药物分析方法学验证中各项指标的深度剖析

药物分析方法学验证中各项指标的深度剖析1编辑ppt一、线性试验主成分含量测定以测定浓度为100%，50%~120%之间选取5个点即可。

溶出〔释放〕度测定以释放量的10%～120%间选取5个点即可。

杂质含量用杂质对照品准确测定以杂质限度为100%，50%~120%之间选取5个点即可。2编辑ppt测定结果：

1〕阐述如何看待截距和斜率、如何应用。

2〕误差在哪里，应用时的本卷须知。

3〕为什么没有不成线性的？通常C、H、O、N结构，紫外监测器决定。

个别化学键所致。梯度洗脱时，有时会出现不成线性。

4〕都成线性、为何还要做？最小二乘法的原理知晓。3编辑ppt唑来磷酸结构式4编辑ppt引申使用：

1〕有关物质测定归一化法和自身对照法的相互妙用。

2〕缓释制剂溶出度测定，对照品浓度设定为中间浓度。举例说明。

3〕回收率试验为何做80%~120%即可？亦及样品浓度与对照品浓度接近到何等程度的理解。

4〕国内只注重相关系数，不注重截距。5编辑ppt二、精密度试验重复性试验：连续进样6次。

中间精密度试验和重现性试验通过“耐用性试验中的溶液稳定性试验〞来表达。

浓度极低时才会不理想，加大进样量。

色谱峰形极为重要，对称性、柱效等参数。加大柱温、增加流动相中有机相比例，使被测物质峰尽快出峰。6编辑ppt三、准确度试验用回收率来衡量作法：在80%~120%间选择3点或5点，原因是由外标一点法决定的。

杂质、且有杂质对照品的，可采用参加法，即加样回收率来评价。

一般情况下，只要空白辅料无干扰，回收率均是良好的！7编辑ppt四、专属性有关物质为主，其他检测工程〔含量〕根本上均参照有关物质。

有关物质的验证，采用中间体和降解产物〔确认结构后人工合成〕来验证与主成分的别离。

8编辑ppt系统适用性试验的配制方法：

在100％浓度的主成分溶液中参加1%浓度的杂质对照品，以模拟样品中有可能存在的状态。

介绍配制方法——先配制杂质贮备液，再用供试品溶液〔或浓的对照品溶液〕来稀释，简便、易行！9编辑ppt专属性试验验证图谱10编辑ppt存在问题——配制相同浓度，测定样品时，主成分峰骤然加大，将杂质峰覆盖。

强破坏试验的目的：

验证药品在遭遇了极端的气候环境条件下产生的杂质，在所建立的色谱条件下是否能够别离、测定。11编辑ppt●检测波长确实定

涉及到各被检测物质在该波长下的响应因子是否相同，即所谓重量校正因子的问题。〔f=A杂质/A被测成分〕

选取主成分与各杂质具有相同紫外吸收的波长〔f=1.0〕。

选取各杂质紫外吸收大于主成分紫外吸收的波长〔f>1.0〕，这样可更加严格控制杂质的限度。

如选取各杂质紫外吸收小于主成分紫外吸收的波长，应必须参加重量校正因子〔f<1.0〕，否那么将得到错误的判断。12编辑ppt介绍该项检测的由来和历史背景

要看主峰里是否有杂质，如何判断？但需注意DAD检测器的局限性，介绍“土方法〞！

结果：目前从来没有推翻现行色谱条件的。意义在哪里。如何应用，拿到只是“走形式〞？13编辑ppt最小峰面积的设定

●其设定，不是绝对值，而是相对值。

●英国药典中有明确的说明：凡有关物质的检测采用HPLC法测定时，均规定舍弃对照溶液主峰面积几分之几的峰面积。普通样品测定时，通常为1/10~1/20〔即相当于样品测定浓度的0.1%~0.05%〕。如规定杂质限度为1.0%，对照溶液峰面积为10000，那么，最小峰面积可考虑设定为1000~500左右。新药稳定性考核时，可设定到0.01%的最小峰面积。

