兽医临床病理学(、第三节)资料

第三节临床化学检验一、临床化学自动分析仪世界上第一台用于临床生化检验的自动分仪，是美国泰克尼康公司(TECHNICON)，于1957年生产的，仪器名为AutoAnalyzer。是一台单通道、達续、流动式自动分析校。最初只用于Glu.BUN测定。报告结果是光密度值。1964年，泰克民康公司又生产出连续多道自_$析仪SMA(SequentialmultipleAutoanalyzer)，该仪器由电子计算机控制，每小时测150个样本，每个样本同时测定20个项目，使连续流动分析达到了一个新的水平。65年以后，各种自动分析仪器应运而生。I.目前临床常用的自动分析仪器有：（1）生化分析仪：有全自动、半自动之分国产：上海、北京等，4万元以上；进口：美国、日本、法国、意大利、瑞士等，10-15万元;（2）血气酸碱分析仪；（3）血细胞计数仪；（4）5020型血红蛋白仪：（5）全自动电位滴定仪：DL5815万元/台（6）全自动血液细胞分析仪：BC-2000,15万元/台评价自动分析仪器的原则:(1)方法先进(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9)重复性好；要有准确重复的分析系统;能自动定时；结果报告醒目、直观；适应范围广，机多用灵敏性好；质量控制1.质量控制的目的保证检测结果准确可靠，同时起到：(1)了解试验结果精密度的动态情况；(2)观察试验结果漂移及增降趋势；从而采取措施预防严重误差的出现。(3)与国家规定的标准物进行比较，以了解和校正其准确度；(4)为不同测定方法的比较及选择提供参考；(5)监测仪器的工作状态；(6)了解操作者的操作水平；____(7)作实验室间的比较，以利相互交流和提高。2.与质量控制有关的概念【误差】指的是实验结果与真实数值之间的差异。①系统误差（恒定误差）分析过程中一些经常性出现的原因所成。仪器使用不当分析方法不完善试剂不纯环境改变操作失误您随机误差（偶然误差）（事先无法预料，出现误差的大小没有规律，完全符合概率论定律。这种误差通过严格操作规程，认真细致的工作是可以减少。当测定次数增多时，此时误差可相应抵消。③过失误差由工作不慎或操作不当而引$。如配错试剂，搞错样本，操作不i确，读数、id录或itM*误等。④绝对误差即测定值与真值之差。如:称量为1.655g,实重1.654g,绝对误差为0.001g。⑤相对误差：___绝对误差在真实数值中所占的百分率如上例：相对误差=0.001/L654X100%=0.06%】测定值与真值之间的符合程度。误差愈小，准确度越大。【精密度】每次测定值与算术平均值之间的符合程度。通常把测定值与算术平均值之间的差异称之为偏差。偏差愈小，精确度愈高。•W1~减少误差的措施①纠正系统误差a.校准仪器和量具：b.作阴性、阳性对照；c.用多种方法相互比较:d.用参照标准样本检验。偶然误差a.精心操作，严格执行操作规程；b.固定使用已校正的仪器；c.重复测定取均值等。③消除过失误差a.作好原始记录；b.建立核对检查制度；c.制订统一的操作规程，人人遵守。三、临床化学检验（一）.常用的检验项目①蛋白质；②葡萄糖；③脂类；④无机离子⑤有机物：BUN,尿酸，肌肝、肌酸；⑥微量元素：Cu、Fe、Mn、Zn、Se、Co、Mo；⑦血气分析与酸碱平衡等。项检验【蛋白质I1.研究进展迅速①蛋白质的合成、降解、转换更新和代谢调节②蛋內质生理功能的进一步研究。③蛋白质的遗传变异，通过它了解遗传特征。④以新技术对血浆蛋白质进行微量和特异检测分析。⑤在进化与个体发育的研究中，发现不少正常胎儿期蛋白可以在恶性肿瘤患者重新出现。⑥蛋白质实际用于组织与细胞培养。⑦在肿瘤的发病学研究中广泛涉及血浆蛋白质。.蛋白质的功能可概括为：_营养作用维持血浆胶体渗透压维持血浆正常pH值运输作用免疫与防御功能催化作用代谢调控凝血、抗凝血及纤溶作用等。A'"I蛋5质的分类盐析法：白蛋白和球蛋白电泳法：白蛋白、＜11、a2、B、Y球蛋白Alb,①凯氏定氮法（参考标准方法）消化蒸馏吸收滴定用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵;用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发（耗时）用酸性溶液（硼酸）吸收气态氨（使［H+］丄）用已标定的无机酸滴定，计算总氮量定蛋白（总氮量-非蛋白氮）X6.25=蛋白含量I②

