课件药分章七章芳香胺类

第七章苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析AnalysisofAromaticamines第一节结构与性质Phenethylamine苯乙胺类药物的基本结构*具有烃胺侧链，属于芳烃胺类药物。多数在苯环上有1~2个羟基取代基。如在苯环3、4位上有羟基取代，则为儿茶酚胺类药物。肾上腺素(adrenaline)盐酸克伦特罗(clenbuterolhydrochloride)硫酸沙丁胺醇(salbutamolsulfate)盐酸麻黄碱(ephedrinehydrochloride)R1

R2

R3HX常见的苯乙胺类药物苯乙胺-化学性质弱碱性：烃胺基侧链，仲胺氮－弱碱性游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水酚羟基特性：邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色。光学活性：手性碳原子，具有旋光性。苯环取代基特性：如盐酸克伦特罗芳伯氨基；紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。第二节鉴别试验与三氯化铁反应、与甲醛－硫酸反应（生成醌式有色物）药物三氯化铁甲醛－硫酸肾上腺素Adrenaline0.1mol/L盐酸液中显翠绿色，加氨试液显紫色，紫红色红色重酒石酸去甲肾上腺素Noradrenalinebitartrate翠绿色，加碳酸氢钠试液显蓝色，红色淡红色盐酸去氧肾上腺素Phenylephrinehydrochloride紫色玫瑰红，橙红，深棕红盐酸异丙肾上腺素Isoprenalinehydrochloride深绿色，滴加新制5%碳酸氢钠液，显蓝紫色，红色棕色，暗紫色盐酸多巴胺Dopaminehydrochloride墨绿色，滴加1%氨溶液，显紫红色07:46:18还原反应（酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色）肾上腺素碘或过氧化氢中性或酸性肾上腺素红放置棕红色多聚体盐酸异丙肾上腺素偏酸性条件碘异丙肾上腺素红硫代硫酸钠淡红色溶液重酒石酸去甲肾上腺素酒石酸氢钾饱和液pH3.56碘试液放置5min硫代硫酸钠溶液为无色或仅显微红色或淡紫色肾上腺素或盐酸异丙肾上腺素明显的深红棕色或紫色鉴别试验氨基醇的双缩脲反应 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱，芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲特征反应。蓝紫色鉴别试验与亚硝基铁氰化钠反应(Rimini试验)

重酒石酸间羟胺的脂肪伯氨基重酒石酸间羟胺水溶解亚硝基铁氰化钠试液丙酮数滴，碳酸氢钠少量△红紫色脂肪伯胺基的专属反应丙酮不含有甲醛鉴别试验紫外特征吸收药物溶剂浓度(mg/ml)λmax(nm)吸收度(A)重酒石酸间羟胺水0.10272盐酸异丙肾上腺素水0.052800.50盐酸多巴胺0.5%硫酸0.03280盐酸芬氟拉明0.1mol/L盐酸0.25263,270盐酸苯乙双胍水0.012340.60盐酸克伦特罗0.1mol/L盐酸0.03243,296硫酸沙丁胺醇水0.08274盐酸伪麻黄碱水0.50251,257,263红外特征吸收：上述药物还可采用红外吸收光谱进行鉴别第三节特殊杂质检查酮体检查生产工艺：酮体氢化还原制得药物，若氢化不完全则引入酮体杂质。药物检查的杂质溶剂样品浓度(mg/ml)测定波长(nm)A肾上腺素酮体HCl(9→2000)2.0310不得过0.05盐酸去氧肾上腺素酮体水2.0310不得大于0.20重酒石酸去甲肾上腺素酮体水2.0310不得大于0.05盐酸异丙肾上腺素酮体水2.0310不得大于0.15盐酸甲氧明酮胺水1.5347不得大于0.06紫外分光光度法检查酮体的条件及要求310酮体样品利用酮体在紫外310nm处有最大吸收，而药物本身在此波长几乎没有吸收，测定一定浓度下样品溶液在310nm处的吸收度来控制酮体的限量。比较法07:46:18光学纯度检查大多数苯乙胺类拟肾上腺素药物分子结构中存在手性碳原子通过比旋度测定控制药物的质量光学纯度检查最佳方法-手性分离重酒石酸去甲肾上腺素的光学纯度检查：称取重酒石酸去甲肾上腺素消旋体约50mg溶于5ml蒸馏水中，滴加氨水调pH为7

