DB34-T 4625-2023 石榴脱毒苗木繁育技术规程

65.020.20CCS

B

6134 DB34/T

4625—2023石榴脱毒苗木繁育技术规程Technical

for

ofpomegranate安徽省市场监督管理局 发

布DB34/T

4625—2023本文件按照GB/T

《标准化工作导则 第1草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽中以农业科技有限公司提出。本文件由安徽省林业局归口。安徽省红玛瑙石榴科技有限公司、安徽省质量和标准化研究院。华、王宁、吕群龙、杨小元、韩啸。DB34/T

4625—20231范围求。本文件适用于果用、观赏石榴品种的脱毒苗木繁育。2 规范性引用文件文件。GB

6000 主要造林树种苗木质量分级GB/T

8321（所有部分） 农药合理使用准则LY/T

1893 石榴苗木培育技术规程DB34/T

3410 石榴生产技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1外植体 explants植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。3.2石榴组培 tissue

of

pomegranates利用石榴茎尖等组织作为外植体，在无菌条件下通过人工培育出完整植株的过程。3.3茎尖脱毒 virus-eliminated

of

plant

shoot

tip采用茎尖接种的离体培养方式，达到脱除植物病毒的目的。3.4褐化 browning亡的现象。4 环境要求养室需要严格无菌，所处环境要求具备可以自动杀菌、控温、控光等条件。用于药品和培养基配置、器具洗涤及灭菌等，面积≥15

m

，温度为

20℃～℃。用于室外与接种室或培养室的隔离缓冲区间，应具备换衣区、风淋区，面积≥2

m

。用于药品和培养基配置、器具洗涤及灭菌等，面积≥15

m

，温度为

20℃～℃。用于室外与接种室或培养室的隔离缓冲区间，应具备换衣区、风淋区，面积≥2

m

。单间接种室面积≥10

m

，高度≤3

m；接种室要求严格无菌，应具备超净工作台，室内应吊装紫外线灭菌灯，距离地面

1

m

处，其辐射强度应＞70

W·cm

；2

d～3

d

1

次紫外消杀灭菌，1

月～2用于组培苗的培养，面积≤50

m

，方便隔离和消杀；培养室要求严格无菌，应具备培养架，室内应吊装紫外线灭菌灯，距离地面

1

m

处，其辐射强度应＞70

W·cm

；1

月～2

月进行

1

次甲醛熏蒸g·L

活性炭；

a) 茎尖接种培养基：

mg·L

～

·L 6-BA+6.0

g·L

+25.0

g·L

蔗糖+0.64.1 准备室24.2 缓冲室24.3 接种室2-2月进行

1

次甲醛熏蒸消杀灭菌处理；室内温度

2126℃，相对湿度

～。4.4 培养室2-2

70%～

h，22℃～

2000

Lux～5000Lux；暗培养

8

h，26℃。4.5 炼苗室

22℃～

50%～

1000

～5000

。4.6 移栽温室应具有遮光设施，遮阳率

25%～、温度

15℃～25℃、相对湿度

50%～70%、自然光照，光照过于强烈时采取遮光措施。5组培技术5.1 技术路线组培技术路线：外植体选取→茎尖接种→扩繁培养→生根培养→病毒检测→炼苗→移栽。5.2 组培流程5.2.1 外植体选取培

5

d～7

d。5.2.2 培养基配置培养基采用WPM6-BA、长过程培养基配方如下：-1 -1 -1 -1-1b)

扩繁培养基：

b)

扩繁培养基：

·L

～

0.6

mg·L

6-BA+6.0

g·L

+25.0

g·L

蔗糖+0.2

g·L-1 -1 -1 -1 -1活性炭；

g·L

+25.0

g·L

+25.0

g·L

蔗糖。

-1

-1

-15.2.3 接种剪取茎尖顶端

cm～

cm

作为接种外植体，采用

0.10%

HgCl2和无菌水对外植体灭菌，在接

0.10

mm～0.15

mm

d～40

d。5.2.4 扩繁用组培苗作为外植体，切去增生愈伤后，接种于扩繁培养基中，培养

d～35

d。5.2.5 生根剪取扩繁苗

1.0

cm～1.5

0.25

cm～0.35

，培养

30

d～40

d。5.2.6 炼苗选取根长

～

cm

1000

～2000

条件下炼苗

1

d～2

d

后，在光照

3000

～5000

条件下炼苗

2

d～3

d。5.2.7 移栽

32

=3：1：1

22℃～

30%～50%件。5.2.8田间管理按照

GB/T

8321（所有部分）和

LY/T

1893

的规定执行。5.2.9 苗木出圃按照

3410

的规定执行。6 病毒检测6.1 石榴苗木病毒主要检测对象如下：——石榴花叶病毒（PoMv,

virus——李坏死环斑病毒石榴花叶株系（PNRSV,

necrotic

ringspot

virus,

pomegranatemosaic

strain）。6.2 样本抽样6.2.1 移栽苗木抽样PoMv3′GCATAGTGCTTCCGTTCAC5′PNRSV3′5′CTTGATAACATATTTTCAGTGTCCATACAGDB34/T

4625—2023采用随机取样法，抽取移栽苗木进行病毒检测。以1千株为基数（＜1千株的，以1千株计算），1

1

1千株增检

10

1

1

千株增检

2

为移栽成活后

3

6

月内。6.2.2 出圃苗木抽样

1

1

1

10

万株内（含

10

万株），每增加

1

万株增检

5

株，≥10

万株，每增加

1

万株增检

2

6.3 检测方法推荐使用反转录——聚合酶链式反应检测法（），选用试剂盒进行RNA提取及检测。推荐引物见表1。表1推荐表1推荐

法检测病毒对象及引物序列后，放置于

-80℃

冰箱中冻存备份。6.5 病毒检测要求6.5.1 移栽苗移栽苗木检测，其带有检测对象的病毒株允许率≤0.1%。6.5.2 出圃苗出圃苗木检测，其带有检测对象的病毒株允许率＜0.3%。7 质量要求7.1 抽样要求按照

6000

7.2 检验规则按照

6000

7.3 苗木质量要求7.3.1 合格苗木以综合控制条件、根幅、地径和苗高