刺五加对抑郁症大鼠行为学的影响

刺五加对抑郁症大鼠行为学的影响

抑郁是最常见的精神障碍，主要表现为抑郁、精神障碍和运动缓慢、自发和自我控制和自杀。慢性休克可以诱导抑郁。临床资料显示刺五加在抑郁症治疗中有一定作用,但其对各种抑郁症状的作用效果尚不清楚。本实验通过观察刺五加对大鼠强迫游泳运动时间及慢性温和性不可预知应激(chronicunpredictablemildstress,CUMS)结合孤养的抑郁模型大鼠糖水偏爱度、体重增长和行为学的影响,进一步探讨刺五加的作用效果,并与盐酸氯丙咪嗪和两药联用的抗抑郁作用效果进行比较,为临床针对不同症状选择用药提供一定的理论依据。1材料和方法1.1材料表面1.1.1动物健康SD雄性大鼠(清洁级)90只,体重200～230g,购于浙江省实验动物中心。1.1.2悬浊液的溶解刺五加浸膏(黑龙江新医圣制药有限责任公司,国药准字Z23020376),用水溶解为浓度125mg/ml的悬浊液;盐酸氯丙咪嗪(上海信谊九福药业有限公司,批号070601),粉碎后用水溶解为浓度7.5mg/ml的悬浊液。1.2方法1.2.1刺五加浸膏多次给药对大鼠的安全性评价参照文献方法,将36只大鼠随机分为正常对照组(NC)、空白对照组(BC)和刺五加浸膏灌服组I、II、III、IV组(GI、II、III、IV组),每组6只,NC组不给药,BC组灌服生理盐水,GI、II、III、IV灌服刺五加浸膏的剂量依次为100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg和600mg/kg,连续9d,于灌服的第1、3、5、7、9天将大鼠放入高60cm,直径35cm,水深30cm的量筒,观察其5min内水面累计不动时间。1.2.2应激刺激试验(1)大鼠适应性饲养一周后进行Open-Field测试,剔除水平运动次数加垂直运动次数不足40次或超过120次的大鼠,将48只大鼠随机分为正常对照组(NC)、空白对照组(BC)、实验对照组(EC)、刺五加浸膏组(AS)、盐酸氯丙咪嗪组(CH)及刺五加浸膏+盐酸氯丙咪嗪组(A+C),每组8只。(2)采用CUMS结合孤养方法造模,参照文献并略加改进。NC组大鼠在安静、室温20～22℃、自然光照、自由进食和进水的条件下每笼4只饲养,不予任何刺激。其余各组每笼1只饲养,接受以下各种不同的应激刺激:强迫游泳(12℃,5min)、夹尾(1min)、禁水(24h)、禁食(24h)、鼠笼倾斜45°(24h)、温箱(45℃,5min)、摇晃(3Hz/s,15min),7d为一组,顺序随机,每天1种,连续21d。(3)除NC和BC组不灌服任何物质外,从造模的第8天开始,于每次应激刺激前30min,EC组灌服生理盐水(1ml/只),AS组灌服刺五加浸膏(600mg/kg),CH组灌服盐酸氯丙咪嗪(20mg/kg),A+C组灌服刺五加浸膏+盐酸氯丙咪嗪(600mg/kg+20mg/kg),连续28d。(4)训练大鼠适应含糖饮水,禁食禁水24h后采用双瓶实验进行蔗糖水测试。分别于造模前、应激刺激结束后及给药完成后,测试2h大鼠液体消耗,计算糖水偏爱度(糖水偏爱度=糖水消耗/总液体消耗×100%)。(5)采用不透明,周壁、底面为黑色材料制成的敞箱装置(底面边长100cm用白线划分为面积相等的25块,高40cm)。每隔7d,于上午8∶30～12∶00之间,将大鼠置于中心方格内,观察其5min内中央格停留时间、后肢直立次数(两前爪腾空或攀附板壁)、穿越格数(四爪均进入方格)、清洁运动次数,结束后测定体重。1.3t检验所有数据以均数±标准差(x¯±s)(x¯±s)表示,配对t检验,由SPSS11.5系统完成,Origin7.0统计软件对数据作图。2结果2.1两组小鼠血清内时间的比较除GI组外,其他各组大鼠灌服刺五加5d后5min内水面停留不动时间与NC组相比都有不同程度的减少。与NC组相比,GIV组于第5天开始即显著减少(P<0.05),GII、III两组从第7天开始显著减少(P<0.05),BC组没有显著差异(图1)。2.2两组as组和b组的血压比较各组大鼠在造模前两天糖水偏爱度均没有显著差异(P>0.05);与NC组相比,BC组和EC组在第21天和第35天明显降低(P<0.01);AS组、CH组和A+C组在第21天偏低(P<0.05),在第35天恢复(P>0.05,表1)。EC组与BC组相比没有显著差异(P>0.05)。