8；以乙酸乙酯萃取3次，所得乙酸乙酯层用蒸馏水洗涤2次，再用1g硫酸钠脱水，过滤除去硫酸钠，得到溶液置于50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得手性分离系统适用性溶液。同法制备(R)-重酒石酸去甲肾上腺素供试品溶液。取20l注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定。用ChiralpakAD-H色谱柱，；以正己烷-乙醇-乙醇胺(800∶200∶2)为流动相；检测波长为280nm；流速0.8ml/min。对映体的分离因子为7.2。通过手性高效液相色谱法分离，按峰面积归一化法，可以测定重酒石酸去甲肾上腺素的光学纯度（ee%)色谱法和电泳法第四节含量测定原料：非水溶液滴定法、溴量法、亚硝酸钠法制剂：比色法、紫外分光光度法、高效液相色谱法 非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行的酸碱滴定测定法。主要应用对象：有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐以及有机酸碱金属盐类药物或有机弱酸。酸性溶剂：冰醋酸碱性溶剂：DMF两性溶剂：甲醇惰性溶剂：氯仿，甲苯，丙酮一、非水溶液滴定法一、非水溶液滴定法该类药物（碱性药物为例）为什么要采用非水滴定法？在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定（滴定突跃不明显，滴定终点难以判断、无法获得满意的测定结果)。在酸性非水介质中（如gHAc中），则能显示出较强的碱性，滴定突跃增大，可以顺利地进行中和滴定。非水溶液滴定法原理＊置换滴定，即用强酸（HClO4）置换出与生物碱结合的较弱的酸（HA）供试品：以消耗标准液8ml计算。溶剂：gHAc，一般用量10~30ml，滴定剂：0.1mol/LHClO4/无水gHAc溶液指示剂：结晶紫做空白试验测定方法非水溶液滴定法适用范围：pKb＞8的有机碱盐pKb为8~10选冰醋酸作溶剂pKb为10~12选冰醋酸和醋酐作溶剂pKb为12

选醋酐作溶剂非水溶液滴定法HClO4、HBr、HCl、H2SO4、HNO3水中酸强度相等。＊gHAc中酸强度不相同.HClO4＞HBr＞HCl＞H2SO4＞HNO3＞其它弱酸酸根的影响非水溶液滴定法氢卤酸盐的测定氢卤酸gHAc中酸性较强，对滴定有影响。排除方法：加入过量的HgAc2/gHAc溶液非水溶液滴定法◆水的膨胀系数是0.21×10-3/

C◆gHAc膨胀系数是1.1×10-3/

C，较大，体积随温度变化较大，且还具有挥发性。测定样品与标定标准溶液时温度不同，应对浓度进行校正。(浓度校正因子F)

标准溶液（滴定剂）的稳定性其中：0.0011：gHAc的膨胀系数t0和t1：标定标准溶液和测定样品时的温度N0和N1：t0和t1所对应的标准溶液的浓度★说明：ⅰ．

t1-t0

>10

Cⅱ．或贮存时间超过30天则在临用前必须重新标定标准溶液的浓度。校正公式：终点指示方法紫蓝蓝绿黄绿黄（碱性区）—————→（酸性区）终点的颜色应用电位法校准。最常用的指示剂是结晶紫CrystalViolet（CV）例：重酒石酸去甲肾上腺素－－直接滴定盐酸克伦特罗－－加醋酸汞消除氢卤酸干扰；由于碱性较弱，电位法指示终点硫酸沙丁胺醇－－加入醋酐以增大突跃，结晶紫为指示剂注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解样品后应放冷后再加醋酐。非水溶液滴定法--11种(P229)

基本原理：化学计量关系：1：61药物=3Br2=3I2=6Na2S2O3

二、溴量法

盐酸去氧肾上腺素和重酒石酸间羟胺

盐酸克仑特罗分子结构中含有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐，可用永停滴定法取本品约0.25g，精密称定，置100ml烧杯中，加盐酸溶液(1→2)25ml使溶解，再加水25ml，照永停滴定法，用亚硝酸钠滴定液(0.05mol/L)滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.05mol/L)相当于15.68mg的C12H18Cl2N2O

HCl

三、亚硝酸钠法四、紫外分光光度法&比色法盐酸甲氧明注射液含量测定：精密量取本品适量(约相当于盐酸甲氧明100mg)，置250ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在290nm的波长处测定吸光度，按C11H17NO3

HCl的吸收系数()为137计算，即得。紫外分光光度法重氮化-偶合显色或与亚铁离子络合显色 以盐酸克伦特罗为例，测定原理如下：注意：由于偶合剂（N-(1-萘基)-乙二胺）与亚硝酸也能显色干扰测定，所以在重氮化后，应加入氨基磺酸铵分解剩余的亚硝酸。比色法五、高效液相色谱法高效分离，高灵敏度和高选择性－可用于制剂常规分析，临床药物监测和体内药物动力学研究。例1：重酒石酸去甲肾上腺素注射液分析色谱条件：色谱柱：ODS流动相：0.14%庚烷基磺酸钠溶液－甲醇(65:35)，用磷酸调pH至3.0±0.1，流速：1.0ml/min检测波长：280nm测定方法：精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1→25）稀释至刻度，摇匀，取2μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重酒石酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。第五节体内药物分析动物组织中的盐酸克伦特罗残留的测定—瘦肉精

