中药火炬花根对抗-hy1肾炎大鼠足细胞病变及足突融合的影响

中药火炬花根对抗-hy1肾炎大鼠足细胞病变及足突融合的影响

慢性肾衰竭在中国仍然是导致慢性肾衰竭最常见的原因之一。系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)是我国原发性肾小球疾病中最常见的病理类型,目前在临床上尚无特效治疗,大多数患者最终发展至终末期肾病。寻找有效的治疗方法,减少蛋白尿,延缓肾衰竭,在临床上具有重要意义。火把花根是一种纯中药制剂,临床上用于治疗风湿性关节炎及系统性红斑狼疮,最近有文献报道用于治疗慢性肾炎,我们在临床上也应用此药治疗慢性肾炎患者,部分病人蛋白尿减少,取得了一定的效果。但此药对肾炎患者的肾脏病理的影响如何,以及对肾功能是否具有远期保护作用仍不明确。我们应用兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清(anti-thymocyteserum,ATS)复制大鼠系膜增生性肾小球肾炎模型,应用火把花根进行治疗,观察大鼠蛋白尿、肾脏病理改变,并用免疫组织化学方法测定系膜区细胞外基质成分——纤维连接蛋白(FN)沉积,以评价火把花根治疗肾炎的疗效。材料和方法1抗胸腺细胞血清的制备参照裘奇等的方法制成粗制的IgG。测定蛋白浓度后,56℃,30min灭活补体,于-20℃保存。2尾静脉粗制免疫指标雄性SD大鼠45只,由同济医学院实验动物中心提供。造模前经1周观察,室温条件下饲养,自由饮水、进食。将动物随机分为正常对照组(对照组)、肾炎模型组(模型组)、火把花根治疗组(火把花根组),每组15只。后两组大鼠尾静脉注射粗制免疫球蛋白31mg/kg和正常兔血清6.6ml/kg,对照组大鼠尾静脉注射等量生理盐水。治疗组自实验第1d～28d,每天用火把花根(4g/kg)制成的悬液灌胃,其余两组灌服等量生理盐水。3尿蛋白测定用药第1、2、4周末代谢笼收集24h尿,用双缩脲法测定尿蛋白。4透照电镜检查超微病理检查于第1、2、4周末各组处死5只大鼠,取肾组织部分4%多聚甲醛固定以进行常规病理检查及免疫组织化学染色,另一部分2.5%戊二醛固定行透视电镜超微病理检查。采用ABC法检测肾组织中的FN,试剂盒购自武汉中山生物公司,按说明操作。结果用HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统,测量肾小球中染色阳性的系膜基质面积与整个肾小球的面积的比值,并用此比值与平均灰度的乘积加以校正。每张标本均按顺序选10个视野,以其均值作为该标本的最后结果。结果1火根火根对肾功能大鼠的尿蛋白有影响注射ATS后大鼠尿蛋白定性+++,模型组各时间点尿蛋白定量显著高于对照组,治疗组尿蛋白较模型组显著下降(P<0.01)。见表1。2免疫组化染色病理观察对照组肾小球及肾小管间质正常;模型组系膜细胞及系膜基质增生,小管间质炎症细胞浸润;治疗组系膜细胞及基质增生较模型组减轻,小管间质改变较模型组改善。免疫组化染色对照组系膜区肾小球及肾小管间质仅少量FN沉积;模型组沉积增加,肾小球内见棕黄色FN沉积,小管中也有少量FN沉积;治疗组较模型组显著减少。计算机分析FN沉积量,两个治疗组FN表达显著低于对照组(P<0.01),火把花根组较泼尼松组下降更显著(P<0.01)。见表2。3节段与足突排列透射电镜检查显示:正常组肾小球大小一致,毛细血管襻排列规则;内皮细胞无增生及肿胀;基底膜厚度一致,无电子致密物沉积;足细胞无肿胀,足突排列整齐;系膜基质无增生,系膜区未见电子致密物沉积。模型组:肾小球大小不等,部分肾小球毛细血管襻皱缩于血管极一侧,毛细血管襻排列不规则;足细胞肿胀,大部分节段足突弥漫性融合;系膜基质轻度-中度增生,系膜区可见散在电子致密物沉积;火把花根组:肾小球大小一致,毛细血管襻排列基本规则;足细胞无明显肿胀,大部分节段足突排列整齐,少数节段足突部分融合;系膜基质无明显增生,系膜区未见明显电子致密物沉积。治疗可显著减轻系数总fn蛋白表达,及我国小鼠血清nd-mspg表达火把花根是卫茅科雷公藤属植物昆明山海棠,以去皮之根心入药,是一种纯中药制剂。我们的结果表明,应用火把花根可显著减少肾炎大鼠的蛋白尿,此与临床应用结果一致。为观察其对病理改变的影响如何,我们在不同时间点(第1、2、4周末)对各组动物进行了病理组织学检查,可见火把花根系膜增生较模型组显著减轻。用免疫组化方法测定系膜基质成分之一的FN蛋白成分在肾小球的沉积量,见对照组肾组织系膜区仅有微量FN蛋白表达,模型组系膜区FN蛋白表达显著增高,治疗组FN蛋白表达较模型组显著下降(P<0.01)。以上结果表明火把花根不仅可在临床上减少蛋白尿,而且从病理组织学上可显著减轻系膜细胞及基质的增生,减少细胞外基质(ECM)成分FN的表达,减轻ECM聚积。由于其具有减少ECM沉积的作用,而肾小球肾炎在发展至终末期肾病的过程中,最主要的病理改变是肾小球ECM的堆积,故火把花根可以达到延缓肾病的进展及肾小球增生硬化的发生的作用。兔抗大鼠胸腺细胞抗体诱发大鼠MsPGN即抗-Thy1肾炎,是到目前为止公认的比较典型的模仿人类MsPGN的动物模型。其主要特征是:病理表现为系膜细胞增生和基质增多,病变修复过程迅速,一般在30d～50d之内病变的肾小球几乎全部恢复正常。以往对此模型的研究主要观察了系膜细胞及基质的增生,而无关于此模型足细胞改变的报道。足细胞是构成肾小球滤过屏障外层的主要成分,它是一高度分化和特异化的细胞,胞体伸出许多足突敷衍于肾小球基底膜,足突间的裂孔隔膜(slitdiaphragm,SD)以大小选择性方式来限制血浆蛋白进入尿路,构成阻止血浆蛋白丧失的最后屏障。近年来许多学者研究表明足细胞变化与蛋白尿及肾小球硬化密切相关。我们通过超微病理