风害损伤对檀香药材质量的影响

风害损伤对檀香药材质量的影响

中药檀香树是檀香树科的植物，属于印度、印度尼西亚和其他国家。自然生长的檀香需10a以上开始形成心材(即结香),30～40a才可供药用;我国自1962年首次引种,迄今为止,各引种区均未形成商品药材。有文献报道,檀香受机械损伤或激素刺激可提早结香,但未深入研究。笔者在广东省湛江南药场进行了檀香结香试验,发现风害损伤亦可促进檀香结香,故对其进行质量和药效学研究,现报道如下。1实验材料1.1样品与药效学印尼样品(对照药材),为广东省药材公司提供的檀香心材,树龄不详。风害A样品,为湛江南药场被台风断梢2a后形成的檀香树干心材,树龄为10年生。风害B样品,为湛江南药场被台风断梢2.5a后形成的檀香树干心材,树龄为10年生。25年生样品,为湛江南药场自然生长25a的檀香树干心材。以上湛江南药场檀香样品均为从印尼引种的檀香树苗所繁殖,经广东省中药研究所邱金裕主任中药师鉴定,原植物均为檀香SantalumalbumL.。药效学实验时在檀香水提液中按比例加入挥发油。檀香油对照品,购于中国药品生物制品检定所,批号789-9001。1.2挥发油提取器岛津GCMS-QP-5000型气质联用仪,挥发油提取器(浙江萧山),定量毛细管(DrummondUSA),Bl-301智能型生物信号。1.3试剂及仪器阿托品(杭州第一制药厂分装,批号960385),乙酰胆碱(上海试剂三厂,批号952804),硅胶G(青岛海洋化工厂),醋酸乙酯、乙醇、无水乙醇、甲苯、丙酮、甲酸、盐酸、三氯化铁、铁氰化钾、无水硫酸钠等试剂均为分析纯。1.4动物NIH小鼠,由广州中医药大学动物中心提供,合格证号:98A029;家兔,由广州市白云区新市石马实验动物场提供。2实验方法2.1有效领域研究2.1.1油含量测定按《中国药典》挥发油提取甲法进行,分出挥发油后加无水硫酸钠脱水,密闭保存。2.1.2msie70evGCDB-1石英毛细管色谱柱(30mm×0.25mm);进样口温度250℃,接口温度230℃;载气为氦气,流速1.3ml·min-1;柱压80kPa,分流比30∶1,进样量1.0μl;升温程序柱温60℃,5℃·min-1程升至160℃,再1℃·min-1程升至170℃,再8℃·min-1程升至230℃。MSEI源(70eV),双灯丝;扫描范围,质荷比40～400,扫描间歇1.0s。2.1.3层析样品溶液的制备提取挥发油后的水液浓缩至1/3后以醋酸乙酯萃取,萃取液浓缩后作酯提部位;水层浓缩至干,以无水乙醇回流提取,作为醇提部位。2.1.4氯化铁乙醇溶液的制备酯提部位以甲苯-醋酸乙酯-丙酮-甲酸(40∶30∶2∶5)上行展开,取出,干后喷以2%三氯化铁乙醇溶液(加少量盐酸),于105℃烘10min显色。醇提部位以甲苯-醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(30∶40∶20∶5∶3)上行展开,取出,干后喷以三氯化铁-铁氰化钾试剂显色。2.2关于药物效率的研究2.2.1小鼠炭末推进试验选用18～22gNIH小鼠80只,雌雄各半,随机分为8组,灌胃给药,每天1次,连续4d,对照组灌服等量蒸馏水,药后3d,小鼠禁食不禁水24h,然后按炭末推进试验法实验,给小鼠灌服含5%炭末的药液20ml·kg-1,对照组灌服等量的5%生理盐水炭末溶液,药后15min按炭末推进试验法测量小鼠小肠炭末推进率,试验结果作统计学处理。