弥漫性脑损伤大鼠脑组织谷氨酸及环核甘酸代谢改变的实验研究

弥漫性脑损伤大鼠脑组织谷氨酸及环核甘酸代谢改变的实验研究

0脑延迟脑损伤第二脑损伤（bsi）的概念由剪刀首次提出。在对现有脑损伤的基础上，如合并低血压和高血压等二次损伤因素对脑组织的第二次损伤可加重脑损伤。根据以往的研究，合并sdi的大脑暴露信息，随着txa的合并，核电站脑损伤（dbi）的水平增加，局部脑血流量降低，核电站脑损伤加剧。另一方面，明了开始机制。同时，dbi和sdi的结合使兴奋氨基酸谷氨酸（glu）和通过谷氨酸受体激活的环氨酸的变化和意义尚不清楚。这是本研究的重点。1材料和方法1.1股动脉插管联合膜过滤法正常成龄雄性SD大鼠66只,体质量(250±25)g,随机分为正常对照、DBI及SBI组,后两组又按时间不同分为10min,1,6,24和72h组,每组6只.脑损伤模型制作:新鲜配制10g·L-1戊巴比妥钠(30mg·kg-1)ip麻醉大鼠,气管插管,小动物呼吸机辅助呼吸,右侧股动脉插管监测血压、输液、用药,血压维持在5.33～6.67kPa,肛管内插入体温计探头,通过反馈式电子温度测定仪监测体温,并维持(37.5±0.5)℃.立体定向头架固定大鼠头部,正中切开头顶皮肤,在冠状缝与人字缝之间,用高分子聚酯于顶骨上固定一圆形金属小片(直径10mm,厚度2.5mm).将大鼠移至一已知弹性系数的软质厚海绵上,900g铁质圆棒借一相应口径的有机玻璃管导向,由1m高处自由垂直坠落于金属小片上,致伤头部,造成DBI.二次脑损伤组在DBI稳定15min后,经股动脉插管放血3～4mL造成低血压,同时双侧颈总动脉结扎,维持30min,然后将所放血液回输并维持血压在正常水平.1.2方法1.2.1匀浆器中匀浆各实验组大鼠到预定时间断头处死,迅速取脑组织100mg,加入盛有预冷的50g·L-1三氯醋酸3mL的匀浆器中,冰浴中匀浆;匀浆液2000g,4℃离心10min,取上清-20℃保存.待全部试样收集完毕,在121MB型氨基酸分析仪上进行氨基酸定量分析.1.2.2脑酶原激活剂pa法检测脑强化酸-乙醇溶液中内镜萃取-温度3g.5.2.4和10.5.4.7.4.7.4.7.4.7.4.5%乙醇-5.4.5.4和10.7.4.7.4.4.4.4.4.4.4.5.4.4.4.5.4.5%.4.5%.4.5%.4.5%.4.7.7.7.7.4.7.4.7.4.7.4.7.4.5.4.5.4.7.4.7.4.7.4.7.4.7.7.4.7.4.7.4.7.4和7.4.7.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4各组大鼠到预定时间后,活杀取脑,NS冲洗,滤纸吸干,称取脑组织约50mg,放于2mL预冷的50mmol·L-1醋酸缓冲液(pH4.75)中,冰浴中制成匀浆,转移至10mL离心管内,用2mL无水乙醇洗匀浆器后将乙醇合并倒入离心管内,混匀静置5min,3500r·min-1低温离心15min,取上清放于小瓶内,再以750mL·L-1乙醇1mL洗匀浆器2次,用该2mL750mL·L-1乙醇洗离心后沉淀混匀,3500r·min-1低温离心15min,上清60℃干燥.放免测定前以50mmol·L-1醋酸缓冲液1mL溶解,测定脑组织cAMP,cGMP含量,放免测定试剂盒由上海中医药学院提供,具体操作按试剂盒说明书进行.统计学处理:各组实验数据用“均数±标准差(x¯±s)(x¯±s)”表示,在微机上应用SPSS统计软件进行方差分析和配对t检验.2结果2.1下降后至2032h间DBI后10min明显增加(P<0.01),随后下降,6h逐渐下降并于24～72h间达最低点,在72h持续低水平并出现回升趋势;SBI后变化幅值加大并且下降延迟(Tab1).2.2内镜实际cop的测量,cmp、chmp比的变化,cmp比的下降DBI后24hcAMP有下降(P<0.05),cGMP则升高(P<0.01),cAMP/cGMP比值下降(P<0.05);SBI后变化幅度明显增加(Tab1).3glu及其抑制剂脑创伤后除机械因素对脑组织的直接损伤外,继发性神经生化改变是加重脑细胞损害的因素之一.其中脑细胞外液兴奋性氨基酸浓度升高引起脑组织兴奋毒性,以及由于脑组织微循环障碍而造成的代谢应是其中重要方面,二者是相互联系、相互影响,共同参与脑损伤后的病理生理过程.一方面,兴奋性氨基酸在通过其受体引起神经细胞的过度兴奋而使神经细胞受到兴奋性损害的同时,也导致神经细胞代谢的改变.其中Glu是哺乳动物中枢神经系统含量最高,作用最广的氨基酸,它主要通过神经细胞膜上GluR而起作用.脑组织中的GluR有两大类,即离子型Glu受体(iGluR)和代谢型Glu受体(mGluR).iGluR属于配体门控的阳离子通道,与配体结合后可引起神经细胞膜对Na+,K+和Ca2+通透性的改变,进而引起细胞内Na+-水潴留、膜电位和膜兴奋性改变,Ca2+作为细胞内广泛的第二信使,又参与细胞内代谢及多种生理病理过程的激活和调节;mGluR是神经细胞膜上与G蛋白偶联的七次跨膜蛋白受体,与配体结合后可通过G蛋白介导的细胞内信号转导机制导致细胞内第二信使、磷酸化酶活性改变及调节细胞内代谢和生理病理过程.另一方面,脑组织微循环障碍而造成的代谢应急所造成的能量耗竭、Na+,K+-ATPase活性的降低,神经细胞内Na+内流可以导致Glu释放,从而加重脑细胞兴奋毒性损伤.我们发现无论DBI或DBI合并SBI,伤后10minGlu明显增加(P<0.01).原因:①突触小泡内Glu水平高于细胞外液1000倍,损伤引起细胞膜和突触膜破裂,Glu大量释放;②正常血浆内Glu含量明显高于脑组织,脑损伤后血脑屏障破坏,血浆内Glu进入脑组织;③神经元与胶质细胞存在对Glu的主动转运和摄取,并且是其灭活的主要机制,外伤时脑组织pH下降、能量代谢障碍、Glu转运或摄取能力下降.随后逐渐下降并于24～72h间达最低点,在72h持续低水平并出现回升趋势,可能是由于脑细胞内持续的能量损耗,使Glu合成相关酶活性受抑制,Glu灭活酶代偿性活性增强所致;另外,脑损伤后组织合成代谢的加强,对作为蛋白质合成原料的Glu的消耗,以及脑损伤后脑组织含