替西沙林钠克拉维酸钾稳定性和有效性研究

替西沙林钠克拉维酸钾稳定性和有效性研究

青霉素是一种半合成青霉素，其抗菌谱与羧醇青霉相似。然而，对绿脓杆菌的抗菌活性是羧醇青霉的2倍，对g-菌的相对活性较低，对严重的g-菌感染特别有效。其常用制剂为替卡西林钠/克拉维酸钾混合无菌粉末。克拉维酸钾作用于β-内酰胺酶,两者联用扩大了抗菌谱,增强了抗菌活性。临床上将替卡西林钠/克拉维酸钾用于静脉滴注,因此,特主要考察其在水溶液中的稳定性。1实验部分1.1流动相、色谱相LC-AT液相色谱仪(日本岛津);C18柱(迪玛公司,200mm×4.6mm,5μm)。流动相为pH4.2磷酸缓冲液-乙腈(92:8);流速1ml·min-1;柱温40℃;检测波长220nm;进样量20μl。替卡西林钠、克拉维酸钾原料药(自制);乙腈为色谱纯;水为超纯水;其余试剂为分析纯。1.2方法和结果1.2.1高、中、低浓度的加标回收率精密称取100mg替卡西林钠、6.67mg克拉维酸钾于100ml量瓶中,用纯水定容,摇匀,备用。方法学研究表明,替卡西林钠在1442～632μg·ml-1的线性良好(r=0.9994),克拉维酸钾96.15～42.13μg·ml-1的线性良好(r=0.9996)。替卡西林钠高、中、低浓度回收率分别为99.17%(RSD=0.32%)、99.97%(RSD=0.46%)、99.31%(RSD=0.61%)。低、中、高浓度的日内RSD分别为2.39%、1.28%、2.2%。高、中、低浓度的日间RSD分别为1.56%、0.75%、2.34%。克拉维酸钾高、中、低浓度的回收率分别为98.15%(RSD=0.33%)、99.37%(RSD=0.43%)、98.98%(RSD=0.64%)。低、中、高浓度的日内RSD分别为1.59%、1.23%、1.21%。高、中、低浓度的日间RSD分别为1.06%、0.53%、2.56%。1.2.2初始浓度的确定取供试品溶液适量封装于2ml安瓿中,置40℃、60℃、70℃、80℃恒温水浴中,于不同时间点取样,放入冰水浴中终止反应。即时取样作为初始浓度。测定结果见表1。1.2.3替西林钠流动相的制备以0.01mol·L-1pH7磷酸氢二铵缓冲液为流动相A;0.01mol·L-1pH7磷酸氢二铵缓冲液-甲醇(1:1)为流动相B;流速1.0ml·min-1,梯度洗脱;检测波长220nm。待测溶液加0.01mol·L-1pH7磷酸氢二铵缓冲液制成含替卡西林钠0.02mg·ml-1的对照溶液,取20μl进样,替卡西林钠两异构体峰高为记录仪满量程的25%。各取20μl供试品溶液与对照液,进样,梯度洗脱,0～30min,流动相B的比例从0增加到70%,维持10min;40min时,流动相A的比例增加到100%,维持5min。将供试品溶液与对照溶液中替卡西林钠的两异构体主峰面积和进行比较,计算其百分率,考察研究有关物质的结果见表2。1.2.4浊度标准液与浊度标准液《中国狱》2.取样品,加水制成含替卡西林钠0.15g·ml-1的溶液,与浊度标准液(《中国药典》2005年版)比较。溶液略显色,与标准比色液(《中国药典》2005年版)比较,观察溶液在热降解过程中澄明度和颜色的变化(表3)。1.2.5降解动力学方程将表1在4个温度条件下得到的数据用0～2级化学反应动力学方程式进行拟合(表4),根据r2来判断降解动力学过程。替卡西林钠、克拉维酸钾的降解均遵循一级动力学过程。1.2.6降解速度及速率替卡西林钠、克拉维酸钾按一级动力学拟合,得出4个不同温度下的降解速度常数k;再根据Arrhenius公式以lnK对1/T作图,推算其在25℃条件下的降解速度常数。lnK替卡西林钠=6.124-2.629×103(1/T)(r=0.9997);lnK克拉维酸钾=7.819-3.055×103(1/T)(r=0.9967)。因此,可推导出替卡西林钠和克拉维酸钾溶液25℃的K值分别为1.996×103、3.683×103h-1,分解5%的时间分别为25.73、13.94h。1.2.7lnvai线性回归分析根据实验,不同温度下分解初始的速度VOi=(CO-Ci)/ti(i=1,2,3,…,n)(表5)。根据Arrhenius定律的对数公式:lnK=-E/2.303RT+lnA,用lnVOi对1/T线性回归,回归方程为:lnVOi替卡西林钠=-2.333×103(1/T)+7.131(r=0.9949);lnVOi克拉维酸钾=-2.774(1/T)+8.863(r=0.9973)。由此可知,替卡西林钠、克拉维酸钾在25℃分解5%的时间分别为24.89、14.00h。2注射用溶剂的稳定性文中实验采用经典恒温法与初匀速法,测定了新近配制的替卡西林钠/克拉维酸钾溶液在不同温度下的分解程度和稳定性。结果表明,该制剂在25℃的有效期限为13.94～14.00h,两种方法的结果无显著性差异,所以注射用溶液应随