瘦肉精（Heparinase）促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。

β-兴奋剂(β-agonist)

小知识特布他林(Terbutaline)

莱克多巴胺

(Ractopamine)盐酸克伦特罗

(clenbuterol)沙丁胺醇(Salbutamol)

盐酸克伦特罗拟肾上腺素类药物β-受体激动剂盐酸克伦特罗游离脂肪酸增加

盐酸克伦特罗的作用加强体内脂肪分解

增强支气管纤毛活动

促进粘液溶解，利于痰液排出

抑制蛋白质分解，加强糖原分解

解除支气管痉挛

危害近年来，人们对盐酸克伦特罗的研究日益活跃，对其监控检测方法的发展无疑是有利于民的。特点：易残留，难代谢，性质稳定，难以消除在大鼠、猪和肉用犊牛试验中发现心脏容量减少，使皮肤变薄，导致该器官的轻度萎缩以及肝和肺的萎缩，后肢发软，肌肉震颤，心率加快。屠宰时可见肉色深、肉质坚硬、干燥。

对人的心脏有很大的刺激作用，产生心悸、心慌；对神经系统刺激，产生恶心、呕吐、头晕、乏力和肌肉颤动、手抖甚至不能站立等现象；长期食用还会导致染色体畸变，诱发恶性肿瘤，严重的可以致人死亡。

畜人盐酸克伦特罗的研究方法经典的溶剂提取固相萃取(SPE)基质固相分散(MSPD)免疫亲和柱等净化提取液去除非检测信号的背景浓缩待测液前处理技术气相色谱-质谱联用液相色谱-质谱联用修饰电极技术生物传感器技术高效毛细管电泳放射免疫分析酶联免疫滴金免疫技术高效液相色谱气相色谱凝胶渗透色谱色谱技术波谱与色谱联用技术电化学技术免疫分析技术色谱技术波谱与色谱联用技术电化学技术免疫分析技术色谱技术波谱与色谱联用技术电化学技术免疫分析技术检测技术检测技术目的手段1.提取称取动物肝脏组织样品5g

0.05g于带盖的聚四氟乙烯离心管中，加入乙酸乙酯15ml，再加入10.0%碳酸钠溶液3ml，然后以10000r/min以上的速度匀质60秒，盖上盖子以5000r/min的速度离心2分钟，吸取上层有机溶剂于离心管中，在残渣中再加入乙酸乙酯10ml，在涡旋混合器上混合1分钟，离心后吸取有机溶剂并合并提取液。NY/T468-2006在收集的有机溶剂中加入0.10mol/L的盐酸溶液5ml，涡旋混合30秒，以5000r/min的速度离心2分钟，吸取下层水溶液，同样步骤重复萃取一次，合并两次萃取液，用2.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至5.2。2.净化SCX小柱依次用甲醇5ml、水5ml和30mmol/L盐酸5ml活化，然后将上述萃取液上样至固相萃取小柱中依次用水5ml和甲醇5ml淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，抽干SCX小柱，再用4%氨化甲醇溶液5ml洗脱，收集洗脱液。

3.测定

(1)衍生化：在50℃水浴中用氮气吹干上述洗脱液，加入甲苯100

l和BSTFA(双三甲基硅烷三氟乙酰胺)100

l，试管加盖后于涡旋混合器上振荡30秒，在80℃的烘箱中加热衍生1小时(盖住盖子)；同时吸取标准工作液0.5ml加入到4%氨化甲醇溶液4.5ml中，用氮气吹干后同样品操作，待衍生结束后加入甲苯0.3ml转入进样小瓶中，进行气相色谱-质谱(GC/MS)分析。(2)GC/MS测定参数：色谱柱HP-5MS5%苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.25mm(内径)，0.25

m(膜厚)；进样口温度220℃；进样方式不分流；进样体积1

l；柱温70℃(保持0.6分钟)，以25℃/min升温至200℃(保持6分钟)，以25℃/min升温至280℃(保持5分钟)；载气氦气；流速0.9ml/min(恒流)；GC/MS传输线温度280℃；溶剂延迟8分钟；EM电压高于调谐电压200V；离子源(EI)温度200℃；四极杆温度160℃；选择离子监测(m/z)86、212、262、277。4.定性定量方法(1)定性：样品峰与标样的保留时间之差不多于2秒，并人工比较选择离子的丰度，其中试样峰的选择离子相对强度(与基峰的比例)不超过标准相应选择离子相对强度平均值的

20％(m/z262)和

50％(m/z212、277)。(2)定量方法：选择试样峰(m/z86)