丽格海棠种苗组培快繁技术规程

1DBXX/XXXXX—XXXX丽格海棠组培快繁技术规程本文件规定了丽格海棠(Begonia×hiemalis)组培快繁的培养基配制、外植体的采集与消毒，不定芽诱导和增殖培养，生根培养，炼苗和移栽，移栽后管理，检疫、包装及运输等要求。本文件适用于丽格海棠组培苗生产培育。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则LY/T1829林业植物产地检疫技术规程NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4培养基配制选用MS为基本培养基，培养基成分见附录A。不定芽诱导和继代培养基：1/2MS+1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，pH5.8。增殖培养基为1/2MS+1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+150mg/L肌醇+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，pH5.8。生根培养基：1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+150mg/L肌醇+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，pH5.8。5外植体的采集与消毒5.1采集部位在无病虫害的丽格海棠种植基地，选取生长健壮、无病害的植株，取生长健壮的新鲜叶片作外植体2DBXX/XXXXX—XXXX备用。5.2采集材料的处理即采即用。超过1h需用湿润的毛巾或滤纸包裹，然后置于温度为0℃~4℃的冰壶或冷藏室中保存，保存时间不超过24h。5.3外植体灭菌消毒5.3.1预处理预处理步骤如下：A)将叶片用自来水冲洗干净，剪切成约2.5cm见方的小片，放入烧杯中，用0.7g/L洗洁精水做表面活性剂，置于0.05%NaClO中浸泡10min,B)用自来水流动冲洗30min，C)蒸馏水清洗3～4次，D)重复上述步骤2次，将材料取出放置于无菌干燥滤纸上，吸干表面水分置于超净台上。5.3.2灭菌消毒在超净工作台上，用浓度为75%的酒精表面消毒2min，无菌水冲洗1次，再在质量体积百分比浓度为0.1%氯化汞溶液中灭菌8min，无菌水冲洗4次，每次5min，无菌滤纸吸干表面水分，将消毒处理后的叶片除去边缘，用消毒刀片切成约1cm见方的小片备用。6不定芽诱导和增殖培养将切好的叶片放入不定芽诱导培养基中，10d后不定芽生成，诱导出的不定芽在增殖培养基上继代增殖两次，获得丛生芽。培养条件为温度23℃~25℃,光照强度3000Lx，光照时间16h/d。继代次数不超过8次。7生根培养将继代培养的丛生芽在无菌超净台上接种到生根培养基中，培养条件为温度25℃,光照强度3000Lx，光照时间16h/d。8炼苗和移栽8.1组培苗炼苗组培苗在移栽前将培养瓶放置室温自然散射光下，闭口炼苗3d左右，去掉瓶盖再炼苗3d。8.2组培苗移栽3DBXX/XXXXX—XXXX组培苗出苗时，将根部培养基清洗干净，然后用50%多菌灵可湿性粉剂600倍液对组培苗进行蘸根杀菌处理，栽植到栽培基质中，轻压根部。基质要求排水透气性强、固定性好、肥力高。选用泥炭、珍珠岩体积配比为4：1的混合基质，泥炭纤维度20mm～45mm，pH值6.0～7.0。温度20℃~30℃,空气湿度≥70%。9移栽后管理9.1水肥管理栽后浇透定根水，隔2d～3d再浇1次，以后根据土壤情况控制浇水量，保持土壤通透，确保不积水，随时除草，短期内不施肥。如果夏季栽种，栽植后适当遮荫以减少水分蒸发，2～3周后将遮荫物去除，使其正常生长。每个月喷洒2次0.1%多菌灵，20d左右喷施1/1000氮磷钾肥。2个月后须将健康植株转至新的营养钵中。9.2病虫害防治按照GB/T8321（所有部分）和NY/T2306的规定执行。10检疫、包装及运输10.1检疫检疫按照LY/T1829的规定执行。10.2包装10.2.1瓶苗包装组培苗保留在培养瓶中，将培养瓶放在泡沫箱里，箱外再用纸箱包装。10.2.2穴盘苗包装穴盘苗装在小纸箱内，再将小纸箱装在大纸箱中，每箱装3～4个穴盘。箱体上要带有透气孔，在包装箱上贴上标签，注明品种、数量、规格、生产单位和日期。10.3运输装车时切勿倒置，运输时避免日晒雨淋，运输过程温度保持在16℃~20℃。4DBXX/XXXXX—XXXX（规范性）MS基本培养基成分表表A.1规定了MS基本培养基成分。表A.1MS基本培养基成分表母液化合物数量蒸馏水定容量（ml）配制1L培养基需母液量（ml）ANH4NO3KNO3KH2PO4MgSO4.7H2O3.7CaCl2。2H2O4.4BFeSO40.5575Na2-EDTA0.754CKI0.0831Na2MoO4.2H2O0.025CoCl2。6H2O0.0025CuSO4.5H2O0.0025MnSO4.4H2