和方法，则可以假定未能分别所接种有机体的缘由是供试品杀灭微生物活性。这个信息关心指出此物品不太可能被特定微生物种群所污染。然而，有可能供试品只抑制这里所列出微生物中的某些，而并不抑制未包括在供试菌株之中其他微生物或者后者对其不具代表性的那些微生物。然后，用与微生物生长和详细接受标准相适应的最高稀释倍数进行试验。

RECOVERYOFMICROORGANISMSINTHEPRESENCEOFPRODUCT在产品存在的状况下微生物的回收

Foreachofthemicroorganismslisted,separatetestsareperformed.Onlymicroorganismsoftheaddedteststrainarecounted.

对所列出的每个微生物，做单独的检测。只计算所加入的供试菌株的微生物。

MembraneFiltration—Usemembranefiltershavinganominalporesizenotgreaterthan0.45μm.Thetypeoffiltermaterialischoseninsuchawaythatthebacteria-retainingefficiencyisnotaffectedbythecomponentsofthesampletobeinvestigated.Foreachofthemicroorganismslisted,onemembranefilterisused.膜过滤——使用一个标称孔径不超过0.45μm的膜过滤器。过滤器的材料按以下标准选择，即待检测样品的组成部分不会对细菌保留效率产生影响。对于所列出的每个微生物，单独使用一个膜过滤器。

TransferasuitablequantityofthesamplepreparedasdescribedunderPreparationoftheSample,InoculationandDilution,andNeutralization/Removalof

AntimicrobialActivity(preferablyrepresenting1goftheproduct,orlessiflargenumbersofcfuareexpected)tothemembranefilter,filterimmediately,andrinsethemembranefilterwithanappropriatevolumeofdiluent.

将根据样品的制备、接种和稀释、和抗菌活性的中和/去除项下描述所制备的适当数量的样品（最好相当于1克产品，在cfu数量估计较大时，也可少于此数量）转移至膜过滤器，马上过滤，并用适量的稀释剂冲洗膜过滤器。

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Forthedeterminationoftotalaerobicmicrobialcount(TAMC),transferthemembranefiltertothesurfaceoftheSoybean-CaseinDigestAgar.Forthedeterminationoftotalcombinedyeastsandmoldscount(TYMC),transferthemembranetothesurfaceoftheSabouraudDextroseAgar.IncubatetheplatesasindicatedinTable1.Performthecounting.

对于总好氧微生物计数的测定（TAMC），将滤膜转移至大豆酪蛋白消化物琼脂培育基的表面。对于总酵母菌和霉菌联合计数（TYMC）的测定，将膜转移至Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂培育基的表面。按表1中规定的条件培育这些平皿。进行计数。

Plate-CountMethods—Performplate-countmethodsatleastinduplicateforeachmedium,andusethemeancountoftheresult.

平板计数法——每种培育基至少进行两次平板计数法，并使用计数结果的平均值。

Pour-PlateMethod—ForPetridishes9cmindiameter,addtothedish1mLofthesamplepreparedasdescribedunderPreparationoftheSample,InoculationandDilution,andNeutralization/RemovalofAntimicrobialActivityand15to20mLofSoybean-CaseinDigestAgarorSabouraudDextroseAgar,bothmediamaintainedatnotmorethan45o.IflargerPetridishesareused,theamountofagarmediumisincreasedaccordingly.ForeachofthemicroorganismslistedinTable1,atleasttwoPetridishesareused.

倾注培育法——对于直径为9cm的平皿，将根据样品的制备、接种和稀释、抗菌活性的中和/去除项下的描述所制备的样品1mL以及15至20mL大豆酪蛋白消化物琼脂培育基或者Sabouraud（沙氏）葡萄粮琼脂培育基加入至平皿，此两种培育基的温度均维持在不超过45o。假如使用较大的平皿，琼脂培育基的量也需相应地增加。对于表1中所列出的每一个微生物，至少要使用两个平皿。

IncubatetheplatesasindicatedinTable1.Takethearithmeticmeanofthecountspermedium,andcalculatethenumberofcfuintheoriginalinoculum.

