益智宁神颗粒对儿童注意缺陷多动障碍adhd模型大鼠认知功能的影响

益智宁神颗粒对儿童注意缺陷多动障碍adhd模型大鼠认知功能的影响

儿童应该注意多动障碍。这是学龄儿童中发病率高的心理行为障碍疾病，可能会严重影响儿童的身心健康和学习能力。导师马融教授开展儿童多动症专病研究多年,结合丰富的临证经验,首次提出“益肾填精,宁神益智”的治疗法则,并总结出治疗ADHD的有效方剂——益智宁神颗粒。本实验应用目前国际上使用最为广泛的ADHD动物模型——自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensiverat,SHR),通过对Morris水迷宫的实验数据进行分析,评价各种药物对ADHD动物模型认知功能的改善情况。实验方法1.大鼠智宁神模型将二级健康SHR清洁级雄性幼鼠48只,4周龄,体质量(50±10)g,随机分为6组,益智宁神高剂量组,益智宁神中剂量组,益智宁神低剂量组,静灵口服液组,利他林组,模型组。将二级健康8只Wistar大鼠,体质量(50±10)g,设为正常对照组。试验大鼠均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。2.模型组及培养时间中药组按高、中、低给药剂量分别灌服益智宁神颗粒,给药剂量分别为37.5g/kg,28.125g/kg,18.75g/kg,每日1次,持续7d。静灵口服液组灌服静灵口服液12.5ml/kg,每日1次,持续7d。利他林组灌服利他林6.25mg/kg,每日1次,持续7d。模型组予蒸馏水10m1/kg,每日1次,持续7d。正常对照组不作处理。3.不同剂量树,生药量高,剂量低益智宁神颗粒:由紫河车、熟地黄、远志、泽泻、石菖蒲、黄连等组成,江阴天江药业有限公司提供,批号:0512。按高、中、低给药剂量以蒸馏水配成(每次灌胃时当场配置),生药含量分别为3.750g/ml,2.81253g/ml,1.875g/ml。利他林片:苏州第一制药厂生产,批号:041225。每次灌胃时当场配置,所配悬浊液浓度0.625mg/ml。静灵口服液:由熟地黄、山药、茯苓、牡丹皮、远志、泽泻、龙骨、女贞子、黄柏、知母、五味子、石菖蒲等组成,辽宁本溪市中药厂生产,批号:20040506。可直接灌胃。4.菲比水宫殿的实验4.1水池等的空间事物安排Morris水迷宫及其测试软件由中国医学科学院药物研究所提供本实验。由直径120cm,高50cm的圆形水池(黑色)组成。随意将水池等分为4个象限(东北,东南,西南和西北象限)。每天实验水温保持在(20+-2)℃。圆柱形平台(黑色)可置于任一象限中央。水池四周存在丰富的空间参照物(门、窗、灯、桌椅及实验者等),且位置保持不变。一摄像头置于水迷宫中央的上方,可自动采集和分析逃避潜伏期等数据。给药结束后,进行适应性实验1d,工作记忆测试4d,排除视觉影响测试1d,以评价各组药物对大鼠认知功能的影响。4.2适应性实验4.3平台内定位问题本实验根据1999年Wainwright首次提出的应用Morris水迷宫测试大鼠工作记忆即短暂记忆功能的方法,对各组大鼠进行测试。测试共4d,4次/d,平台位置在每天4次测试中固定不变,但每天更换所在象限。平台没于水面下2cm,其中点离池壁30cm。每个象限选一点,共4点作为入水点,训练时分别从4个入水点将动物面朝池壁轻轻放入水中,记录大鼠从入水至找到平台的时间为逃避潜伏期,然后让大鼠在平台上停留l0s,再放回笼中。如果90s内找不到平台,潜伏期记为90s,并将大鼠引导至平台上并停留l0s,前3次连续不寻找平台的大鼠筛除。以潜伏期作为这一天的成绩进行统计分析。4.4入水点对动物的影响调节水面高度,使平台高于水面2cm,将潜伏期<10s的大鼠分别从3个入水点将动物面朝池壁轻轻放入水中,进行测试。以潜伏期作为这次的测试成绩进行统计分析,以排除视觉影响。5.小组精神处理工作记忆测试前1d,先让动物在不含平台的水池中自由游泳2min,使其熟悉迷宫环境。所有数据用表示,并用spss10.0统计软件进行处理。P<0.05为显著差异。结果1.对认知功能的影响见表1-表4,图1。第3天第1次测试时,正常对照组与模型组即开始出现显著差异(P<0.05),说明模型组大鼠的认知功能明显降低。从第3天第3次测试开始,益智宁神高剂量组与模型组比较有显著差异(P<0.05);第4天第1次测试开始,益智宁神中、低剂量组,静灵口服液组与模型组比较亦有显著差异(P<0.05),且以上差异均能持续到最后1次测试,说明益智宁神各剂量组、静灵口服液组可以持续性地显著改善认知功能,且益智宁神高剂量组起效时间早于其他治疗组。利他林组始终与模型组无显著差异,说明该种西药对认知功能无明显作用。除利他林组外,其余各治疗组之间,组间比较P>0.05,说明在改善认知功能方面无明显差异。2.排除视觉影响测试各组最后1天测试潜伏期<10s的大鼠,上台时间无显著差异,说明潜伏期的显著变化与视觉无关。见表5。智宁神颗粒—讨论ADHD是儿童中常见的以活动过度和注意力缺陷为主要特征的一种行为障碍综合征。导师马融教授结合临证经验,认为本病以肾精亏虚为主要特点,因为肾为先天之本,生命之根,主藏精,肾精所化生之肾气,通过三焦巡行全身,是机体各种生命活动的原动力,可以调节人体各个脏腑、经络等组织器官的生理功能,所以患儿常见的临床症状表现,如肝肾阴虚、脾虚肝旺、心脾不足等方面证候,实际是由于肾精亏虚引起的。所以导师针对肾精亏虚,首次提出“益肾填精,宁神益智”的治疗法则,并总结出治疗ADHD的有效方剂——益智宁神颗粒。方中紫河车,味甘、咸、温,入肾经,养血益精;熟地黄,甘、微温,入肝、肾经,滋阴补血。两者共为君药,可“益肾填精”,以达治动之本。石菖蒲、远志共为臣药,其中石菖蒲,辛、微温,入心肝经,开窍、豁痰、理气、活血;远志,辛温,入心肾两经,功可安神益智,解郁。两药相和,可宁神益智,以达治动之标。泽泻,甘寒,入肾经,有泻热之效,为佐药,可佐诸药之辛温,以免温燥太过。黄连为使药,性味苦寒,入心肝经,可泻心肝之火热。综观全方,共奏“益肾填精,宁神益智”之功,最终标本兼治,使临床症状得到改善。ADHD儿童智力大多正常或接近正常,但由于存在多动、注意力集中困难、冲动等症,给学习带来困难,但记忆力往往正常。在测试中,正常对照组大鼠的逃避潜伏期随训练天数的增加而缩短,学习成绩每天均有较明显的进步;模型组没有表现出这种趋势,整个训练过程中其逃避潜伏期均维持在较高的水平,说明模型组大鼠的学习过程明显延长,其学习获取能力即认知功能明显低于正常大鼠。从第3天开始益智宁神高剂量组,第4天开始益智宁神中、低剂量组,静灵口服液组可以持续性地显著缩短逃避潜伏期,改善认知功能,且益智宁神高剂量组起效时间早于其他治疗组。利他林组虽有缩