双缩脲比色法（血浆总蛋白测定推荐方法）原理蛋白质中的肽键（-CONHO在碱性条件下与'Cu2+络合成紫红色化合物，产生的颜色在一定范围内与蛋白质含量成正比。此反应和二分子尿素缩合后的产物双缩脲（H2N-C0-NH-C0-NH2）与碱性铜溶液作用形成紫红色化合物的反应相似，故称为双缩脲反应。此方法简便、准确、重复性好，但灵敏度较其它方法稍差，是目前临床上最常规的方法。紫外分光光度法原理蛋白质分子中的酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在280nm处有.•吸收峰。可用于测定蛋白质但需避免核酸十扰。优点)敏感而简便，可保留蛋白生物活性。需紫外分光光度计及石英比色皿。{缺点.,nf

I_各种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280™测定易受游离色aa和酪aa以及尿酸和胆红素的干扰；导致准确性和特异性受影响。*'■④折光测定法原理溶解在溶液中的固体可增加溶液的光折射率，在固定波长和温度下，光折射率和血清中蛋白质含量成正比。优点简便、快速，易掌握，重复性较好，适合临床;缺点准确性较差。⑤自动生化分析仪测定应用TPt:少见，属相对性；常见于脱水、休克、某些肿瘤等；TPI:肝脏疾病、肾脏疾病、肠道吸收不良At:少见属相对性，。常见于脱水、休克。AI:肝炎、肝硬化、慢性胃肠疾病；某些寄生虫感染、长期饥饿或营养不良。G；:饲喂初乳不足、免疫缺陷病;A/G倒置是肝功能损害的一个重要指标。…葡萄糖】(BG—BloodGlucos)I一、血糖的来源、去路和调节|了糖的来源与去路来源去路图9-1血糖的来源与去路食物中的糖类-->-——有氧氧化血糖♦肝糖原分解-■>3.9〜6.7——无氧酵解糖异生作用-〉mmol/L-合成糖原其他单糖转化-■»-＞转化为甘油、脂肪酸、氨基酸和其他糖类.糖的生理功能（能量资源和结构材料）①氧化供能：分解代谢提供机体75%能量；②机体组成成分之一糖占机体干重的2%;形成糖原储存在肝脏与肌肉中：形成糖蛋白和蛋白多糖（激素、酶、受体等）、糖脂（神经组织和细胞膜重要组分）；③转变作用其它糖及糖衍生物（核糖、脱氧核糖、氨基多糖）等；非糖物质（脂肪、氨基酸核酸）。④糖代谢紊乱->供能障碍->一系列代谢变化。1.血糖水平恒定的生理意义保证重要组织器官的能量供应，特别是某些依赖葡萄糖供能的组织器官I①脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要依赖葡萄糖供能；②红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能；③骨髓和神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供能。：.血糖浓度的调节①肝脏调节转运调控：肝细胞膜G载体可允许G快速转运，达到平衡时，肝内外G浓度几乎相等。；酶的双向调控：通过神经-激素的作用，使肝细胞内各种糖代谢的酶活性改变。1葡萄糖-6-磷酸酶，可促进肝糖原水解，补充和升高血糖。v

