复元胶囊对气虚血瘀证大鼠血液高凝状态的调节作用

复元胶囊对气虚血瘀证大鼠血液高凝状态的调节作用

气虚血瘀证是一组复杂的临床症状，包括多系统疾病。中医理论认为:气为血之帅,气之与血,如影随形,气行则血行,气虚则血瘀。《内经》开创了气血理论,王清任《医林改错》提出了气虚血瘀学说,近年来通过对临床研究、实验动物模型、生物学基础的研究,提出气虚血瘀证存在血液浓、黏、凝、聚倾向,微循环障碍,凝血功能亢进,血管内皮细胞受损和血栓栓塞性等病理特点。本文从分子水平观察血浆纤维蛋白原(Fg)、P-选择素(P-sel)、D-二聚体(D-D)与气虚血瘀证的关系以及具有益气活血、补肝益肾的复元胶囊对凝血与纤溶功能的调节和改善作用,为补肾活血中药防治气虚血瘀证提供理论基础。1材料和方法1.1动物合格号SD大鼠,16月龄,雌雄各半,体重600～800g,重庆医科大学动物实验中心提供,动物合格证号:SCXK(渝)2007-0001。1.2当前重庆社会以当前重庆药物为复元胶囊,由黄芪、淫羊藿、川芎、当归、枸杞等组成,具有补肾益气活血的功效,由重庆希尔安药厂生产。芪参胶囊,由黄芪、丹参、人参、三七、水蛭等组成,具有益气活血,化瘀止痛之功效,由河南省新谊药业股份有限公司生产,批号:20103354。1.3试剂和机器ELISA试剂盒由上海源叶生物制剂公司提供。生产批号:20101227。ACL200型自动凝血分析仪。1.4方法1.4.1大鼠的造模及分组将90只大鼠随机分出20只为空白对照组。其余70只为模型组。空白对照组正常饮食,模型组按照气虚血瘀模型建立大鼠模型。方法是:①游泳:将大鼠置于凉水(14～16℃)中游泳,疲劳时捞出水面(疲劳标准以大鼠第一次自然下沉为度),每日1次。②饥饿和高脂饮食:每只鼠按照大鼠体重40g/kg标准提供高脂饲料(每5kg普通饲料加猪油lkg),每天早上8:00点给予全天量的2/3,晚上8:00给予全天量的1/3。③寒湿:大鼠游泳完后,放置在通风的环境中自然晾干,不给予保温措施和擦拭水迹。连续4w,即出现精神萎顿、嗜睡、毛发枯黄脱落、轻度稀便、尾尖至根部出现轻度瘀血点等症状。1个月后随机抽取10只空白对照组和10只模型组大鼠下腔静脉血测定血液流变学,见表1。将剩余的60只模型组大鼠随机分为复元胶囊低、中、高剂量组、芪参胶囊组及模型组,每组10只。根据Meeh-Rubner氏公式计算给药剂量,芪参胶囊组给予515.7mg·kg-1.d-1,复元胶囊高、中、低剂量按3∶1∶1/3,分别给予0.15、0.45和1.35g·kg-1.d-1。模型组和空白组均给予生理盐水10ml/d灌胃,1次d,连续4w。1.4.2elisa双抗体夹心法给药1个月后,取大鼠下腔静脉血,枸橼酸钠抗凝,离心后取血浆置于-20℃的冰箱里保存。有ELISA双抗体夹心法检测血浆P-sel和D-D的含量,严格按照试剂盒说明书操作。用凝血酶法(ACL200型自动凝血分析仪)测定血浆Fg的含量。指标测定在重庆医科大学眼科实验室完成。1.5统计处理采用SPSS17.0统计软件,计量资料用x¯±sx¯±s表示,采用LSD-t检验进行两两比较。2结果2.1p-sel和d-d含量表1可见,复元胶囊低、中、高剂量组,芪参胶囊组治疗1个月后与模型组相比较,血浆Fg,P-sel,D-D含量均偏低(P<0.05)。其中复元胶囊中、高剂量组与复元胶囊低剂量组比较,血浆Fg,P-sel,D-D含量差异显著(P<0.05),但是复元胶囊中剂量和高剂量组差异无统计学意义(P>0.05),各组大鼠大鼠Fg、P-sel及D-D的变化。2.2两组大鼠的血液流变科学模型组与空白对照组比较,血液流变学各项指标均偏高(P<0.05),模型组大鼠血液流变学变化见表2。3复元胶囊对血小板fg、p-sel、d-d的影响高凝状态是指多种病理因素引起的机体血管内皮细胞损伤、血小板、凝血、纤溶以及体内抗凝系统等功能失调,血液的凝固性增高,有利于血栓形成的病理状态。已有研究表明,气虚血瘀证的病理生理变化与促凝因子增加,抗凝因子及纤溶活性物质减少有关。Fg是血中含量丰富的一种糖蛋白,在凝血、止血过程中有重要的作用,Fg主要是通过以下途径参与凝血调节:①在凝血酶的作用下,肽链离解,分子结构改变导致聚合反应,形成网状结构的纤维蛋白多聚体。②与血小板膜糖蛋白的Ⅱb/Ⅲa结合,介导血小板聚集反应而影响血流黏滞度。血小板活化与血管内皮细胞的损伤是血栓形成的始发环节,P-sel则是一种富含半胱氨酸、高度糖化的整合蛋白质,它只在活化的血小板表面上表达,并可释放到血浆中,这是血浆P-sel的主要来源。现在认为P-sel可作为体内血小板活化程度和血栓形成的标志物。D-D是交联纤维蛋白纤溶酶水解后降解的终末产物中的一种特殊碎片,其含量的增高可作为体内血栓形成的分子标志之一,提示体内存在继发性纤溶活性的增高。已有研究表明,气虚血瘀患者血浆D-D含量高于正常人。本研究揭示了气虚血瘀证大鼠存在高凝状态和继发性纤溶亢进,复元胶囊低、中、高剂量组,芪参胶囊组都能降低血浆Fg,P-sel,D-D含量,但是复元胶囊中、高剂量组的效果更为明显。复元胶囊高剂量组与中剂量组差别无统计学意义,故治疗量为中剂量即可,以免引起胃肠道不适及毒副作用。中医认为,“诸脏之阳,全赖肾阳以熙之,诸脏之阴,全赖肾阴以濡之”,故肾为人之根本。肾精不足可导致肾气亏虚,无力温煦,脏腑四肢百骸失其濡养,功能失调,并影响气血