GB 4789.27-2008 好 鲜乳中抗生素残留检验

食品卫生微生物学检验

鲜乳中抗生素残留检验Microbiologicalexaminationoffoodhygiene—ExaminationofresidueofantibioticsinfreshmilkGB/T4789.27-2008概述1.奶牛易患由化脓性细菌引起的乳房炎2.抗生素用于预防和治疗乳房炎3.半衰期较长的抗生素，如青霉素、链霉素、庆大霉素会残留在牛奶中4.危害人的健康影响生产发酵乳

5.对鲜乳中抗生素残留进行检验

6.采用微生物手段******

(挤牛奶)并列式挤奶厅

管道式挤奶机

展出的这头奶牛身长4.1米，胸围3.1米，体重达2100

公斤，体重创世界纪录，为塞尔维亚人米亚托维奇饲养

1.在人工或机器自动化挤奶过程中，由于经常机械性地刺激奶牛的乳房，而且奶牛饲养环境中存在大量的化脓性细菌，如葡萄球菌、链球菌等，容易引起奶牛的乳房炎。

饲养管理不当，也会引起乳房炎。2&3.为了预防和治疗奶牛的乳房炎，常常注射大量的抗菌素，如青霉素、链霉素、庆大霉素等，这些抗菌素的半衰期较长，会残留在牛奶中。妥布霉素、林可霉素、克林霉素、安普霉素、泰乐菌素、咪康唑，制霉菌素，碘制剂。还有中药制剂弃奶期的奶中残留有一定量抗生素，该弃不弃。

**4.鲜乳中残留抗生素的危害：

一是对饮用者的健康不利，主要包括四方面：过敏反应易产生耐药菌株破坏微生态平衡器官损伤二是在加工时不能用于生产发酵乳。

*5.为了保证饮用者的安全和实际生产的需要，对鲜乳中抗生素残留进行检验是很有必要的。6.鲜乳中抗生素残留的检验应属于理化检验的范畴，但鉴于此方法是采用微生物手段，国标中也把此检验放入微生物学部分。**主要修改本标准与GB/T4789.27-2003相比主要修改如下：

——标准名称修改为“食品卫生微生物学实验鲜乳中抗生素残留检验”(省略了“量”)——增加了第二法嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法，将原标准的嗜热乳酸链球菌方法确定为第一法；——增加了附录A“培养基和试剂”。范围本标准规定了鲜乳中抗生素残留的检测方法。

本标准的第一法适用于鲜乳中能抑制嗜热链球菌（streptococcusthermophilus）抗生素的检验；

第二法适用于鲜乳中能抑制嗜热脂肪芽孢杆菌卡利德变种（Bacillusstearothermophilusvar.calidolactis）抗生素的检验，也可用于复原乳、消毒灭菌乳、乳粉中抗生素的检测。

指示菌指示剂原理1原理第一法嗜热链球菌抑制法

TTC(2,3,5-氯化三苯四氮唑,氧化剂)

TTC氧化型无色，TTC还原型红色嗜热链球菌，对多种抗生素都很敏感乳中有抗菌素，加入菌液不繁殖，无氢产生，TTC

保持原来氧化型无色。乳中无抗菌素，加入菌液即行繁殖，生物氧化产生的氢使TTC被还原而显红色。即：乳样呈原色即菌被抑制不生长时为残留阳性，呈红色有菌生长为抗生素残留阴性

2菌种、培养基和试剂2.1菌种：嗜热链球菌。

——对常用抗菌素都敏感，乳中残存抗菌素，既能抑制该菌生长。

2.2灭菌脱脂乳

成分：无抗生素的脱脂乳。制法：经过115℃灭菌20min,杀灭可能存在的细菌。

——接种嗜热乳酸链球菌，36℃培养15h，做菌液用。2.34％2，3，5-氯化三苯四氮唑(TTC)水溶液：

——

氧化状态无色，还原态红色。2.4青霉素G参照溶液3检验程序杀灭可能存在的对抗生素不敏感菌避免假阴性存在观察时要快，避免阳光照射过久干扰操作步骤说明1活化菌种

取一接种环嗜热链球菌菌种，接种在9mL灭菌脱脂乳中，置36℃恒温培养箱中培养12h—15h后，置2℃—5℃冰箱保存备用。每15d转种一次。

2测试菌液

将经过活化的菌种接种灭菌脱脂乳，36℃±1℃培养15h±lh，加入相同体积的灭菌脱脂乳混匀稀释成为测试菌液。

嗜热链球菌菌种操作步骤说明（续）3培养

测试菌液1mL+4%TTC水溶液0.3mL，混匀。36℃±1℃水浴避光培养30min，观察颜色变化。

4判断方法

在白色背景前观察，试管中样品呈乳的原色时，指示乳中有抗生素存在，为阳性结果。试管中样品呈红色,为阴性结果。TTC第二法嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法1原理培养基预先混合嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢，并含有pH指示剂（溴甲酚紫）。加入样品并孵育后，若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限，细菌将在培养基中生长并利用糖产酸，pH指示剂的紫色变为黄色。

pH变色范围：5.2（黄）——6.8（紫）相反，如果样品中含有高于检测限的抗生素，则细菌芽孢不会生长，pH指示剂的颜色保持不变，仍为紫色。即黄色－－阴性紫色－－阳性2菌种、培养基和试剂2.1菌种：嗜热脂肪芽胞杆菌卡利德变种

2.2无菌磷酸盐缓冲液。

2.3灭菌脱脂乳成分：无抗生素的脱脂乳。制法：经过115℃灭菌20min,杀灭可能存在的细菌。2.4溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基溴甲酚紫指示剂，pH变色范围：5.2（黄）——6.8（紫）2.5青霉素G参照溶液3检验程序嗜热脂肪芽胞杆菌卡利德变种复习思考题1表述题：检验鲜乳中是否残留抗菌素第一法（即嗜热链球菌抑制法

）的原理。2填空题：检验鲜乳中是否残留抗菌素第一法所用的指示菌是嗜热乳链球菌，因该菌对多种抗生素都很敏感。试验所用指示剂是TTC，其氧化型为无色，TTC还原型为红色。如果乳中有抗生素存在，则检样中虽加入菌液培养物，但因细菌的繁殖受到抑制，因此指示剂TTC（氧化剂）不还原，不显色。与此相反，如果没有抗生素存在，则加入菌液即行繁殖，生物氧化产生的氢使TTC被还原而显红色，也就是说检样乳呈现原色时为抗生素残留阳性，呈红色为抗生素残留阴性。3表述题：表述检验乳中是否残留抗菌素第二法（即嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法）的原理。4填空题：检验乳中是否残留抗菌素第二法所用的指示菌