广州市登革热监测与媒介媒介抗测点分析

广州市登革热监测与媒介媒介抗测点分析

由于目前尚未有效的生根热疫苗，主要依靠卫生消毒基金迅速减少寄生虫密度，控制生根热的流行。由于长期使用杀虫剂,有可能产生抗药性。因此,进行抗药性监测,可为选择合适敏感的杀虫剂、控制登革热媒介提供依据。本研究旨在了解广州市城乡白纹伊蚊密度的季节性变化,并对登革热病毒携带情况及抗药性进行检测。1材料和方法1.1材料表面1.1.1蚊子诱捕器1.1.2蚊卵的采集和繁殖敏感品系白纹伊蚊,由本实验室提供;野外种群白纹伊蚊,分别在广州市内(白云区)、农村(从化市某村)采集其蚊卵,带回实验室繁殖2代;1代进行蚊体内登革热病毒检测,2代挑选3龄末4龄初幼虫进行抗药性测定。1.1.3特效药1.2监测方法1.2.1布放位置和回收在伊蚊诱捕器中放入ϕ70mm的白色滤纸,然后加入30ml去氯水。完成处理后布放,每个布放点间距离为10m。布放位置根据白纹伊蚊的生态特点,选择墙角、树下、草丛中阴暗处。次日观察计数,每隔24h观察1次,并对所捕获成蚊分类计数。每次实验连续观察4d,至第5天回收,将回收的成蚊分类装入冻存管并置-80℃保存,择日进行实验室检测。回收的蚊卵在实验室孵育,进行实验室检测及抗药性检测。1.2.2农村2011年夏季8月、春季8月、冬季12月、2012年春季3月监测现场为广州市白云区某大学内、从化市某村;监测时间:城市2011年夏季8月、秋季10月、冬季12月、2012年春季3月;农村2011年夏季8月、秋季10月、冬季12月、2012年春季4月;布放诱捕器数量:城市分别为82、100、90、100个,农村分别为200、250、200、200个。1.3rna提取、反转录将捕获和孵育的白纹伊蚊冷冻麻醉,收集于冷冻管,将同范围、同时间捕获蚊虫集中为1组,每组20~30只,用RT-PCR法检测白纹伊蚊体内登革热病毒携带情况;登革热2型病毒细胞悬液作阳性对照;实验室品系蚊虫作阴性对照。RNA提取、反转录采用罗氏试剂盒,引物:上游5′-TCAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCG-3′,下游5′-TTGCACCAACAGTCAATGTCTTCAGGTTC-3′;反应条件:50℃30min;94℃5min;94℃30s;55℃30s;72℃30s;40个循环;72℃10min。1.4敏感品系采用WHO生物测试法,在温度(26±1)℃、相对湿度(65±10)%条件下,分别对野外种群和实验室敏感品系白纹伊蚊进行测定。每组6个浓度梯度,199ml去氯水中,加1ml不同浓度梯度的药液,并投入30条3龄末4龄初幼虫,实验重复3次,24h观察结果,以幼虫不能逃避机械刺激为死亡。测定结果按机值法进行统计,计算半数致死浓度(LC50)。抗药性指数计算公式:1.5蚊子检测指标1.5.1卵阳性诱捕器数量是指每100个有效的诱捕器(即成功回收的容器)中成蚊或/和卵阳性的诱捕器数量,该项指标从率的角度综合反映了一定地区内蚊媒的成蚊和蚊卵密度。计算公式:式中,N表示回收的诱捕器中伊蚊成蚊或/和伊蚊诱卵阳性的诱捕器数量,n表示回收的诱捕器数量。1.5.2蚊密度和时间是指每100个有效的诱捕器中伊蚊成虫阳性的诱捕器数量,该项指标从率的角度单独反映了一定地区内成蚊密度情况。计算公式:式中,Nm表示回收的诱捕器中捕获伊蚊成蚊阳性的诱捕器数量,n表示回收的诱捕器数量。1.5.3蚊卵密度测定的率是指每100个有效的诱捕器中蚊卵阳性的诱捕器数量,该项指标从率的角度单独反映了一定地区内蚊卵密度情况。计算公式:式中,No表示回收的诱捕器中产卵阳性的诱捕器数量,n表示回收的诱捕器数量。1.6统计处理采用SPSS16.0软件对城市、农村不同季节的MOI、MI、OI分别进行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1城市、农村白纹伊蚊密度季节变化4个季节城市共布放伊蚊诱捕器372个,回收349个,回收率为93.82%;农村共布放伊蚊诱捕器850个,回收834个,回收率为98.12%。城市、农村诱蚊阳性容器分别为69和159个,诱卵阳性容器数分别为66和113个,诱蚊诱卵阳性容器分别为79和165个。城市、农村白纹伊蚊密度季节变化见表1。经统计分析,城市4个季节之间的阳性指数比较差异均有统计学意义(MOI:χ2=31.45,P=0.000;MI:χ2=26.66,P=0.000;OI:χ2=35.69,P=0.000),农村4个季节之间的阳性指数比较差异亦均有统计学意义(MOI:χ2=85.44,P=0.000;MI:χ2=83.18,P=0.000;OI:χ2=85.89,P=0.000)。