●原料药销售与购置的合同中，为确保双方达成一致意见，此点应予以重视。14编辑ppt强力破坏试验

●水破坏取原料适量，加水溶解后，在90℃放置24小时。

●氧化破坏取原料适量，用5%过氧化氢溶液溶解后，在90℃放置24小时。

●强碱破坏取原料适量，用1mol/L氢氧化钠溶液溶解后，在90℃放置24小时。

●强酸破坏取原料适量，加1mol/L盐酸溶液溶解后，在90℃放置24小时。

●高温破坏取原料适量，依据各自品种的熔点不同，在高温下破坏至外观性状改变

●强光破坏取原料适量，置紫外灯下照射48小时。15编辑ppt四、检测限●信噪比的三倍——纯属“纸上谈兵〞，实际测定中根本用不上。

●是相对值，不是绝对值。是相对于供试品溶液浓度的多少分之一而言，一般至少要在5000倍以上。16编辑ppt有关物质、含量与自身对照三者浓度的关系17编辑ppt积分参数的设定●积分参数的设定是非常重要的。由斜率(Slope)、峰宽(Width)、最小峰面积(MinArea)组成。●采用自身对照法时，对照溶液与供试品溶液必须在同一斜率、峰宽下进行积分计算。●供试品溶液最小峰面积的设定将直接导致测定结果。设定得太小，会导致很多小峰甚至是基线漂移的小峰均被积分出作为杂质峰，从而导致杂质峰面积增加，易判断为不合格；如设定得过大，又将反映不出杂质情况。18编辑ppt方法学认证中的耐受性试验是指更换试验因素，如不同人员、不同仪器，不同色谱柱型号、厂家，不同试剂等因素。这一点才是真正至关重要的！认证时不可能做到这一点，出现问题时往往要考虑到。19编辑ppt方法学认证中溶液稳定性的全面判定不能单从主成分入手！还要注意所有组分的百分比变化，绝对值变化！20编辑ppt杂质-1（为已知杂质）青蒿琥酯杂质-2杂质-3新杂质时间(h)峰面积百分比峰面积百分比峰面积百分比峰面积百分比均未检出0148110.14%1036960099.26%575110.55%50320.05%0.5360280.35%1014652598.89%557860.54%223310.22%1595200.57%1038238898.58%580980.55%317170.30%1.5689800.66%1034454198.45%595210.57%338980.32%2789480.75%1036038698.33%591720.56%380650.36%3917080.86%1043288898.16%591850.56%4500020.42%RSD0.96％流速、柱温与溶剂的选择●在测定时通常调节流速使主成分保存时间稍长些，且使主成分峰不拖尾即可。●柱温对别离效果的影响虽有一定的影响，但不甚显著，如有柱温箱，通常设定不超过35℃。●溶剂的选择应测定样品溶液在该溶剂中的稳定性来衡量，尽量勿选择挥发性强的溶剂；同时应保证对照溶液的主成分峰面积精密度良好。22编辑ppt质量标准中制订有关物质的原那么●采用杂质对照品法、用于降解产物的准确测定，如氢氯噻嗪、对乙酰氨基酚等。●采用强破坏试验破坏出杂质。如中国药典中的氧氟沙星所有品种，均在HPLC法的色谱条件下拟定了：取供试品溶液，置紫外灯下〔254nm〕照射4小时以上，使产生的紧邻主峰前的杂质峰与主峰的别离度应符合规定。●不采用任何方式。23编辑ppt典型强破坏试验图谱24编辑ppt药品含量测定方法的设计——原料药原料药:对于组份单一的原料药,首选容量法测定含量强调：〔1〕供试品的取用量应满足滴定精度的要求〔消耗滴定液约20ml〕；〔2〕滴定终点的判断要明确，如选用指示剂法，应考虑其变色敏锐，提供滴定曲线，并用电位法校准其终点颜色。〔3〕为排除因参加其它试剂或混入杂质对测定结果的影响，或便于剩余滴定法的计算，可采用“将滴定的结果用空白试验校正〞的方法；〔4〕最后要给出滴定度〔采用四位有效数字〕。25编辑ppt容量法测定含量要注意参加反响的应是药物分子活性局部，而不应是次要的酸根或碱基局部。如盐酸氨溴索，有研究者采用氢氧化钠滴定液测定其含量，事实上这种方法测定的是其中盐酸的含量，由于其成盐工艺中的酸、碱配比不当时，可严重影响成品酸碱度，故测定结果并不能代表其活性成分有机碱的含量。应采用非水滴定法，以无水冰醋酸为溶剂屏蔽掉盐酸的干扰，用高氯酸滴定其有机碱的含量。高氯酸非水滴定法因适应性广〔适用于有机弱碱及其盐类〕在化学原料药的含量测定中较为常用。26编辑ppt如用容量法不适宜时，可考虑选用HPLC法，尤其在有关物质干扰，或多组份物质时，具有特殊优势。一般不选用UV法，尤其不首选“吸收系数法〞定量，不选用末端吸收峰作测定波长；须用UV法时，可采用不受仪器及其它变化影响的“对照品比较法〞定量，测定溶液的吸收度宜在0.3～0.7间。元素测定法如定氮法，在其它方法均不适宜时可采用，但因不能反映化合物含量的变化情况，此法不可用于稳定性考察中。27编辑ppt药品含量测定方法的设计——制剂应考虑辅料等的干扰，首选方法一般为HPLC法，在有关物质、辅料不干扰的情况下，也可选用UV法或原料药项下的容量法。复方制剂首选HPLC法。28编辑ppt药品含量测定方法的设计——验证订入质量标准的含量测定法不同于一般质量考察的方法，须经过严格的方法学验证。容量分析法的验证：①精密度：用原料药精制品〔含量>99.5%〕考察方法精密度，平行试验5个样本的RSD≤0.2%；②准确度：以测定原料精制品的回收率计算，应在99.7%～100.3%之间〔n＝5,RSD≤0.1%〕；③滴定终点确定的依据：包括滴定曲线的绘制，如用指示剂法确定终点，应用电位法校准终点颜色，提供指示剂颜色与电位变化情况的比照结果；29编辑ppt④耐用性：考察测定条件〔供试液稳定性、样品提取次数、时间等〕有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度，如测试条件要求苛刻时那么应在方法中注明。HPLC法的验证：①精密度：RSD≤2%〔n＝5〕；②准确度：用于制剂时，要考察辅料的影响，将一定量药物加到按处方比例配制的辅料中〔为标示量的80%～120%〕制成高、中、低三个剂量，混合均匀后，每个剂量取三份样品，按拟定方法测定回收率，应在98%～102%之间〔n＝9,RSD≤2%〕。30编辑ppt③线性范围：用含量的精制品配制一系列浓度的溶液〔n＝5～7〕，用浓度C对峰面积A或峰高h或被测物的响应值之比进行回归处理，线性方程的相关系数r≥0.9990，截距越小越好，并提供线性关系图；④专属性：辅料、有关物质或降解产物峰对主药峰应无干扰；⑤耐用性：考察测定条件〔供试液稳定性、流动相组成和pH值、不同品牌或批号的同类色谱柱、柱温、流速、样品提取次数、时间等〕有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度，如测试条件要求苛刻时那么应在方法中注明；⑥灵敏度：作为常量分析法，此项可不作主要要求。31编辑pptUV法的验证：①精密度：RSD≤1%〔n＝5〕；②准确度：方法同HPLC