2.3刺五加对抑郁大鼠的手术影响2.3.1高水平差异检验与NC组相比,各组在第8天即延长并存在显著差异(P<0.05),BC组第22天达最大后维持高水平,AS组第15天达最大后逐渐缩短但仍存在显著差异(P<0.05),CH组和A+C组第15天达最大后逐渐缩短,A+C组在第28和36天没有显著差异(P>0.05),CH组在第36天没有显著差异(P>0.05,图2A)。EC组与BC组相比没有显著差异(P>0.05)。2.3.2as组和a+c组第32天达最小后维持水平与NC组相比,各组在第8天即减少并存在显著差异(P<0.05),BC组第22天达最小后维持低水平,AS组第15天达最小后逐渐增加至第36天恢复(P>0.05),CH组和A+C组在第8天后逐渐增加至第36天恢复(P>0.05,图2B)。EC组与BC组相比没有显著差异(P>0.05)。2.3.3as组和a+c组的平均变化及差异与NC组相比,各组在第8天即减少并存在显著差异(P<0.05),BC组第22天达最小后维持低水平,AS组第22天达最小后逐渐增加至第36天仍存在显著差异(P<0.05),CH组和A+C组在第8天后即开始增加,至第36天,A+C组恢复(P>0.05),CH组仍未完全恢复(P<0.05,图2C)。EC组与BC组相比没有显著差异(P>0.05)。2.3.4组as组和a+c组的后完全恢复与NC组相比,各组在第8天开始即减少并存在显著差异(P<0.05),BC组第15天达最小后维持低水平,AS组第15天达最小后逐渐增加至第28天和第36天恢复(P>0.05),CH组和A+C组第15天达最小后逐渐增加,至第36天,A+C组恢复(P>0.05),CH组仍未完全恢复(P<0.05,图2D)。EC组与BC组相比没有显著差异(P>0.05)。2.4各组第二周和第二周衰减周对比各组大鼠在第一周没有显著差异(P>0.05);与NC组相比,BC组第二周开始明显减慢并始终存在显著差异(P<0.05),AS组、CH组和A+C组第二周减慢并存在显著差异(P<0.05),其他各周无显著差异(P>0.05,图2E)。EC组与BC组相比没有显著差异(P>0.05)。3对抑郁症患者行为特征的影响强迫游泳试验属行为绝望模型,常用于抗抑郁剂的快速筛选。本实验中我们首先应用了该模型,对刺五加作为抗抑郁药物进行初步筛选。实验结果显示,经过连续9d的强迫游泳,NC组和BC组大鼠5min内水面停留不动时间明显延长,灌服200mg/kg、400mg/kg和600mg/kg刺五加浸膏组动物则明显缩短,以600mg/kg起效最快。由Willner等首先提出的CUMS模型是抗抑郁药物的筛选和抑郁症病理生理研究较为理想的模型之一。本实验中我们采用CUMS+孤养方式建立了抑郁模型,采用双瓶实验测量液体消耗,旷场实验测试行为学改变。结果表明,抑郁模型大鼠(BC组和EC组),造模期间总液体消耗无明显变化,1%蔗糖水偏爱度第21天显著下降至第35天持续处于低水平;造模第8天后肢直立次数、穿越格数、清洁运动次数均显著减少,中央格停留时间显著增加,至第36天(造模结束后2周末)仍保持这种行为学改变;抗抑郁剂盐酸氯丙咪嗪治疗4周后(第36天)1%蔗糖水偏爱度回升到正常水平,治疗两周后(第21天)行为学各项指标均有所恢复,治疗4周(第36天)多数恢复正常水平。结果显示,该模型不仅反映了动物对幸福事件反应能力的下降、活动能力下降和兴趣丧失与抑郁症临床表现中的精神运动性阻抑症状相似,而且这种抑郁状态可保持较长时间并可为抗抑郁剂改善。同时也表明该模型符合相关国际标准,可用于研究抑郁症的发病机制和抗抑郁剂药理作用等相关研究。刺五加浸膏是刺五加粉乙醇浓缩提取物。临床研究证实刺五加与传统的抗抑郁药丙咪嗪、氟西汀等一样,有助于改善抑郁症患者的心境和情绪,且副反应少,更为安全有效。本研究结果显示,AS组较CH组模型大鼠糖水偏爱度和穿越格数的恢复无明显差异,中央格停留时间和垂直运动次数的恢复略差,清洁运动次数恢复略好;A+C组大鼠的中央格停留时间、穿越格数和清洁运动次数的恢复优于单独使用盐酸氯丙咪嗪,中央格停留时间和穿越格数的改善优于单独使用刺五加,其他无差异。目前,国外大多数学者采用液体消耗实验中糖水偏爱度显著降低作为测量快感缺乏的客观指标,Open-field测试中的穿越方格数目减少反映动物活动度的降低,后肢直立次数减少和中央格停留时间延长反映动物对新鲜环境的好奇程度降低,清洁动作次数减少反映动物对周围环境的要求及对自身的关注下降。我们认为:单独和联合使用药物在改善抑郁症的核心