2.2.2小段的活性成分测定选用2.0～2.5kg家兔,雌雄兼用,按离体豚鼠回肠实验法取出回肠一段,置于盛有冰冻台氏液的培养皿中,并剪成2cm左右的小段备用。实验时,将一段小肠置于恒温的麦氏浴槽中,用生物信号采集与处理系统记录肠段平滑肌的肌力与蠕动频率,待肌力与蠕动频率恒定后立即开始给药,对照组给等量的台氏液;另取肠段以乙酰胆碱致肠平滑肌处于痉挛状态再给药物,观察药物对正常及痉挛状态离体兔肠平滑肌的影响,以给药前后差值为指标,实验结果作统计学处理。3结果与分析3.1心材挥发油含量各样品挥发油含量见表1。表1显示,受风害损伤的10年生檀香心材挥发油含量约为25年生檀香的1/2,损伤2a后半年内挥发油含量可增加30%左右。而同环境下未受风害损伤的同龄檀香未见心材形成,未能提出挥发油。3.2香蕉皮提取物香香料酯类各样品挥发油中的主要化学成分见表2。结果显示,各样品与对照品主要成分均为α-檀香醇、β-檀香醇等檀香醇类成分,其总含量均高于65%。目前,进口檀香商品药材有印度产及印尼产2种,前者檀香醇含量高于80%,而后者则低于75%。本试验所用檀香油对照品檀香醇含量为83.10%,且不含荷叶醇,推测为印度进口檀香商品药材提得的挥发油。湛江南药场引种的檀香源于印尼,故各样品檀香醇含量均低于75%,与印尼商品药材相似;且均含较高量的荷叶醇。3.3色度图的色度分析由图1可见,受风害损伤檀香的酯提及醇提部位的薄层行为均与自然生长25a植株及对照药材相似。3.4香精及印0对小鼠小鼠炭末推进率的影响结果提示,高、低剂量的风害损伤檀香、25年生檀香及印尼檀香对小鼠小肠炭末的推进率均有显著抑制作用,与对照组比较P<0.05～0.01,各剂量组的抑制作用无显著差异,P>0.05,见表3。3.5离体兔肠平滑的振动频率和收缩力结果显示,风害损伤檀香水提液可显著抑制正常离体兔肠平滑肌的收缩力,与对照组比较P<0.05;而对正常离体兔肠平滑肌的蠕动频率及痉挛状态下的离体兔肠平滑肌的蠕动频率和收缩力均无显著影响,P>0.05。25年生檀香和印尼檀香水提液均可显著抑制痉挛状态下的离体兔肠平滑肌的收缩力,与模型组比较P<0.05;但对正常和痉挛状态下的离体兔肠平滑肌的蠕动频率及正常离体兔肠平滑肌的收缩力均无显著影响,与对照组比较P>0.05;见表4,表5。4风害损伤对芳香结香的影响印尼进口的檀香商品药材挥发油含量达3.36%,高于药典3%的限定值。由于湛江南药场引种的样品均未达到采收年限,挥发油含量均低于对照药材。对南药场10年生檀香取样结果显示,自然生长者均未见有心材形成,其木部也未能提出挥发油,而经风害损伤的同龄檀香均有心材生成,损伤2.5a后,所形成的心材挥发油含量可达1.44%,油中有效成分檀香醇含量接近于对照药材,油中成分组成与对照药材相同,各提取部位薄层行为也与对照药材相似,表明风害损伤能刺激檀香结香。檀香心材多含挥发油等次生代谢产物,已有报道证实虫害等外界刺激能显著影响巴戟天等植物营养器官显微构造及次生代谢产物的含量,产生一系列抗逆生理反应。因此,风害刺激檀香结香的现象,亦可能是植物受风害损伤后抗逆生理的一种反应。经药效学实验证实,风害损伤形成的檀香心材、同产地25年生檀香心材及对照药材对胃肠平滑肌均有抑制作用,可抑制小鼠小肠炭末推进率及痉挛状态下的离体兔肠平滑肌的收缩力(P<0.