按表1中的指示培育这些平皿。取每培育基计数的算术平均值，计算在最初的接种体中的菌落数（cfu）数量。

Surface-SpreadMethod—ForPetridishes9cmindiameter,add15to20mLofSoybean-CaseinDigestAgarorSabouraudDextroseAgaratabout45otoeachPetridish,andallowtosolidify.IflargerPetidishesareused,thevolumeoftheagarisincreasedaccordingly.Drytheplates,forexample,inalaminar-airflowcabinetorinanincubator.ForeachofthemicroorganismslistedinTable1,atleasttwo

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Petridishesareused.Spreadameasuredvolumeofnotlessthan0.1mLofthesample,preparedasdirectedunderPreparationoftheSample,InoculationandDilution,andNeutralization/RemovalofAntimicrobialActivityoverthesurfaceofthemedium.IncubateandcountasdirectedforPour-PlateMethod.

表面铺展法——对于直径为9cm的平皿，倾入15至20mL、温度大约为45o的大豆酪蛋白消化物琼脂培育基或Sabouraud（沙氏）葡萄粮琼脂培育基至每个平皿中，静置凝固。假如使用较大的平皿，琼脂的数量也需相应地增加。干燥平皿，例如，在层流柜或恒温箱里。对于表1中列出的每个微生物，至少使用两个平皿。将已称量好的体积不少于0.1mL、根据样品的制备、接种和稀释、和抗菌活性的中和/去除项下的规定所制备的样品，铺展在培育基的表面。根据倾注培育法项下的规定培育和计数。

Most-Probable-Number(MPN)Method—TheprecisionandaccuracyoftheMPNMethodislessthanthatoftheMembraneFiltrationmethodorthePlate-CountMethod.Unreliableresultsareobtainedparticularlyfortheenumerationofmolds.Forthesereasons,theMPNMethodisreservedfortheenumerationofTAMCinsituationswherenoothermethodisavailable.Iftheuseofthemethodisjustified,proceedasfollows.

最大几率数（MPN）法——MPN法的精密度和精确     度低于膜过滤法或平板计数法。所获得的霉菌计数的结果尤其不行靠。由于这些缘由，MPN法被保留用于当没有其它可行方法状况下的总好氧微生物计数。假如有证据支持此方法的使用，则按如下进行。

Table2.CommonNeutralizingAgents/MethodsforInterferingSubstances表2.对干扰物质的常用中和试剂/方法

InterferingSubstance干扰物质

PotentialNeutralizingAgents/Method潜在中和试剂/方法

Glutaraldehyde,mercurials戊二醛，汞制剂

Sodiumhydrogensulfite(Sodiumbisulfite)亚硫酸氢钠

Phenolics,alcohol,aldehydes,sorbate酚类物质，酒精，醛类，山梨酸

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Dilution稀释剂

Aldehydes醛类

Glycine甘氨酸

Quaternaryammoniumcompounds(QACs),parahydroxybenzoates(parabens),bisbiguanides

季铵盐化合物（QACs），对羟苯甲酸（防腐剂），

Lecithin卵磷脂

QACs,iodine,parabensQACs，碘，防腐剂

Polysorbate聚山梨醇酯

Mercurials汞制剂

Thioglycollate硫胶质

Mercurials,halogens,aldehydes汞制剂，卤素，醛类

Thiosulfate硫代硫酸盐

EDTA(edetate)EDTA乙二胺四乙酸盐

MgorCaions镁或钙离子

Table3.Most-Probable-NumberValuesofMicroorganisms表3微生物的最大几率数的值

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ObservedCombinationsofNumbersofTubesShowingGrowthinEachSet每套显示生长的试管所观看到的数量组合

MPNpergorpermLofProduct每克或每毫升产品的最大几率数

95%ConfidenceLimits95%置信限度

NumberofgormLofProductperTube每管中的产品克或毫升数

Prepareaseriesofatleastthreeserial10-folddilutionsoftheproductasdescribedforPreparationoftheSample,InoculationandDilution,andNeutralization/RemovalofAntimicrobialActivity.Fromeachlevelofdilution,threealiquotsof1gor1mLareusedtoinoculatethreetubeswith9to10mLofSoybean-CaseinDigestBroth.Ifnecessaryasurface-activeagentsuchaspolysorbate80,oraninactivatorofantimicrobialagentsmaybeaddedtothemedium.Thus,ifthreelevelsofdilutionareprepared,ninetubesareinoculated.

