4GC2GC课件 北京大学

4.高效液相色谱

4.0概论

1在这一部分您将学习高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）的区别.高效液相色谱仪的组成部件.分离过程的基本概念.关于色谱图.

HPLC的常见模式

2您有一个问题需要解决我急需一个测定我们某些产品中糖类化合物的定分离方法.我需要一种分离技术。

我来解决这个问题!3分离技术我们实验室有两种分离技术,高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）.我应该使用哪种呢?4HPLC和GC的比较压样品挥发性样品极性HPLC

没有挥发性要求

样品必须溶于流动相GC

样品必须是可挥发的HPLCGC

可分离极性和非极性化合物

从多环芳烃（PAH）到无机离子

样品是非极性和极性的5HPLC和GC的比较6HPLC和GC的比较样品的热稳定性样品的分子量HPLC

分析可以在室温或低于室温的条件下进行

GC

样品必须能经受进样口

和色谱柱的高温HPLCGC

没有理论上限

在实际上,溶解性能是一个限制.

典型的分子量<500amu7HPLC和GC的比较样品制备样品量HPLC

样品必须经过滤

样品溶剂应当与

流动相相同GC

溶剂必须是可挥发的

且其沸点一般要低于

被分析物的沸点

HPLCGC

样品量取决于

色谱柱内径.

典型的进样量1-5L

8HPLC和GC的比较分离机理检测器HPLC

固定相和流动相都参与分离GC

流动相只是样品的载体HPLCGC

常用UV-Vis

应用范围宽的非破坏性

检测器3维检测器

灵敏度为pg级

最常用FID,

有机化合物通用9糖类化合物1.果糖2.葡萄糖3.蔗糖4.Palatinose5.海藻糖6.异麦芽糖色谱柱：ZorbaxNH2(4.6x250mm)流动相：70/30乙腈/水流速：1mL/min检测：

折光指数检测器12345mAU保留时间6我们如何分析这一样品?10分离进样器r检测器r色谱柱溶剂混合器泵基于固定相和流动相之间差速迁移进行分离.固定相-固定在色谱柱中的相，如，C18,硅胶流动相-随着流过色谱柱，将样品载送通过固定相.高效液相色谱仪废液11分离进样器检测器色谱柱溶剂混合器泵色谱图开始进样mAU保留时间高效液相色谱仪12分离进样器检测器色谱柱溶剂混合器泵色谱图开始进样mAU保留时间13分离进样器检测器色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间14分离进样器检测器色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间15分离I进样器检测器r色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间16分离进样器检测器色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间17分离进样器检测器色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间18分离进样器检测器r色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间19分离进样器检测器色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间20分离进样器检测器色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间21分离进样器检测器色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间22分离进样器检测器色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间23分离进样器检测器色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间24分离I进样器检测器色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间25分离进样器检测器色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间26分离进样器检测器r色谱柱溶剂泵混合器色谱图开始进样mAU保留时间27色谱图进样totRmAU保留时间tRto-不保留峰的流出时间tR-

保留时间-决定样品的属性峰面积与被分析物的量成正比.28HPLC分析参数泵脱气装置自动进样器柱箱溶剂储液瓶检测器流动相流速组成进样体积色谱柱柱箱温度波长时间常数29HPLC的分离模式化合物类型模式固定相流动相中性弱酸弱减反相C18,C8,C4氰基,氨基水/有机改性剂离子型,碱,酸离子对C-18,C-8水/有机离子对试剂在水中不溶的化合物正相硅胶,氨基,氰基,二醇基有机相离子，无机离子离子交换阴离子或阳离子交换树脂水相/缓冲液对离子高分子量化合物聚合物体积排阻聚苯乙烯硅胶对于凝胶过滤色谱-水相对于凝胶渗透色谱-有机相30HPLC