二陈汤配伍机制研究

二陈汤配伍机制研究

二陈汤是宋代太平惠民和菊花的基础。它对除湿和粘液也很有效。组合严谨,君臣协调,衍生者多,疗效可靠。本文试用混料均匀设计法对二陈汤进行拆方研究,通过药效实验,经数据分析,对复方中的君臣佐使关系进行科学的验证,解释传统方剂结构关系和作用机制,并最终阐明复方的配伍机制。1实验材料1.1特芬材料方中药材由同济堂药房提供,并由贵阳中医学院生药教研室刘芃教授鉴定,半夏、陈皮、茯苓、甘草4味药材均为2005版《中国药典》收载品种。1.2实验动物昆明种小鼠(贵阳医学院动物房提供),体重(20±2)g,雌雄对半。1.3试剂和机器氨水、碳酸氢钠、酚红(上海虹光化学厂);980-A型超声雾化器(上海医械五机厂),721-分光光度计(上海第三分析仪器厂)。2在中药配方优化中的应用混料均匀设计法是混料设计与均匀设计相结合的一种实验设计方法,常用于各种化学配方的优化,亦可用于中药方剂配伍的优化及机制的研究。本实验以方中四味药材为4个因素,使用DPS软件选择4因素11水平(U411)混料均匀试验表,并以原处方总量45g为各处方总量,按照比例得到不同的11个处方(表1)。3药理学实验3.1实验指标的选择药理实验则根据二陈汤的主治功效,同时兼顾标本兼治、中西结合等原则,选择止咳、祛痰两项指标进行实验。通过文献查阅,分别采用氨水引咳法、酚红法对上述两个指标进行具体实验。实验对象均为(20±2)g小白鼠,给药剂量均为成人剂量的10倍。3.2制备不同的水溶剂对不同一公里水的加8倍量水煮按照混料均匀设计表中各处方量称取各药材,按其传统的提取工艺进行煎煮,即加8倍量水,煎煮2次,每次30min。合并煎煮液,过滤后浓缩,并于减压干燥器中将溶剂挥干,得干浸膏,取干浸膏研磨后用蒸馏水溶解,定容至60mL即可。3.3动物咳嗽次数观察取(20±2)g小鼠110只,雌雄各半,随机分为11组,按照0.1mL/10g剂量灌胃给药,每12h1次,连续3天,末次给药前禁食12h,给药后60min,放入喷雾器内,恒压喷雾浓氨水溶液20s,取出小鼠放置于合适的透明容器中,观察2min内动物咳嗽次数。3.4小鼠的光度计检测取(20±2)g小鼠110只,雌雄各半,随机分为11组,0.1mL/10g灌胃,每12h1次,连续3天,末次给药前禁食12h,给药后30min,腹腔注射0.8%酚红溶液(0.1mL/10g),40min后把小鼠处死,迅速剥离气管,用0.1mL4.2%的NaHCO3溶液冲洗气管3次,冲洗液加入10mL试管(事先加入2mL0.9%的生理盐水和0.5mL4%的NaOH溶液,编号备用),用721-分光光度计测定溶液的吸光度,检测波长546nm,记录吸收值。以上两项药理实验结果见表1。3.5病理数据的统计分析3.5.1因子间的量化和序化对两个系统或两个因素之间关联性大小的量度,称为关联度。关联度分析的目的就是对信息不完全与“少数据不确定”的系统作因子间的量化和序化。将表1中的处方组成与药理实验数据进行关联度分析,结果见表2(表中所示为关联系数)。由表2中看出,方中4味药与药理指标的关联序分别为:止咳实验中半夏﹥陈皮﹥甘草﹥茯苓;化痰实验中半夏﹥陈皮﹥茯苓﹥甘草。此关联序阐明了方中四味药对以上两个药理指标结果的影响的大小,同时止咳与化痰实验中半夏为第一影响因素,陈皮为第二影响因素。3.5.2完整回归方程二次多项式逐步回归分析是二次多项式回归分析和逐步回归分析相结合的一种多元回归分析方法。近年来较多用于中药复方的研究,同时此方法可以得到回归方程,更有利于对结果进行阐释。将表1中的处方组成与药理实验数据进行二次多项式逐步回归分析,结果见表3~5。止咳实验的回归方程:Y=35.5188-0.4878X2-0.0560X1×X1-0.0160X3×X3+0.0251X1×X2+0.0006X1×X3-0.0191X1×X4,(R﹥0.95,P﹤0.05),其各因素最优比例为X1(30.28):X2(29.11):X3(18.77):X4(10.94);化痰实验的回归方程为:Y=36.7528+2.0739X1+2.1449X3-0.1047X1×X1+0.1357X2×X2-0.4073X3×X3+0.1747X1×X4,(R﹥0.95,P﹤0.01),其各因素最优比例为X1(1.97):X2(2.06):X3(1.25):X4(0.70)。以上数据表明,在两个药理指标中四味药的比例与原方中各药比例几无明显差异。3.6复配实验方法学精密称取最佳处方(即原方:半夏15g,陈皮15g,茯苓9g,甘草6g),按照3.2中方法制备样品溶液备用。止咳实验的阳性对照使用复方可待因,化痰实验的阳性对照使用2%的氯化铵水溶液;二者均使用0.9%生理盐水作为阴性对照,给药剂量均为0.1mL/10g,按照3.3和3.4中方法分别进行实验,并做方差分析,结果如表6。结果显示,各实验指标数据与阴性对照相比有显著性差异,且优于代入回归方程所得的理论值。4茯苓、甘草的配比对临床疗效的影响经混料均匀试验设计,综合以上两个药理指标,对复方中药二陈汤的配伍关系和配伍剂量进行分析,结果如下:根据各组试验关联度分析以及二次多项式逐步回归分析结果,方中半夏与陈皮对于各药理指标,均系影响药效的主要因素,证明方中半夏辛温而燥,最善于止咳化痰为主药;辅以陈皮理气,燥湿化痰,使气顺痰消的科学论述;茯苓与甘草两味药,均不是影响药效的主要因素,但总体来看,又都体现出一定的辅助增强药效的作用,这一点也符合佐以茯苓健脾渗湿,湿无所聚,则痰无由生;使以甘草和中健脾,调和诸药,脾运健则湿自化,湿已去则痰自消的方解的论述。同时从各药的不同水平来看,半夏与陈皮都体现出乐一定的用量依存性。根据二次多项式逐步回归分析结果,所得到的处方中各药的最佳配比与原方并无明显差异,故我们维持原处方量不变,即半夏15g,陈皮15g,茯苓9g,甘草6g。本实验在一定程度上证明了传统中医理论关于复方中药君臣佐使的配伍关系及组方规律,同时也表明了二陈汤组方的科学性。5两个病理指标的选择存在着一定的局限性由于拆方试验研究有很多种方法,而每个方法都存在自身的局限性,本研究采用的混料均匀设计法尽管在一定程度上比其它方法有所提高,但也不可避免存在着一定的弊端,主要是数据统计分析方法选择的局限和统计过程