乳腺癌原发灶和淋巴结转移灶中er、pr、her-2及ki-67表达的相关性研究

乳腺癌原发灶和淋巴结转移灶中er、pr、her-2及ki-67表达的相关性研究

肿瘤的发生和发展是一个复杂的过程，有许多因素和步骤。肿瘤异质性是影响肿瘤治疗效果和预后的最重要因素之一。乳腺癌肿瘤组织雌激素受体(estrogenreceptor,ER)、孕激素受体(progestinreceptor,PR)和表皮生长因子受体(humanepidermalgrowthfactor,HER-2)表达对预后的判断及治疗方案的选择具有重要的指导意义。临床治疗中对于乳腺癌的辅助治疗既往主要根据病期、原发灶中ER、PR与HER-2的表达状况判断,而忽略了转移灶中三者的表达变化情况以及是否影响患者的治疗及预后的判断。近年来,对于乳腺癌原发灶与转移灶中ER、PR与HER-2表达差异的研究报道不尽相同。本研究检测83例乳腺癌患者原发灶与转移灶组织中ER、PR、HER-2及Ki-67的表达状况,并对其相关性进行分析。1材料和方法1.1研究对象的选取2012-01-01-2012-09-30山东省肿瘤医院外科二病区手术治疗的女性乳腺癌患者236例,选取其中术后病理确诊同侧腋窝淋巴结转移患者83例作为研究对象。年龄24~73岁,中位年龄47岁。按照2003年TNM分期,Ⅱ期48例,Ⅲ期27例,Ⅳ期8例。1.2试剂和方法1.2.1itingsp超敏试验试剂DAB显色剂和UltraSensitiveSP超敏试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司,乙醇、二甲苯等其他试剂由山东省肿瘤医院提供。1.2.2脱苯、重建和复生物素nd-pcr术后切取乳腺癌原发灶和腋窝淋巴结标本,10%甲醛溶液固定,同时取乳腺癌原发灶标本与病理确诊的转移腋窝淋巴结,4μm连续切片,于同一载玻片在相同的条件与时间下,经二甲苯脱蜡、梯度乙醇脱苯入水。3%H2O2处理后用PBS充分洗涤,用微波炉进行抗原热修复,ER、PR和HER-2用枸橼酸缓冲液修复,Ki-67用EDTA缓冲液进行修复,热修复后,让其自然冷却至室温,加ER、PR、HER-2以及Ki-67单克隆抗体,每片50μL放置于湿盒中,4℃冰箱过夜。恢复至室温后,PBS冲洗后滴加生物素标记的二抗,室温孵育后PBS充分冲洗。加辣根酶标记的链霉卵白素室温孵育,PBS充分冲洗,DAB显色,苏木精复染,中性树胶封片。用已知的阳性切片做阳性对照,PBS替代一抗作为阴性对照,显微镜下观察并拍照。1.3诊断见表2原发灶与转移灶分别随机选择5个高倍视野,计数500个以上细胞。以胞核着色判断为阳性,根据阳性细胞数计分,无阳性细胞计0分,阳性细胞数1%~30%计1分,>30%~70%计2分,>70%~100%计3分;再根据阳性着色强度,浅棕色计1分,棕黄色计2分,深棕色计3分,每张切片进行两项分数累计,0分为阴性,≤2分为(+),3~4分为(++),5~6分为(+++)。其中ER、PR与Ki-67(+)以上均记为阳性,HER-2(+++)者为阳性,其中所有HER-2(++)为可疑阳性的患者均行FISH检测,FISH结果阳性者记HER-2阳性,结果为阴性的仍记为阴性(图1)。Ki-67表达依据2011年国际乳腺会议确定标准,Ki-67<14%为低表达,≥14%为高表达。1.4统计学分析实验数据均采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析,计数资料采用百分率表示,组间比较采用χ2检验,采用spearman相关分析不同标志间的关联。