按样品的制备，接种和稀释，以及抗菌活性的中和/移除这些项下的描述，制备系列的、至少连续三级、每级稀释10倍的产品稀释液。从每个水平的稀释液，将1克或者1毫升的三等分试样接种到三管9至10毫升的大豆酪蛋白消化物肉汤培育基。如有必要，像聚山梨醇酯80这样的表面活性剂，或某种抗菌剂的灭活剂可以加入到培育基中。因此，假如制备了三水平的稀释液，则会接种九个试管。

Incubatealltubesat30oto35ofornotmorethan3days.Ifreadingoftheresultsisdifficultoruncertainowingtothenatureoftheproducttobeexamined,subcultureinthesamebrothorinSoybean-CaseinDigestAgarfor1to2daysatthesametemperature,andusetheseresults.FromTable3,determinethemostprobablenumberofmicroorganismspergormLoftheproducttobeexamined.

培育全部的试管，温度为30o至35o之间，不超过3天。假如由于供试品的性质导致结果的读数很难或不确定，则在相同温度下，在同样的肉汤培育基或大豆酪蛋白消化物琼脂培育基中放置1至2天进行再次培育，并且使用这些结果。从表3中，确定每克或每毫升的供试品中微生物的最大几率数。

RESULTSANDINTERPRETATION结果和说明

WhenverifyingthesuitabilityoftheMembraneFiltrationmethodorthePlate-CountMethod,ameancountofanyofthetestorganismsnotdifferingbyafactorgreaterthan2fromthevalueofthecontroldefinedinInoculationandDilutionintheabsenceofproductmustbeobtained.WhenverifyingthesuitabilityoftheMPNMethod,thecalculatedvaluefromtheinoculummustbewithin95%confidencelimitsoftheresultsobtainedwiththecontrol.当确认膜过滤法或平板计数法的适用性时，任何供试微生物的平均计数与在没有产品的状况下，从培育和稀释项下规定的对比组的数值差距必需不超过2。当确认最大几率数法的适用

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性时，从接种体得到的计算值必需是在从对比组取得的结果的95%置信限度以内。

TESTINGOFPRODUCTS供试品的测试

AmountUsedfortheTest用于测试的数量

Unlessotherwisedirected,use10gor10mLoftheproducttobeexaminedtakenwiththeprecautionsreferredtoabove.Forfluidsorsolidsinaerosolform,sample10containers.Fortransdermalpatches,sample10patches.

除非另有规定，使用10克或者10毫升供试品，并实行上面提到的预防措施。对于气溶胶形式下的液体或固体，取10个容器作样品。对于贴剂，取10片作样品。

Theamounttobetestedmaybereducedforactivesubstancesthatwillbeformulatedinthefollowingconditions:theamountperdosageunit(e.g.,table,capsule,injection)islessthanorequalto1mg,ortheamountpergormL(forpreparationsnotpresentedindoseunits)islessthan1mg.Inthesecases,theamountofsampletobetestedisnotlessthantheamountpresentin10dosageunitsor10gor10mLoftheproduct.