1促进组织摄取葡萄糖，促进肝糖原合成、抑制肝糖原分解、抑制糖异生而降糖。2）神经调节主要通过下丘脑和自主神经（交感和副交感）直接作用于肝脏获调节激素的分泌而影响血糖。③激素调节降糖激素：胰岛素胰岛素样生长因:升糖激素：胰高血糖素肾上腺素生长激素皮质醇甲状腺激素--级反应+促进或激活---二级反应一抑制图9-3血糖调节的主要机制1.高血糖症与糖尿病高血糖症：空腹血浆血糖(FPG)>7.3mmol/L(130mg/dl)高糖饮食；生理性：情绪紧张；肾上腺分泌见于糖尿病；内分泌腺病理性：功能亢进；颅内压升高刺激血糖中枢；脱水。尿糖：若血糖浓度高于肾糖阈值9.Ommol/L,即超过了肾小球滤过率，出现尿糖。糖尿病(diabetesmellitus,DM)定义：是一种慢性、复杂的代谢紊乱性疾病，系胰岛素相对或绝对不足，或利用缺陷引起。临床特征：血糖持续升高，甚至出现糖尿。“三多一少”：多尿、多饮、多食、体重减轻。发病机制①胰腺0细胞的自身免疫性损伤②机体对胰岛素的作用产生抵抗.低血糖症低血糖症是指血糖浓度低于2.2mniol/L时临床出现一系列因血糖浓度过低引起的症候群。I发病原因来源＜去路(①激素效应：升血糖激素缺乏，降血糖激素过剩。②肝脏疾病：肝功严重损伤致肝糖原减少和糖异生严重障碍。③长期饥饿或剧烈运动时代谢率增加，血糖消耗过多。酮体形成过多引起血中含量增高，称为酮血症。酮体：乙酰乙酸（20%）、羟丁酸（78%）、丙酮（2%）三者统称为酮体原因：①糖尿病②糖摄入不足：脂肪动员③糖原储存过多：脂肪动员④碱中毒：代偿NADH+H*NAD+两酮CH3CHCH2COOH/D(-)-p-羟丁酸/0IfQUQQUI糖代谢障碍1旨肪酸分解/a2酰乙sP•羟丁酸脱氢晦SES临床意义：___如有酮体存在，需确定酮酸中毒状态；酮血症的诊断对指导胰岛素治疗最有价值。.体液葡萄糖的测定方法1.无机化学法Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的还原性Cu2+—Cu+;

特异性差。2.有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯法等邻甲苯胺+Glu^葡萄糖基胺希夫氏碱（蓝绿色）影响因素多。.酶法测定①己糖激酶法（HK法）葡萄糖+ATPHK

葡萄糖-6-磷酸+ADP葡萄糖-6-磷酸+NADP+G-6-PDr

6-磷酸葡萄糖内酯+NADPHNADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵。葡萄糖+02+H20■wn②葡萄糖氧化酶法(GOD)>葡萄糖酸内酯+H2022H202+4-氨基安替比林+酚->红色醌类化合物+H20+02操作简单，特异性较高，是血糖测定的首选方法.但溶血、GSH、Vc、胆红素等可引起测定结果负偏差。4.自动生化分析仪测定测定的临床应用了解况y鯉酗的功能，BSf:①糖尿病；②肾上腺皮质机能亢进;③垂体机能亢进；④反刍兽氨中毒；⑤牛生产瘫痪；⑥用胰岛素过量；⑦绵羊肠毒血症等BS；：①肾皮质功能不全；②胰岛素分泌过多③肝功能不全；④牛的酮病；⑤新生幼畜低血糖等。血脂类】血脂：胆固醇、胆固醇脂、甘油三脂、磷脂等。1.测定方法：)移量法：老方法，现已不用；：化学方法：硫磷铁反应法强酸试剂显色法I薄层析法：I酶法测定：70年开始，需紫外分光光度计、氧电极等，昂贵，少用。自动生化分析仪：多釆用酶法测定，试剂盒较贵。应用:动物原发性血脂症较少主要是了解继发性疾病:如：内分泌障碍；肝脏疾病；胰腺疾病；肾脏病等。【血中有机物】包括尿素痰（BUN）、尿酸、肌酸、肌肝等1.测定方法：半定量试纸法；色谱试纸法；定量比色法；自动生化分析仪测定。}2.临床应用：i①诊断泌尿系统疾病：氮血症时BUNt，肾功能障碍时肌肝t；

肾炎时尿酸f。②鉴别肝脏疾病：肝病、肝硬化等，BUNI③判断疾病的预后：肌肝＞50mg/L,提示严重肾损伤，预后不良;肌肝〉100mg/L，动物即可死亡。【血B机离子测定】包括K、Na、Ca、Pi、Cl、Mg等1.测定方法：火焰光度法：离子选择电极法；化学法：仍常用原子吸收分光光度法：较理想，仪器较贵;2.临床应用了解机体离子的代谢状况。:【微量先素测定】包括Cu、Fe、Mn、Zn、Se、Co、Mo等1.测定方法：原子吸收分光光度法；极谱仪法。2.临床应用①微量元素与生长发育的关系Cu>Fe>Mn>Zn>Co、I等促生长；_缺乏其中一种，可引起发育停滞。___给发育不良的动物补Mn、Co，可加速生长，增加体重。_____________...........②微量元素能影响内分泌：r)铅、镉、汞过多会干扰内分泌的功能。缺Fe:①出现糖尿病；②生殖器官发育不全;③性功能紊化。缺Mn:①胰岛数目少；②Glu利用I;③精子数目I;缺Zn:①性功能I；②睾丸缩小；③精子生成停顿。C.微量元素与疾病