检验水准α=0.05。2结果2.1原发灶与转移灶之间的差异表1和表2所示,原发灶中ER阳性和阴性表达分别为55例和28例,转移灶中分别为47例和36例,原发灶与转移灶ER表达一致,即阴/阴或阳/阳分别为26例和45例,共71例,一致率为85.5%,变化率为14.5%。ER在原发灶与转移灶之间的表达差异有统计学意义,P=0.039。原发灶中PR阳性和阴性表达分别为55例和28例,转移灶中分别为51例和32例,原发灶与转移灶PR表达一致,即阴/阴或阳/阳分别为49例和26例,共75例,一致率为90.4%,变化率为9.6%。PR在原发灶与转移灶之间的差异无统学意义,P=0.289。原发灶中HER-2阳性和阴性表达分别为16例和67例,转移灶中分别为11例和72例,原发灶与转移灶HER-2表达一致,即阴/阴或阳/阳分别为65例和9例,共74例,一致率为89.2%,变化率为10.8%。HER-2在原发灶与转移灶之间的差异无统计学意义,P=0.180。2.2转移灶与ki-97低表达的关系表3和表4所示,原发灶中Ki-67低表达者40例,高表达者43例。转移灶中Ki-67低表达者43例,高表达者40例。统计学分析显示,原发灶Ki-67高表达和转移灶Ki-67低表达与ER表达相关,P=0.031。Ki-67在原发灶与转移灶的表达水平与PR和HER-2表达无关,P>0.05。3er、pr、her-2在原发灶与转移灶之间表达的差异乳腺癌具有异质性,由于一系列乳腺癌相关基因的异常表达,基因的不同表达组合可以提示肿瘤患者预后以及预测治疗效果。通过免疫组织化学检测ER、PR、HER-2与Ki-67的表达可以对乳腺癌进行分子分型,便于制定治疗策略。2007年ASCO会议建议应该对所有乳腺癌患者原发灶均行ER、PR与HER-2免疫组化检测,如果结果影响治疗方案,也需对转移灶的ER、PR与HER-2进行免疫组化检测。近年来研究发现,乳腺癌原发灶和淋巴结转移灶之间ER、PR及HER-2的表达存在差异。2011年,邓智平等研究发现,ER在原发灶和复发转移灶之间差异有统计学意义,变化率为66.67%;PR与HER-2在原发灶和复发转移灶的表达差异无统计学意义,变化率分别为17.78%和13.33%。而赵海波等报道ER、PR与HER-2在原发灶和淋巴结转移灶之间差异均无统计学意义。该研究发现ER在乳腺癌原发灶与转移灶之间表达差异有统计学意义,PR与HER-2在原发灶与转移灶的表达差异无统计学意义。Sara等研究发现,ER和PR在原发灶与转移灶表达一致率分别为81%和65%。本研究中ER在原发灶与转移灶表达一致率为85.5%,PR表达一致率为90.4%,略高于上述研究。Lower等对382例乳腺癌复发转移患者HER-2的研究发现,254例(66%)原发灶和转移灶是一致的,90例原发灶阳性而转移灶阴性,37例原发灶阴性而转移灶阳性。Sara等报道HER-2在乳腺癌原发灶与转移灶表达一致率为71%。该研究中发现HER-2在原发灶与转移灶表达一致率为89.2%,有较高一致率,且不一致的病例大部分为原发灶阳性而转移灶阴性,这可能提示肿瘤在向淋巴结转移过程中体内某种机制抑制了HER-2的表达。Ki-67抗原是存在于增殖细胞核的一种核抗原,能有效反应肿瘤细胞增殖活性,是目前已知的肿瘤增殖抗原中最具增殖能力代表性、应用最广泛的标志之一。Tawfik等研究发现,检测淋巴结Ki-67的表达状况要优于评估原发灶Ki-67的表达,并且有助于选择治疗方案。本研究结果显示,原发灶Ki-67高表达和转移灶Ki-67低表达与ER表达相关,P=0.03