鹰嘴豆豆叶和豆茎中总多糖的测定

鹰嘴豆豆叶和豆茎中总多糖的测定

鹰嘴豆是布尔医学中常用的药物。维吾尔族用它治疗支气管炎、黏膜炎、霍乱、便秘痢疾、消化不良、肠胃气胀、毒蛇咬伤、糖尿病、性欲降低、皮肤瘙痒、高脂血症、中暑等疾病。在中医上,鹰嘴豆可以调节湿度,有止泻、解毒、壮身等作用,它的花可以治疗痢疾,浸泡水后服用可以治疗中药中毒和白带增多等。籽粒可做利尿剂、催奶剂,可治疗失眠、预防皮肤病等。多糖广泛存在于自然界,是多种中草药的有效成分之一,具有多种生物活性,是理想的免疫增强剂。能提高机体免疫系统的功能,对正常细胞没有毒副作用,在抗肿瘤,抗病毒,抗衰老等药物研究中,多糖类药物的研制已成为当今世界新药的开展方向之一。多项研究已经充分表明多糖无毒副作用,来源广泛,生物活性高,必将为高效低毒药物开发开辟广阔的前景。鹰嘴豆的食用及药用价值已经受到广泛的关注,鹰嘴豆中各种成分的分析已经做得很详细,但是豆茎、豆叶、豆荚中的成分分析没有见到报导。本次课题的研究目的是利用分光光度法的检测技术,检测鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚中总多糖的含量,为鹰嘴豆的全面开发利用提供科学依据。1样品的分析纯分光光度计,蒽酮、浓硫酸、95%乙醇、无水乙醇、氯仿、正丁醇均为分析纯,鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚样品(2009年采于新疆木垒)。2方法和结果2.1运移法浓缩运热法分别称取干燥至恒重过40目筛的鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚粉末100g,加水适量,于95℃时超声提取30min,过滤,滤渣于95℃时再超声提取30min,共提取3次,合并提取液,于旋转蒸发仪上浓缩至100ml。在其中加95%乙醇至含醇量达80%,4℃时静置过夜。40000r/min下离心分离,离心后的沉淀物加少量热水溶解后,再加95%乙醇至含醇量达80%,静置过夜,离心分离。将得到的粗多糖溶于热水,用Sevag法(氯仿∶正丁醇=4∶1)除蛋白8次。加1%活性炭脱色,抽滤,加入乙醇使含醇量达80%,静置过夜,离心分离。沉淀物置于60℃的真空干燥箱中干燥,即得精制的淡黄色的鹰嘴豆豆茎,豆叶多糖。将精制后的多糖在260nm～280nm区间扫描,结果显示无吸收峰,说明蛋白基本除尽。2.2标准溶液的制备精密称取葡萄糖对照品0.1000g,用蒸馏水溶解并定容至100ml,配成浓度为1mg/ml的标准储备液。2.3回归方程精密吸取葡萄糖标准溶液0.0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml于10ml的容量瓶中,用蒸馏水定溶至刻度。分别取2.0ml至25ml具塞试管中,加蒽酮-浓硫酸(0.2g∶100ml)试剂4ml,放入沸水中加热8min,迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度。用吸光度对浓度回归,得回归方程:A=0.0294C-0.0325,r=0.9996。线性范围为3.333～166.7μg/ml。2.4多糖含量的测定精密称取精制的多糖0.1000g,用少量热蒸馏水溶解后定溶于100ml容量瓶中,摇匀。精密吸取此溶液2ml至25ml具塞试管中,加蒽酮-浓硫酸试剂4ml,放入沸水中加热8min迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度,根据标准曲线计算浓度,再按下式计算换算因子:f=W/CD式中W为多糖质量(mg),C为多糖的浓度(μg/ml),D为稀释因素。得豆茎:f=6.265豆叶:f=4.608豆荚:f=3.216。2.5多糖含量的测定分别准确称取鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚粉末0.5g(4份),置于100ml容量瓶中,加水适量,在95℃时超声提取30min,过滤于另一100ml容量瓶中,滤渣用蒸馏水洗涤多次,用水定溶至刻度。精密吸取样品溶液2.5ml置25ml容量瓶中,加水稀释刻度。精密吸取此溶液2.0ml置于25ml具塞试管中,加入蒽酮-浓硫酸试剂4m,放入沸水中加热8min,迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度。含量(%)=CDf/W×100%式中W为多糖质量(mg),C为多糖的浓度(μg/ml),D为稀释因素,f为换算因子。鹰嘴豆豆茎多糖的平均含量为11.4%(n=4),RSD=1.3%。鹰嘴豆豆叶多糖的平均含量为12.6%(n=4),RSD=1.1%。鹰嘴豆豆荚多糖的平均含量为8.7%(n=4),RSD=0.98%。2.6浓硫酸溶液法分别精密吸取对照品溶液1.0ml,于25ml具塞试管中,加1.0ml蒸馏水,加入蒽酮-浓硫酸试剂4m,放入沸水中加热8min,迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度。求的其RSD分别为:0.83%;0.97%;1.1%(n=5)2.7对照品溶液的制备分别准确称取鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚粉末0.5g(8份,分为4组),置于100ml容量瓶中,第一组为本底,后面三组分别加入0.1ml,0.2ml,0.3ml的对照品溶液,按2.5项下操作。于620nm处测定吸光度。测得豆茎、豆叶、豆荚平均回收率为98.01%;99.21%、101.2%3结果与讨论3.1总多糖含量的测定(1)分光光度法测定鹰嘴豆豆茎、豆叶中总多糖含量。方法灵敏度高,其准确性、重现性、线性关系、稳定性均能达