由表1可见,城市、农村白纹伊蚊密度的季节消长趋势一致,均是春季白纹伊蚊密度开始升高,夏季达到高峰,秋季逐渐下降,冬季最低,但城市、农村冬季白纹伊蚊密度均>0。2.2白纹伊蚊鉴定结果对城市捕获的白纹伊蚊成虫,以及由捕获的蚊卵经孵化而得的第1代白纹伊蚊成虫共291只,经检测结果均为阴性;农村捕获的白纹伊蚊共567只,经检测结果也均为阴性。登革热2型病毒细胞悬液作阳性对照,结果为阳性;实验室品系白纹伊蚊作阴性对照,结果为阴性。2.3对敌中小型蚊的抗性分析城市白纹伊蚊对敌敌畏的抗性系数为1.08~2.16,春秋季抗性系数>2,呈低抗性,夏季抗性系数<2,呈敏感性;农村白纹伊蚊对敌敌畏的抗性系数为1.16~1.87(表2),春、夏、秋各季节的抗性系数均<2,呈敏感性,但春、秋季节高于夏季。由于冬季的蚊虫密度低,未进行冬季抗药性检测。3基于伊蚊的传染病检测登革热广泛流行于热带和亚热带地区,是分布最广,发病最多,危害较大的一种虫媒传染病,主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播。随着国际交流的日益频繁,我国也常年发生登革热输入性病例并时有局部暴发疫情,已成为重点监测与控制的传染病之一。广州市近年来多次暴发登革热,而白纹伊蚊是该地区的主要传播媒介。因此,对白纹伊蚊的密度、带病毒情况以及抗药性进行监测具有重要意义。3.1季节间蚊媒密度气候因素,尤其是气温,对白纹伊纹密度的消长有着重要作用。而登革热的流行与蚊媒的密度有关,二者高峰都在高温多雨的夏秋季。在一定的温度范围内,白纹伊蚊种群的繁殖随着温度的升高而加快。根据研究结果分析,广州市城市、农村4个季节间的阳性指数比较均有统计学意义,城市、农村的季节消长情况一致,白纹伊蚊密度由高到低依次为夏季、秋季、春季、冬季,与以往研究结果一致。冬季除农村OI为0外,其他各阳性指数均>0,说明白纹伊蚊可以成虫和卵的形式越冬。郑能雄等研究认为伊蚊主要以卵越冬,也存在以幼虫和残存成蚊越冬的形式,呈半越冬形式。监测数据显示,虽然蚊媒密度总体趋势在下降,但绝大部分地区在监测月份内蚊媒密度依然高出警戒范围,6-10月蚊媒活动猖獗,成为登革热暴发潜在危险因素。而白纹伊蚊的密度高峰一般较登革热的流行高峰提前出现,因此,夏秋季做好白纹伊蚊的监测和防控工作对于控制登革热的暴发流行非常重要。3.2pcr检测结果应用RT-PCR法检测广州市城市、农村白纹伊蚊登革热病毒携带情况,本研究共检测城市白纹伊蚊14份291只,农村20份567只,结果均为阴性。其可能原因有:(1)白纹伊蚊的捕获地点均不是登革热疫点;(2)广州地区的登革热为非连续性暴发,白纹伊蚊自然种群登革热病毒的携带率较低;(3)检测的蚊虫标本大部分是经卵孵化的成蚊,可能存在登革热病毒在蚊体内传代的递减效应,造成检出率低;(4)本研究采用普通PCR检测方法,灵敏性相对偏低。有专家认为,广东省可能从登革热非地方性流行区(无病毒)变为低地方流行区(同一种血清型别流行)。因此,检测白纹伊蚊自然种群登革热病毒的携带情况,可以为登革热的暴发流行提供快速、有效的预测预警信息。3.3抗药性及抗药特性我国自20世纪四五十年代广泛使用化学杀虫剂防治蚊虫,蚊虫通过生理生化多种机制产生了抗药性。我国使用有机磷类杀虫剂有40多年的历史,其中敌敌畏和敌百虫防治媒介蚊虫最为普遍。应用抗药性系数评价昆虫的抗性水平,一般认为抗药性系数<2,为敏感;在2~10为低抗性;11~20为中等抗性;>20为高度抗性。本研究发现,春、夏、秋3个季节,广州市城市、农村白纹伊蚊抗敌敌畏情况的变化趋势一致,均是夏季最低,春、秋季较高,但是城市春、秋季的抗药性指数>2,呈低抗性,其余均<2,呈敏感性,但本底值均高于敏感品系。夏季低春秋季较高的原因可能是经越冬复苏繁殖的白纹伊蚊生存能力强,抗药性较高;夏季蚊虫繁殖旺盛,密度达到高峰,抗药性减弱;经过夏季的灭蚊处理,杀虫剂的选择压力,造成秋季抗药性又升高。由于冬季蚊虫密度低,本研究未进行冬季抗药性检测。目前,国内未见有不同季节蚊虫抗药性情况的报道。及时对杀虫剂抗性及不同季节的抗性变化进行检测,对科学合理选择杀虫剂和施用时间防控白纹伊蚊具有重要意义。登革热病毒可经埃及伊蚊(Aedesaegypti)和白纹伊蚊(Aedesalbopictus)传播,导致登革热(DF)、登革出血热(DHF)、登革休克综合征(DSS)。