对于某些活性物质来说，供试数量可以削减，前提是这些活性物质将会按如下条件组方：每剂量单位（例如，片，胶囊，注射液）数量小于或等于1毫克，或者每克或毫升中数量（对于不按剂量单位使用的制备品）小于1毫克。在这些状况下，供试样品数量不小于当前10剂量单位中存在的数量，或10克或10毫升的供试品。

ExaminationoftheProduct产品的检测

MEMBRANEFILTRATION膜过滤

Useafiltrationapparatusdesignedtoallowthetransferofthefiltertothemedium.PreparethesampleusingamethodthathasbeenshowntobesuitableasdescribedinGrowthPromotionTestandSuitabilityoftheCountingMethod,transfertheappropriateamounttoeachoftwomembranefilters,andfilterimmediately.Washeachfilterfollowingtheprocedureshowntobesuitable.使用能够将滤膜转移至培育基中的过滤设备。按生长促进测试和计数方法的适用性项下描述的、已经证明适用的方法制备样品，转移合适的量至两个膜过滤器中的每一个，并马上过滤。根据以下已经证明适用的规程清洗每个过滤器。

ForthedeterminationofTAMC,transferoneofthemembranefilterstothesurfaceofSoybean-CaseinDigestAgar.ForthedeterminationofTYMC,transfertheothermembranetothesurfaceofSabouraudDextroseAgar.IncubatetheplateofSoybean-CaseinDigestAgarat30oto35ofor3to5daysandtheplateofSabouraudDextroseAgarat20oto25ofor5to7days.CalculatethenumberofcfupergorpermLofproduct.

对于总好氧微生物计数的测定，转移滤膜中的一个至大豆酪蛋白消化物琼脂培育基的表面。对酵母菌和霉菌联合计数的测定，转移另一个滤膜至Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂培育基的表面。在温度30o至35o之间培育大豆酪蛋白消化物琼脂培育基的平皿3至5天，并在温度20o至25o之间培育Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂培育基的平皿5至7天。计算每克或每毫升供试品的菌落数（cfu）数量。

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Whenexaminingtransdermalpatches,separatelyfilter10%ofthevolumeofthepreparationdescribedforPreparationoftheSamplethrougheachoftwosterilefiltermembrances.TransferonemembrancetoSoybean-CaseinDigestAgarforTAMCandtheothermembranetoSabouraudDextroseAgarforTYMC.

当检测贴剂时，分别将样品的制备项下描述的制备品数量的10%过滤通过两个无菌滤膜中的一个。为总好氧微生物计数将一个滤膜转移至大豆酪蛋白消化物琼脂培育基，以检测总好氧微生物计数，而将另一个滤膜转移至Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂培育基，以检测总酵母菌和霉菌联合计数。

PLATE-COUNTMETHODS平板计数法

Pour-PlateMethod—PreparethesampleusingamethodthathasbeenshowntobesuitableasdescribedinGrowthPromotionTestandSuitabilityoftheCountingMethod.PrepareforeachmediumatleasttwoPetridishesforeachlevelofdilution.IncubatetheplatesofSoybean-CaseinDigestAgarat30oto35ofor3to5daysandtheplatesofSabouraudDextroseAgarat20oto25ofor5to7days.Selecttheplatescorrespondingtoagivendilutionandshowingthehighestnumberofcolonieslessthan250forTAMCand50forTYMC.Takethearithmeticmeanperculturemediumofthecounts,andcalculatethenumberofcfupergorpermLofproduct.倾注培育法——使用已经证明适用的、在生长促进测试和计数方法的适用性项下描述的方法制备样品。对于每种培育基，为每个稀释水平预备至少两个培育平皿。在温度30o至35o之间，培育大豆酪蛋白消化物琼脂培育基的平皿3至5天，并在温度20o至25o之间，培育Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂的平皿5至7天。选择总好氧微生物的数量不超过250个和总酵母和霉菌的数量不超过50的稀释平板进行计数。取每培育基计数的算术平均值，并计算每克或每毫升供试品的cfu数量。

Surface-SpreadMethod—PreparethesampleusingamethodthathasbeenshowntobesuitableasdescribedinGrowthPromotionTestandSuitabilityoftheCountingMethod.PrepareatleasttwoPetridishesforeachmediumandeachlevelofdilution.Forincubationandcalculationofthenumberof